如何根据rt-pcr的电泳结果确定基因的表达情况
从肽链短的向肽链长的方向移动
蛋白质 氨基酸脱水缩合形成蛋白质啊
转录主要在细胞核中 以DNA的一条链为模板 在RNA聚合酶的作用下 以细胞中游离的核糖核苷酸为原料 合成mRNA 转录完了以后 从核孔出来 到细胞质中tRNA 携带氨基酸 和 mRNA 碱基互补配对 配完对就形成肽链 盘曲折叠形成蛋白质啊
测mRNA浓度，把浓度调成一致再RT
缩短暴光时间本来就使带变暗，如果再进一步缩短暴光时间，可能其他的带也不清楚了。还是考虑电泳体系的问题：1.首先考虑是你的电压可能有点高，降低电压后适当延长时间可以改善。
2.胶灌的如何，MARKER好象有点变形
3.加样问题
建议用本次的样品重新跑个看看，排除一下电泳体系的问题。
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rt-pcr的原理是什么?有何用途?
一、原理 RT-PCR即反转录聚合酶链反应，是一种分子生物学技术。其基本原理是：1. 反转录：以RNA为模板，通过反转录酶合成DNA。2. 聚合酶链反应：利用DNA聚合酶对特定DNA序列进行扩增。具体过程为：先从细胞或组织提取RNA，然后通过反转录酶将RNA逆转成DNA，再以这段DNA为模板，利用特定的引物进行PCR...
rt pcr的原理及步骤
原理：RT-PCR 为反转录RCR（reverse transcription PCR）和实时PCR（real timePCR）共同的缩写.逆转录PCR,或者称反转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR),是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形.在RT-PCR中,一条RNA链被逆转录成为互补DNA,再以此为模板通过PCR进行DNA扩增.步骤：（一）预变性...
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RT-PCR有两种解释：1，最常用的理解：RT 是‘逆转录’（reverse transcription）的缩写 2，现在也有人这么用：RT是‘实时’（real time）的缩写 1，先说逆转录PCR：这项技术使用的‘逆转录酶’来自逆转录病毒，是一种能按照碱基互补配对原则，以脱氧核糖核苷酸为底物，以寡居dT为引物，把mRNA转换成...
RT-PCR的原理是什么?有何用途?
RT—PCR（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction）是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。原理是提取组织或细胞中的总RNA或者mRNA，在反转录酶的作用下将RNA或者mRNA反转录成cDNA，再以该cDNA第一链为模板进行PCR扩增，根据靶基因设计用于PCR扩增的基因特异的上下游...
rt-pcr原理
rt-pcr原理如下：只要是利用相关技术提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用反转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板经行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR可以用一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中，每一步都在最佳条件下进行。cDNA的合成...
RT -PCR操作步骤
RT-PCR操作步骤详解:首先，从组织或细胞中提取总RNA，确保RNA的质量和量适宜。通常，提取过程会涉及使用DEPC H2O稀释RNA样本，以及Oligo(dT)12-18作为引物。接着进行cDNA的第一链合成，以长沙赢润生物技术有限公司的试剂盒为例：在0.5ml微量离心管中，加入1-5μg总RNA，加入1μl Oligo(dT)12-18，...
RT -PCR简介
RT-PCR，全称为逆转录-聚合酶链反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction），是一项融合了RNA反转录（RT）和cDNA聚合酶链式扩增技术的生物实验方法。其基本流程是：首先，通过反转录酶的作用，将RNA分子转化为互补的cDNA分子；接着，利用cDNA作为模板，进行扩增，以获得特定基因片段。RT-PCR以...
RT-qPCR 基本原理
RT-qPCR可通过一步法或两步法来完成（图1、表1）。一步法RT-qPCR把逆转录与PCR扩增结合在一起，使逆转录酶与DNA聚合酶在同一管内同样缓冲液条件下完成反应。一步法RT-qPCR只需要利用序列特异性引物。在两步法RT-qPCR中，逆转录和PCR扩增过程是在两个管中完成，使用不同的优化的缓冲液、反应条件、...
RT-PCR从实验到写作,零基础教程
RT-PCR的具体步骤包括：提取RNA、合成cDNA、设计基因引物，然后按照制造商指南进行PCR。通过2-△△Ct方法分析目标基因的相对表达，例如，使用SensiFAST SYBR No-ROX试剂盒，内参选择GAPDH或U6。在定量分析中，如执行qRT-PCR，步骤如下：95°C预变性10分钟，40个循环，每轮包括95°C 15秒和60°C 1...
戚包海舒： 如果你做的是非常靠谱的绝对定量RT-PCR,可以根据标曲算.但实际上对包括RT-PCR在内的PCR产物浓度定量,更简单、更靠谱的办法是:1,加标准marker电泳,用照胶自动分析系统计算,可以大致定量,得其质量浓度;2,更准的是,回收PCR产物,用紫外分光光度计准确测定其质量浓度.“先算出模板链的质量然后用2的N-1次方算出扩增后DNA的数量相乘”,这是有误区的,实际的PCR反应不是理想的指数扩增过程,尤其是循环到了一定次数后.何况,还要考虑特异性的问题.如有疑问,欢迎继续讨论,纯属手打,欢迎采纳,祝愉快!
