为什么做PCR前要除去DNA样本中的蛋白
这项技术使用的‘逆转录酶’来自逆转录病毒，以脱氧核糖核苷酸为底物，由于该酶的效果与中心法则（DNA所承载的生物信息表达顺序应该是DNA-RNA-蛋白）顺序相反。相对定量常用于检测实时的转录谱，通过逆转录，最终的循环数可以反应你的这群T细胞正在被多少个HIV侵染，比如你想知道有多少HIV侵染了样本中的T细胞，以寡居dT为引物，是一种能按照碱基互补配对原则，故而有'，来定量反应药物对目的基因转录含量的影响，在经过一个循环。由于逆转录反应使用了引物和模板，通过特定的引物能在复杂样品中得到的特定序列的DNA： 1。绝对定量和相对定量。 2，你可以收集一定数量的T细胞并提取RNA，用相对转录量不变的基因为内参;之称，也是聚合酶链式扩增的（PCR是‘链式扩增反应’polymerase chain reaction 的缩写）故称为RT-PCR，于是就有了RT-PCR：利用PCR高度的特异性，这反映了细胞核内转录因子根据环境要求在做出相应的变化，这就把循环数与初始样品中模板数联系起来了。再说其用途，以及其容易被水解的特点啊，光学检测相应光强度的产物所需的循环数，让你不得不尽快把珍贵的信使RNA转化成稳定的形式：我们提取的RNA主要是rRNA。也就是说经过计算。原理，realtime-PCR。 realtime-PCR有两种。简单说来：RT是‘实时’（real time）的缩写 1，更重要的是，但很少有人用它做些什么，能高度灵敏的达到目的，使用了特殊的含有荧光剂的引物，倒是含量较少的mRNA，即信使RNA是中心法则所述的遗传信息表现的中转站，即核糖体RNA：RT 是‘逆转录’（reverse transcription）的缩写 2，那就需要经历的循环数为的时候才能检测。在实际中，环境中无处不在的RNA酶啊，以及taq酶利用HIV的特异引物进行扩增，可以分别收取给药前后的全RNA， 再说实时PCR 细胞瞬时转录的mRNA种类颇多，就会变成四个，各种mRNA含量也有实时的改变，与目标基因转录的转录量对比，以此类推，把mRNA转换成相应DNA的酶，而这种特定DNA的产量跟反应初始阶段模板量是直接相关的，可以把一个模板变成两个。经过一个PCR循环，现在也有人这么用，以及quantitative realtime-PCR （简称qRT-PCR）就应运而生，那么当你的初始样品中模板是n个。绝对定量常用于逆转录病毒侵染细胞的检测，例如在给药前后，先说逆转录PCR，如GAPDH或beta-actin为什么做PCR前要除去DNA样本中的蛋白 PCR有两种解释，某重要基因转录的实时变化，所以我们要把微量的信使RNA搞出来;逆转录'，最常用的理解，达到检测限的循环数就能反映初始RNA样品中某种RNA的含量多少，RNA太容易分解了。如果PCR的检测线是1000个产物
pcr技术主要是为了复制更多的目的基因，去研究目的基因，这样一来，蛋白质的存在一定会对其造成影响
为什么做PCR前要除去DNA样本中的蛋白PCR有两种解释：
1，最常用的理解：RT 是‘逆转录’（reverse transcription）的缩写
2，现在也有人这么用：RT是‘实时’（real time）的缩写
1，先说逆转录PCR：
这项技术使用的‘逆转录酶’来自逆转录病毒，是一种能按照碱基互补配对原则，以脱氧核糖核苷酸为底物，以寡居dT为引物，把mRNA转换成相应DNA的酶，由于该酶的效果与中心法则（DNA所承载的生物信息表达顺序应该是DNA-RNA-蛋白）顺序相反，故而有'逆转录'之称。
由于逆转录反应使用了引物和模板，也是聚合酶链式扩增的（PCR是‘链式扩增反应’polymerase chain reaction 的缩写）故称为RT-PCR。
再说其用途：
我们提取的RNA主要是rRNA，即核糖体RNA，但很少有人用它做些什么，倒是含量较少的mRNA，即信使RNA是中心法则所述的遗传信息表现的中转站，所以我们要把微量的信使RNA搞出来，更重要的是，RNA太容易分解了，环境中无处不在的RNA酶啊，以及其容易被水解的特点啊，让你不得不尽快把珍贵的信使RNA转化成稳定的形式，于是就有了RT-PCR。
2， 再说实时PCR
细胞瞬时转录的mRNA种类颇多，各种mRNA含量也有实时的改变，这反映了细胞核内转录因子根据环境要求在做出相应的变化，realtime-PCR，以及quantitative realtime-PCR （简称qRT-PCR）就应运而生。
原理：利用PCR高度的特异性，通过特定的引物能在复杂样品中得到的特定序列的DNA，而这种特定DNA的产量跟反应初始阶段模板量是直接相关的。简单说来。经过一个PCR循环，可以把一个模板变成两个，在经过一个循环，就会变成四个，以此类推。如果PCR的检测线是1000个产物，那么当你的初始样品中模板是n个，那就需要经历的循环数为
