小鼠gapdh引物
PCR引物人鼠通用问题
我帮你看了一下。β-actin RT-PCR 252 不行 β-actin QPCR 157 也不行 GAPDH 的也不行 建议你自己设计吧，免费的软件 http:\/\/frodo.wi.mit.edu\/primer3\/ 小鼠GAPDH mRNA序列 http:\/\/www.ncbi.nlm.nih.gov\/nuccore\/126012538?report=fasta β-actin http:\/\/www.ncbi.nlm.nih.gov...
gapdh内参基因pcr后有几条带
看你引物设计了。人的GAPDH有12种已知剪切变体，在一般的细胞内能检出的有2-5种，所以某些引物可能会P出两条带来（剪切变体不同）。如果你是用做qPCR的定量，那就必须仔细设计引物以避开这些情况。
关于pcr引物设计:我做反转录pcr,目的基因是大鼠ACE2和ACE。
3、最后再回到ncbi的genebank，用你得到的引物去检索，核对下序列是否完全正确。有时老外的资料也是有错的 相对定量PCR。引物设计有一定要求，片段长度已经说了，同时要做一个看家基因做对照（如果用Delta Delta Ct的方法更是必须的）。看家基因有beta-actin、GAPDH、Glubin、ABL等。文献中有些现成的引物...
这是我设计的罗非鱼GAPDH基因的引物,各位高手看看有没有什么问题啊?最...
做RT首先确定RNA没有问题，这是前提；然后你这对引物，即使是直接扩增DNA也比较困难，给你俩建议，第一，尽量把突变的碱基放在最5端的位置，你的下游引物突变点有点靠近中间了，不是特别好；第二，把你的引物加长一些或者是设置在GC含量相对高一点的位置以使其退火温度高于60度，这样只要你的RNA没有...
引物稀释
参见sangon 报告）forward：共2od，加116ul的缓冲液配成100uM的储存液 reverse：共2od，加100ul的缓冲液配成100uM的储存液 3.盖上盖后充分震荡混匀 4.工作液：从储存液中吸取10ul稀释至90ulDEPC水成10uM工作液。5.定量pcr实验：上下游引物各加1~2ul。内参GAPDH不用稀释。
RT-PCR是,内参是什么时候加入,作用是什么?谢谢
gapdh hprt等等。当然，现在的很多观点认为这些基因在不同组织中丰度也不同，例如gapdh，在线粒体含量高的组织中丰度高，很多人认为用基因组dna做内参会更加靠谱，当然这是后话了，选择gapdh无碍于现阶段的实验，如果觉得不靠谱，可以选择两个内参。你所研究的物种，应该有人已经发表过相应的内参，直接上...
RT-PCR 结果,请教问题可能出在哪一部分。谢谢
94度20秒，退火（几度就看你引物的Tm值减去3～5度）30秒，72度延伸30秒，循环35次；72度延伸5分钟。另外，我想问一下，你的GAPDH这对引物是第一次做还是之前一直在做？因为GAPDH做不出来的话实验体系肯定是有问题的。如果之前实验室有在用的话，现在做不出来就是试剂的原因了；如果GAPDH引物是第...
MPK, Z-FPPS, FPPS, 是什么酶的缩写,全称是什么,中文是什么?谢谢!_百度...
半定量的RT-PCR反应从hLRH-1特殊引物开始，（上游引物5’-CCG ACAAGTGGTACATGGAA-3’下游引物5’-CTGCTGCGGGTAGTTACACA-3’）,FPPS 特定引物（上游为5’-CCGACAAGTGGTACATGGAA-3’下游为5’-CTGCCCGTAATTTTCCTTCA-3’），反应产生300bp和338bp的产物。3’-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）通过引物...
小知识 | 荧光定量PCR专场~
相对定量则关注不同样本中基因表达量的差异，通过引入内参基因（如管家基因）排除起始模板量的影响，利用2^-ΔΔCt公式计算表达量的倍数变化，得出相对表达量。常用的内参基因有β-actin、GAPDH、18s rRNA等。此方法需要确保目的基因和内参基因的扩增效率一致，以便准确计算。荧光定量PCR有染料法和探针法两种...
定量PCR Taqman探针设计与体系优化
目的基因查找比对→探针与引物设计→探针与引物合成→配置反应体系→反应参数→重复实验,优化条件→获得曲线数据,比对标准曲线→再重复验证。 第一步:在第一步目的基因查找比对过程中可以利用NCBI genbank序列以及DNAstar等软件完成目的DNA或者RNA的查找与比对——这在分析测序报告的时候相信很多人操作过,这一步需要注意...
