gapdh内参两个条带

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采鹏19186317392问： 我想做PCR内参选beta - actin还是GAPDH好 - ？
华莹市地塞回答： 常用的蛋白内参有 beta actin 和 GAPDH,它们是有区别的 GAPDH分子量为146KD,检测条带大约在36kD,beta actin分子量为42KD.一般选择内参与要检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上另外,细胞总蛋白的Western Blot的内参蛋白一般用 beta actin ,膜蛋白的Western Blot一般用GAPDH为内参

采鹏19186317392问： GADPH是什么 - ？
华莹市地塞回答： GAPDH是参与糖酵解的一种关键酶,由4个30-40kDa的亚基组成,分子量146kDa,检测条带大约在36kDa.GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达,广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参.因为GAPDH 作为管家基因在同种细胞或者...

采鹏19186317392问： Western blot 内参跑不齐怎么调整 - ？
华莹市地塞回答： 第一,应该确认每个样品表达GAPDH的量一样,虽然是持家基因,本人觉得不同细菌可能表达量不一样,造成信号强弱不一样.可以通过考马斯亮蓝染色来确定上样量的差异,调整上样量一样再检测GAPDH. 第二,内参跑不齐.一般是跑胶...

采鹏19186317392问： Western Blot为什么必须要用内参 - ？
华莹市地塞回答： 内参作为一个参考物选用一个表达量相对稳定的蛋白,如actin,GAPDH等.不同方法处理细胞时内参的表达量不变,目的蛋白有可能会有变化.western中各泳道的内参的条带一样,那说明蛋白浓度一样.总蛋白浓度一样,目的蛋白条带宽度差异才能体现出目的蛋白表达量的差别.

采鹏19186317392问： western blot 的内参不一致,急求助 - ？
华莹市地塞回答： 要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot.因为Western Blot操作相对简单方便,既可以定性分析表达产物,同时还可以指示目的蛋白量的相对变化.虽然,顺利的时候Western Blot做起来...

采鹏19186317392问： 做RT - PCR内参的作用是什么?应该如何选择管家基因啊? - ？
华莹市地塞回答： 内参的选择:普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下 它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差.PCR时,每个标本都要做对应的内参,...

采鹏19186317392问： 看家基因GApDHmRNA引物是什么东西?有什么用?成分 - ？
华莹市地塞回答： 有,GAPDH是三磷酸甘油醛脱氢酶,是糖酵解途径中的关键酶.糖酵解途径就是将葡萄糖转化为ATP的过程,负责为生物体提供能量,几乎所有的生物都有该途径.因此GAPDH常常被用来作为内参基因,另外还有β-actin、Ubqutin等由于其广泛存在,也可作为内参基因.

采鹏19186317392问： 做RT - PCR内参的作用是什么?应该如何选择管家基因 - ？
华莹市地塞回答： 内参就是在cDNA里面的啊 比如你有三种反转录的cDNA 就分别用内参的引物做三组 和目标基因一起做就行了 不过是要单独加 不是和目标基因的引物加在一个孔里

采鹏19186317392问： 常用的内参基因及其使用范围?请大家推荐生物方面的论坛 - ？
华莹市地塞回答： 内参即是内部参照,它们在各组织和细胞中的表达相对恒定,在检测基因的表达水平变化时常用它来做参照物 你可以去生物帮那里了解这方面的信息,那儿技术文档、视频资源丰富,我很喜欢到那里找想要的东西,而且还有很多软件可以下载,...

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