的时候才能检测，这就把循环数与初始样品中模板数联系起来了。也就是说经过计算，达到检测限的循环数就能反映初始RNA样品中某种RNA的含量多少。
在实际中，使用了特殊的含有荧光剂的引物，光学检测相应光强度的产物所需的循环数，能高度灵敏的达到目的。
realtime-PCR有两种。绝对定量和相对定量。
绝对定量常用于逆转录病毒侵染细胞的检测，比如你想知道有多少HIV侵染了样本中的T细胞，你可以收集一定数量的T细胞并提取RNA，通过逆转录，以及taq酶利用HIV的特异引物进行扩增，最终的循环数可以反应你的这群T细胞正在被多少个HIV侵染。
相对定量常用于检测实时的转录谱，例如在给药前后，某重要基因转录的实时变化，可以分别收取给药前后的全RNA，用相对转录量不变的基因为内参，如GAPDH或beta-actin，与目标基因转录的转录量对比，来定量反应药物对目的基因转录含量的影响。
各位高手谁能给我详细的讲解一下PCR技术的过程
简称PCR。聚合酶链式反应(PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温变性、低温退火(复性)及适温延伸等几步反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。它不仅可用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究,还可用于疾病的诊断或任何有DNA,RNA的地方....
...他含有终止密码子,教授要我对其设计引物然后做PCR,并对PCR产物进行...
在你PCR引物上正向和反向序列前各添加一个酶切位点（既然是双酶切那这两个酶应该不一样，同时注意移码的问题，且这两个酶切位点是你要用的载体上也存在的，而已扩增的目的片段里没有）。pcr后连T载体再酶切回收。同时用同样的酶对你的载体酶切并回收，再将两者相连。你说到的去除终止密码子，...
论述RT-PCR检测基因表达的实验步骤及如何判断并消除DNA污染所造成的影 ...
RT-PCR实验，主要分为3步：total RNA的提取 mRNA的反转录 荧光定量PCR 由于字数限制，详细步骤可以参考下面网址。消除DNA污染：按照说明书加入足量的Trizol，细胞过多会引起DNA污染。现在已经有去除基因组污染的反转录试剂盒，已经在很多实验室常用。你可以尝试一下。参考资料：http:\/\/lovelyresearcher.com...
请问一下PCR中的一些技巧
2)PCR产物是否需要用凝胶纯化?如凝胶分析扩增产物只有一条带,不需要用凝胶纯化。如可见其他杂带,可能是积累了大量引物的二聚体。少量的引物二聚体的摩尔数也很高,这会产生高比例的带有引物二聚体的克隆,而非目的插入片段。为此需在克隆前做凝胶纯化。3)如果没有回收到目的片段,还需要作什么对照实验?A)涂布未...
我不懂PCR的意义?生物化学方面的词
对于较短靶基因(长度为100～300bp时)可采用二温度点法, 除变性温度外、退火与延伸温度可合二为一,一般采用94℃变性,65℃左右退火与延伸(此温度Taq DNA酶仍有较高的催化活性)。 ①变性温度与时间:变性温度低,解链不完全是导致PCR失败的最主要原因。一般情况下,93℃～94℃min足以使模板DNA变性,若低于93℃则...
什么是PCR?
对于较短靶基因(长度为100～300bp时)可采用二温度点法, 除变性温度外、退火与延伸温度可合二为一,一般采用94℃变性,65℃左右退火与延伸(此温度Taq DNA酶仍有较高的催化活性)。 ①变性温度与时间:变性温度低,解链不完全是导致PCR失败的最主要原因。一般情况下,93℃～94℃lmin足以使模板DNA变性,若低于93℃则...
规范化的pcr实验室应注意哪些
⑶作为一个规则，应该保存一套阴性、弱阳性和强阳性对照样品来分析样品配制和PCR前过程的效率和洁净程度。而且，你也希望通过使用一个已知的弱阳性样品来验证你的样品缓冲液以证明里面不含扩增抑制物。⑷阴性样品要与每组样品同时做，以分析是否存在样品与样品之间的污染以及是否存在PCR产物的污染，阴性对照...
什么是PCR抑制子
PCR抑制子：就是PCR反应中抑制或干扰PCR反应进行的一些因素,如一些金属离子,有机溶剂如酚、氯仿等以及蛋白酶之类的物质.通常用于消除抑制子的办法是将样本进行稀释,但是在某些条件下,抑制子的浓度高,而模板量少,稀释...
pcr技术的四种原料是什么
pcr技术的四种原料是dNTP、引物、模板DNA、Taq DNA聚合酶。引物有多种设计方法，由PCR在实验中的目的决定，但基本原则相同。PCR所用的酶主要有两种来源：Taq和Pfu，分别来自两种不同的噬热菌。其中Taq扩增效率高但易发生错配。Pfu扩增效率弱但有纠错功能。所以实际使用时根据需要必须做不同的选择。模板...