龙胜各族自治县海甘回答： 内参的选择:普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下 它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差.PCR时,每个标本都要做对应的内参,...
姜残15128452360问： 看家基因GApDHmRNA引物是什么东西?有什么用?成分 - ？
龙胜各族自治县海甘回答： 有,GAPDH是三磷酸甘油醛脱氢酶,是糖酵解途径中的关键酶.糖酵解途径就是将葡萄糖转化为ATP的过程,负责为生物体提供能量,几乎所有的生物都有该途径.因此GAPDH常常被用来作为内参基因,另外还有β-actin、Ubqutin等由于其广泛存在,也可作为内参基因.
姜残15128452360问： RT - PCR中内参蛋白GAPDH和b - actin人和小鼠的可以用同一对引物吗? - ？
龙胜各族自治县海甘回答： 要回答这个问题必须看你引物的序列.你贴出来我帮你查一下,你自己也可以BLAST一下.如果在人和鼠的基因中都可以BLAST到,则可以用,否则就不可以. 虽然这些House Keeper基因的同源性很高,如果引物不在同源区,还是没办法混用的.
姜残15128452360问： PCR时小鼠GAPDH扩出条带而目的基因却扩不出是什么原因? - ？
龙胜各族自治县海甘回答： 既然其他样本有结果,说明引物没有问题.而该样本GAPDH也有,说明cDNA没有问题.PCR试剂也OK.一个解释,目的基因在这个样本中表达很低.如果是做定量的话建议用real time.这样肉眼看不到的也可以由荧光探测到.
姜残15128452360问： PCR时小鼠GAPDH扩出条带而目的基因却扩不出是什么原因?而且不同的cDNA同时扩相同目的基因,一个扩出来一个没有扩出来,但没扩出来的那个... - ？
龙胜各族自治县海甘回答：[答案] 既然其他样本有结果,说明引物没有问题.而该样本GAPDH也有,说明cDNA没有问题.PCR试剂也OK.目的基因在这个样本中表达很低.如果是做定量的话建议用real time.这样肉眼看不到的也可以由荧光探测到.
姜残15128452360问： RT - PCR 结果,请教问题可能出在哪一部分.谢谢？
龙胜各族自治县海甘回答： 你提取的四个RNA中,除了2号浓度很低之外,另外三个肯定符合做RT-PCR的要求了,CDNA也是,浓度是够的. 而电泳图中PCR产物的1234都是引物二聚体,没有出现你的目的基因 所以我的判断是:问题出在PCR这一过程.有可能是引物设...
姜残15128452360问： 做RT - PCR内参的作用是什么?应该如何选择管家基因 - ？
龙胜各族自治县海甘回答： 内参就是在cDNA里面的啊 比如你有三种反转录的cDNA 就分别用内参的引物做三组 和目标基因一起做就行了 不过是要单独加 不是和目标基因的引物加在一个孔里
姜残15128452360问： 这是我设计的罗非鱼GAPDH基因的引物,各位高手看看有没有什么问题啊?最近我跑RT - PCR老失败! - ？
龙胜各族自治县海甘回答： 做RT首先确定RNA没有问题,这是前提;然后你这对引物,即使是直接扩增DNA也比较困难,给你俩建议,第一,尽量把突变的碱基放在最5端的位置,你的下游引物突变点有点靠近中间了,不是特别好;第二,把你的引物加长一些或者是设置在GC含量相对高一点的位置以使其退火温度高于60度,这样只要你的RNA没有问题就一定做得出来.你要想用现在的这对引物可以,建议你换好的酶,不然不好做.PP并不是设计引物好的软件,但不知道为什么国内都用它,其实它很业余.
姜残15128452360问： 如何获得高质量的抗体 - ？
龙胜各族自治县海甘回答： 来自世界各地的100多名研究人员共同发出了一项倡议,这有可能从根本上改变鉴定研究用抗体的方式.相关文章发表在2月5日的《自然》(Nature)杂志上. 洛斯阿拉莫斯国家实验室(Los Alamos National Laboratory)研究员Andrew ...
姜残15128452360问： 我想做PCR内参选beta - actin还是GAPDH好 - ？
龙胜各族自治县海甘回答： 常用的蛋白内参有 beta actin 和 GAPDH,它们是有区别的 GAPDH分子量为146KD,检测条带大约在36kD,beta actin分子量为42KD.一般选择内参与要检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上另外,细胞总蛋白的Western Blot的内参蛋白一般用 beta actin ,膜蛋白的Western Blot一般用GAPDH为内参
