gapdh引物序列
关于pcr引物设计:我做反转录pcr,目的基因是大鼠ACE2和ACE。
3、最后再回到ncbi的genebank，用你得到的引物去检索，核对下序列是否完全正确。有时老外的资料也是有错的 相对定量PCR。引物设计有一定要求，片段长度已经说了，同时要做一个看家基因做对照（如果用Delta Delta Ct的方法更是必须的）。看家基因有beta-actin、GAPDH、Glubin、ABL等。文献中有些现成的引物...
如何根据rt-pcr的电泳结果确定基因的表达情况
3.诱变引物是什么啊(引物,诱变,基因,反应体系)4.扩增产物大小不对的问题(扩增产物,细胞株,条带)5.三段PCR扩增产物酶切后直接连接，可行吗(酶切,扩增产物,载体)6.荧光定量PCR的扩增产物长度为何不能太长(扩增产物,荧光定量)7.求RealTime PCR 内参引物序列GAPDH或Actin(内参引物序列,扩增曲线,溶解...
PCR的原理
(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③引物的延伸:DNA模板--引物结合 物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程,就可获得更多的...
定量PCR,半定量PCR和相对定量PCR有什么差异
③使用非竞争性内参照物的定量：PCR反应条件同样，在同一试管内，用两对引物，同步扩增来自同一DNA的一段靶序列和另一段内标 序列。通过比较两种序列的扩增产量可对靶序列定量:方法A、设计并合成PCR扩增靶基因及无关基因的引物，优化引物配比的条件。方法B、在指数增长期实现 对靶基因及一系列已知含量无...
半定量pcr内参基因扩增条件和目的基因扩增条件一样吗
或者使靶序列发生定点诱变人工合成竞争性模板.竞争性模板设计目的：使其与靶基因的PCR扩增产物相区别（通过酶 切、杂交、显色等手段实现）.常用的荧光定量为TaqMan探针技术,他特异的和目的片段结合,只是用的是TaqMan.半定量RT-PCR用做内参照,也应该是第三种,只是它是普通PCR,通过电泳的条带强弱,与GAPD...
为什么做PCR前要除去DNA样本中的蛋白
原理：利用PCR高度的特异性，通过特定的引物能在复杂样品中得到的特定序列的DNA，而这种特定DNA的产量跟反应初始阶段模板量是直接相关的。简单说来。经过一个PCR循环，可以把一个模板变成两个，在经过一个循环，就会变成四个，以此类推。如果PCR的检测线是1000个产物，那么当你的初始样品中模板是n个，那...
怎么用跑胶软件测 目的基因和内参的半定量 比值
或者使靶序列发生定点诱变人工合成竞争性模板.竞争性模板设计目的：使其与靶基因的PCR扩增产物相区别（通过酶 切、杂交、显色等手段实现）.常用的荧光定量为TaqMan探针技术,他特异的和目的片段结合,只是用的是TaqMan.半定量RT-PCR用做内参照,也应该是第三种,只是它是普通PCR,通过电泳的条带强弱,与GAPD...
RT-PCR的原理是什么?有何用途?
2， 再说实时PCR细胞瞬时转录的mRNA种类颇多，各种mRNA含量也有实时的改变，这反映了细胞核内转录因子根据环境要求在做出相应的变化，realtime-PCR，以及quantitative realtime-PCR （简称qRT-PCR）就应运而生。原理：利用PCR高度的特异性，通过特定的引物能在复杂样品中得到的特定序列的DNA，而这种特定DNA的...
洛浦县依利回答： 做RT首先确定RNA没有问题,这是前提;然后你这对引物,即使是直接扩增DNA也比较困难,给你俩建议,第一,尽量把突变的碱基放在最5端的位置,你的下游引物突变点有点靠近中间了,不是特别好;第二,把你的引物加长一些或者是设置在GC含量相对高一点的位置以使其退火温度高于60度,这样只要你的RNA没有问题就一定做得出来.你要想用现在的这对引物可以,建议你换好的酶,不然不好做.PP并不是设计引物好的软件,但不知道为什么国内都用它,其实它很业余.