得荣县18838242395： 利用RT - PCR获得目的基因时,如何鉴定有没有DNA污染?如何设计实验防止污染? - ？
戚包海舒： 先电泳看看带的大小对不对,如果目的带清晰,而且没有太多的其他杂带,则可以进一步测序,如果实验室有条件的,可以在测序前,把PCR产物连接到T载体上,然后T载体去测序,测序后进行比对,看看跟扩增的是不是目的基因,如果是,从测序可以看出没有出现漏碱基或是移码之类的. 如果电泳结果出现很多杂带(包含目的带),则说明特异性不强,需要重新做PCR,把退火温度重新设定一下,一般是把退火温度调些.如果退火温度调高了,还是有很多杂带,则说明你的引物特异性不强,需要再重新设计引物. 你指的DNA污染是指什么?提RNA时在最后一步时,加上DNA酶,保温一段时间,PCR时,可以做空白对照,如果边空白对照都能扩增出条带,则说明你的试剂盒或是蒸馏水污染了
得荣县18838242395： RT - PCR数据分析 - ？
戚包海舒： 需要样本间平行比较.目的基因/GAPDH比值越大,说明目的基因表达量越高.比如1号样本目的基因/GAPDH比值等于0.5;2号样本目的基因/GAPDH比值等于0.8;那就说明2号样本中目的基因的表达量比1号样本高.
得荣县18838242395： SYBR green PCR溶解曲线有何意义 - ？
戚包海舒： 作用类似于电泳,但是相对于电泳更灵敏,更清晰一些. 通过溶解曲线可以了解目的产物TM值,是否出现杂峰.一般溶解曲线的结果+电泳的结果和在一起相对比较准确.当然最后片段也可以测序最终确定目的产物.主要的是:根据溶解曲线...
得荣县18838242395： RT - PCR如何用来分析基因的时空表达? - ？
戚包海舒： rt-PCR不知道基因的时空表达,但它能分析某个时空(时,发育阶段;空,取材组织或部位)的样本中mRNA的数量.mRNA被反转录成cDNA,实时监控每轮pcr后产物的量,达到分析不同mRNA的含量,mRNA的含量反映了基因的表达.
得荣县18838242395： 通过rt - pcr怎么计算沉默效率 - ？
戚包海舒： 缩短暴光时间本来就使带变暗,如果再进一步缩短暴光时间,可能其他的带也不清楚了.还是考虑电泳体系的问题: 1. 首先考虑是你的电压可能有点高,降低电压后适当延长时间可以改善. 2. 2.胶灌的如何,MARKER好象有点变形 3. 3.加样问...
得荣县18838242395： 如何描述pcr扩增产物的检测结果 - ？
戚包海舒： PCR扩增反应完成之后,必须通过严格的鉴定,才能确定是否真正得到了准确可靠的预期特定扩增产物.凝胶电泳是检测PCR产物常用和最简便的方法,能判断产物的大小,有助于产物的鉴定.凝胶电泳常用的有琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳,前者主要用于DNA片段大于100bp者,后者主要用来检测小片段DNA.
得荣县18838242395： 如何用rtpcr定量her2拷贝数 - ？
戚包海舒： 半定量pcr内参基因扩增条件和目的基因扩增条件一样以参照物为标准,对PCR终产物进行分析或对PCR过程进行监测,从而达到评估样本中靶基因的拷贝数,称为定量PCR.根据反应体系是否设有参照物以及是否与标本在同一管中进行扩增,...
得荣县18838242395： PCR产物的检测方法有哪些?都有什么原理 - ？
戚包海舒： 1.琼脂糖凝胶电泳 同时点分子量marker,根据marker条带判断产物分子量大小,从而大致判断是不是你要的 2.酶切 已知你产物的序列,看上面有什么酶切位点,用一个酶或者两个酶切断,看与理论预测的条带数目和大小是否一致.一般检测有以上两步就行了,如果需要知道确切的需要进行3 3.测序 连接到pMD-18t 载体上,转到大肠杆菌中.拿到公司去测序,测序结果通过gene bank比对看与哪个基因一致,这种方法最准确 4.表达 pcr产物连到真核或者原核表达载体上,适宜条件表达出来以后的蛋白做质谱分析,看与理论产物表达的蛋白是否有一致的片段
得荣县18838242395： 如何通过电泳对PCR的产物大小进行检测?？
戚包海舒： 通过电泳进行产物定量只是相对的大概估算,一般的marker都有这样的功能,比如你的产物小于2000bp的话,你在泳道加入5ul 的TAKARA的DL2000marker,其中最亮的一条带750bp含量约为150ng,其他的条带约为50ng,根据你的条带的明暗和marker进行比较,即可粗略的估算你的产物的量.
