gapdh内参蛋白大小

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查育18867344267问： 36kd的蛋白算是大蛋白还是小蛋白 - ？
保康县美素回答： 常用的蛋白内参有 beta actin 和 GAPDH,它们是有区别的 GAPDH分子量为146KD,检测条带大约在36kD,beta actin分子量为42KD.一般选择内参与要检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上另外,细胞总蛋白的Western Blot的内参蛋白一般用 beta actin ,膜蛋白的Western Blot一般用GAPDH为内参

查育18867344267问： 做RT - PCR的时候为什么要设置标准反应体系和管家基因反应体系? - ？
保康县美素回答： 在做QRT-PCR时,一定要有内参,即在PCR时,每个标本都要做对应的内参,而且每次都是看家基因,一般用bate-actin,有时也用GAPDH.内参的选择:普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下.它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差,跑出的条带要进行灰度分析.用目的基因的积分光密度比上内参的光密度就是你这个基因实际表达的量.希望对你有所帮助.

查育18867344267问： WB试验之如何选择内参抗体 - ？
保康县美素回答： 你选择的目的蛋白位于什么地方~细胞核 胞质 线粒体~你要观察的是目的蛋白在哪一部分的含量~选择相应的内参~全细胞比如GAPDH HSP90AA1等~还有内参分子量要与目的蛋白分子量有一定差距~避免分不开~当然你可以选择不同种属的抗体来避免这个问题~

查育18867344267问： GADPH是什么 - ？
保康县美素回答： GAPDH是参与糖酵解的一种关键酶,由4个30-40kDa的亚基组成,分子量146kDa,检测条带大约在36kDa.GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达,广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参.因为GAPDH 作为管家基因在同种细胞或者...

查育18867344267问： 做RT - PCR内参的作用是什么?应该如何选择管家基因啊? - ？
保康县美素回答： 内参的选择:普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下 它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差.PCR时,每个标本都要做对应的内参,...

查育18867344267问： Western blot 内参跑不齐怎么调整 - ？
保康县美素回答： 第一,应该确认每个样品表达GAPDH的量一样,虽然是持家基因,本人觉得不同细菌可能表达量不一样,造成信号强弱不一样.可以通过考马斯亮蓝染色来确定上样量的差异,调整上样量一样再检测GAPDH. 第二,内参跑不齐.一般是跑胶...

查育18867344267问： Western Blot为什么必须要用内参 - ？
保康县美素回答： 内参作为一个参考物选用一个表达量相对稳定的蛋白,如actin,GAPDH等.不同方法处理细胞时内参的表达量不变,目的蛋白有可能会有变化.western中各泳道的内参的条带一样,那说明蛋白浓度一样.总蛋白浓度一样,目的蛋白条带宽度差异才能体现出目的蛋白表达量的差别.

查育18867344267问： 14 - 3 - 3蛋白western选用什么内参 - ？
保康县美素回答： 要检测蛋白分子量是在28~33kD之间?那内参可以选用a-tubulin(56kD)或者β-actin(42kD)GAPDH(36kD)可能稍微小了的

查育18867344267问： western里的 marker 和 内参都是做什么用的 - ？
保康县美素回答： marker可以估计目的蛋白的相对大小~内参是衡量上样量是否一致的~只有上样的总蛋白量保持一致~目的蛋白含量变化才有说服力~

查育18867344267问： western blot 的内参不一致,急求助 - ？
保康县美素回答： 要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot.因为Western Blot操作相对简单方便,既可以定性分析表达产物,同时还可以指示目的蛋白量的相对变化.虽然,顺利的时候Western Blot做起来...

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