汲媛18434235622问： 看家基因GApDHmRNA引物是什么东西?有什么用?成分 - ？
洛浦县依利回答： 有,GAPDH是三磷酸甘油醛脱氢酶,是糖酵解途径中的关键酶.糖酵解途径就是将葡萄糖转化为ATP的过程,负责为生物体提供能量,几乎所有的生物都有该途径.因此GAPDH常常被用来作为内参基因,另外还有β-actin、Ubqutin等由于其广泛存在,也可作为内参基因.
汲媛18434235622问： 本人做荧光定量PCR,对照基因怎么弄啊,计划对照基因是GAPDH,能帮忙弄个序列么 - ？
洛浦县依利回答： 人的么? Forward primer AGAAGGCTGGGGCTCATTTG 20 54.41 55.00% Reverse primer AGGGGCCATCCACAGTCTTC 20 55.59 60.00%
汲媛18434235622问： 在做RT - PCR时需内参照,怎样获得内参照及其使用? - ？
洛浦县依利回答： 可以去文献里找,一般GAPDH和bate-actin用的比较多.引物序列就在文献里找即可,文献尽量选影响因子大一些的,找好序列以后在pubmed中核对一下,然后送去公司合成
汲媛18434235622问： 通过rt - pcr怎么计算沉默效率 - ？
洛浦县依利回答： 缩短暴光时间本来就使带变暗,如果再进一步缩短暴光时间,可能其他的带也不清楚了.还是考虑电泳体系的问题: 1. 首先考虑是你的电压可能有点高,降低电压后适当延长时间可以改善. 2. 2.胶灌的如何,MARKER好象有点变形 3. 3.加样问...
汲媛18434235622问： RT - PCR中内参蛋白GAPDH和b - actin人和小鼠的可以用同一对引物吗 - ？
洛浦县依利回答： 要看你设计的时候,是不是设计在小鼠和人的同源序列上了,是的话,就可以通用.
汲媛18434235622问： 请给我解释一下RT - PCR的图,谢谢 - ？
洛浦县依利回答： 你要解释什么?解释表达量差异么?如果是,请自行学习quantity one软件.其实你完全可以考虑用实时定量PCR来做这些实验.现在这种半定量RCP已经基本不能发文章了.顺便说一下,你的GAPDH扩增的不行呀,很多没有主条带.
汲媛18434235622问： 我要做CTGF和BMP - 7的反转录RT - PCR,引物如何设计?内参怎么选择?GAPDH和b - actin哪个能用?谢谢 - ？
洛浦县依利回答： 可以去影响因子较高的文献里找,然后去pubmed中blast一下就好;也可以用引物设计软件合成,合成原则在网上都可以找到的,合成好了也要blast.两个都是看家基因,均可作为内参,我们实验室用的是GALDH
汲媛18434235622问： 引物设计在文献上找到引物的序列,但是不知道扩增后是多少bp,所以 ？
洛浦县依利回答： 我很奇怪,你写的序列怎么没有方向呢?哪端是3'端?哪端是5'端?如果开头那个部分是5'端的话,你的一对引物的序列分别为: 5'—gaatgtacgtgccgc—3' 5'—actagctacaatcc—3' 引物的长度一般是15-20个碱基的长度,要按照碱基互补原则进行设计,序列的头部和尾部个一条,一定要注意链的方向~
汲媛18434235622问： 关于pcr引物设计:我做反转录pcr,目的基因是大鼠ACE2和ACE. - ？
洛浦县依利回答： 首先,要看你的目的.如果你只是做鉴定,或者做reverse real-time PCR定量,那么扩增的片段最好是100-300bp,显然这不是全长的.而该片段的要求是要保守. 2、看来你是新手,我的建议是在pubmed上查文献,肯定有人用过,关键词是...