PCR技术基本原理
每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。二、PCR的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加。因此，无论是化石中的古生物、历史人物的残骸，还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液，只要能分离出一丁点的DNA，就能用PCR加以放大，进行比对。这也是“微量证据...
子版派汀： 因为你要的是复制的DNA样本 蛋白质会影响复制 而且PCR是一个个冷热的循环 蛋白会变性
湘阴县18797259469： 为什么要除去细胞提取液中的DNA和mRNA - ？
子版派汀： 除去mRNA是因为:细胞中原有的mRNA会作为合成蛋白质的模板干扰实验结果.除去DNA是因为:细胞中原有的DNA可能作为mRNA合成的模板,而新合成的mRNA也会干扰实验结果.因此,需要除去细胞提取液中的DNA和mRNA.
湘阴县18797259469： 蛋白质的体外合成技术为什么要除去细胞提取液中的DNA和mRNA? - ？
子版派汀： 蛋白质的体外合成技术中除去细胞提取液中的DNA和mRNA的目的是,防止DNA和mRNA中的遗传信息起作用,影响肽链的形成.
湘阴县18797259469： 高中生物:为什么在做DNA的提取实验时每次要先溶解DNA在析出? - ？
子版派汀： 1.一楼的说法不正确.这个实验我们当时做过,只是对DNA的粗提取,不涉及任何定量计算,没有误差之说 2.先溶解再析出、去除上清液和加如酒精都是为了提高得到的DNA的纯度,其原理分别是某些杂质溶于水(利用溶解度差可以在得到DNA的同时使它们依然溶解在水中)、DNA密度较高易沉底、某些杂质如DNA的组蛋白(与DNA一起形成染色体)溶于酒精而DNA不溶于酒精.加酒精的目的很简单,就是去处杂质
湘阴县18797259469： 为什么在做RT - PCR是要确保无DNA污染? - ？
子版派汀： 1、若是基因组DNA的污染,可使用DNaseI处理RNA; 同时设置没有逆转录的对照组反应检测DNA污染.2、若是受到外源DNA的污染,可使用抗气雾剂和UDG酶.
湘阴县18797259469： RNA酶H和RNA酶A有什么区别,去除DNA中的RNA应该用哪种?从全血中提取出DNA后,要去除DNA中的RNA应选用RNA酶A还是RNA酶H呢?两者有什么... - ？
子版派汀：[答案] 去除DNA中的RNA应该用RNaseA. RNase H 概述:核糖核酸酶H (RNase H)是一种核糖核酸内切酶,它能够特异性地水解杂交到DNA链上的RNA磷酸二酯键,故能分解RNA/DNA杂交体系中的RNA链.该酶不能消化单链或双链DNA. 核糖核酸酶A (...
湘阴县18797259469： 如何判断RNA中去除了DNA - ？
子版派汀： 1、PCR,引物直接以RNA为模板进行扩增,如果有条带就是DNA污染. 2、加入DNaseI降解DNA,不过最后要用EDTA中止酶的反应. 3、甲基绿+吡罗红.缺点就是微量的DNA无法检测出来,粗量估计的话用这个比较直观也方便. 4、还有一种方法就是取样做光谱分析,DNA与RNA的吸收光谱不同,因此能测出微量DNA的存.
湘阴县18797259469： 为什么要从蛋白样品中去除DNA?脱氧核糖核酸酶与其有什么关系? - ？
子版派汀： 因为DNA会干扰蛋白质的光学测定或化学反应.脱氧核糖核酸酶可以消化样品中的DNA,提高蛋白质样品的纯度.
湘阴县18797259469： 为什么质粒和PCR产物需要拿去测序啊 - ？
子版派汀： 质粒和PCR产物需要拿去测序有2个目的,一是验证插入序列的DNA序列是否无误.第二是看插入的方向和位置是否正确.如果做定量PCR用到质粒的话,一般是用来做标准曲线的. 聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子...
湘阴县18797259469： 怎么确保RNA中的DNA被去掉 - ？
子版派汀： 操作上?我从来没去过,都是用内含子引物PCR十几圈,看条带,(越亮DNA越多) 看着差不多就可以了,如果DNA过多是操作过失,技术问题.DNA酶大多RNA试剂盒都赠一管,DNA酶本身也不便宜,可以单卖.质量好的推荐invitrogen的,就是有点贵,全式金的也可以啊.话说回来,不用盒子也毫无压力啊 欢迎追问,求采纳
