pcr内参gapdh基因大小
内参gapdh,b-actin有什么区别吗
内参GAPDH和β-actin是不同的基因编码的蛋白产物。内参GAPDH是甘油醛-3-磷酸脱氢酶的英文缩写，它参与糖酵解过程，几乎在所有组织中都有表达。而β-actin是一种细胞骨架蛋白，在维持细胞形态和细胞运动中发挥重要作用，同样在几乎所有细胞中都有表达。在分子生物学实验中，两者常作为内参使用，但有所侧重。
请问,GAPDH作为RT-PCR内参的原理是什么呀?我知道为什用它做内参了,就...
因为GAPDH的基因表达量在是不同状态下是变化很小的，所以可以认为GAPDH表达是恒定的，所以可以选择它来做内参。
什么是GAPDH?它的作用是什么?
GAPDH是参与糖酵解的一种关键酶，由4个30-40kDa的亚基组成，分子量146kDa，检测条带大约在36kDa。GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达，广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参。因为GAPDH 作为管家基因在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定的，因此在使用GAPDH内参抗体时，将每个样品测得的...
gapdh内参基因贴抗体
Gapdh内参基因贴抗体是用于检测Gapdh表达量的抗体，通常是由兔、小鼠或大鼠制备的多克隆抗体。这些抗体的特点主要包括以下几个方面：高灵敏度：Gapdh内参基因贴抗体能够检测到非常低浓度的Gapdh蛋白，因此可以在极低表达的样本中使用;高特异性：Gapdh内参基因贴抗体能够与Gapdh蛋白的特定表位结合，具有高度特异...
内参GAPDH,B-ACTIN有什么区别吗
GAPDH：GAPDH或G3PDH是甘油醛-3-磷酸脱氢酶。B-ACTIN：即“肌动蛋白”，是细胞的一种重要骨架蛋白。2、分布方式不同：GAPDH：广泛分布于各种组织中的细胞。B-ACTIN：分布在骨架当中。3、作用不同：GAPDH：被广泛用作抽提total RNA，poly(A)+ RNA，Western blot等实验操作的标准化的内参。B-ACTIN：...
gapdh分子量是什么?
gapdh分子量是：GAPDH(甘油醛-3-磷酸脱氢酶)。是参与糖酵解的一种关键酶，由4个30-40kDa的亚基组成，分子量146kDa，检测条带大约在36kDa。GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达，广泛用作Westernblot蛋白质标准化的内参。gapdh是什么 NADPH是一种辅酶，叫还原型辅酶Ⅱ，学名还原型烟酰胺腺嘌呤二...
GAPDH 在RT-qPCR中的作用?
一般作为内参（样本的加样对照）。GAPDH不同，则说明加样量不同。目的基因的变化倍数要做相应的调整。
gapdh什么情况下不用做内参
不恒定。GAPDH的基因表达量在是不同状态下是变化很小的，所以可以认为GAPDH表达是恒定的，能够可以选择它来做内参，只有不恒定的情况下才不会选择做，这样会导致GAPDH的表达量会增多。
westernblot内参GAPDH成功了
按照GAPDH说明书，1:4000稀释一抗。我还以为4ml的一抗稀释液要16ul的抗体。我一想，有点不合理吧。我买的GAPDH总共才25ul，一次性全部用了。好在问了肾内科的LLL，跟我解释了一下。原来是抗体和一抗稀释液的配比是1ul和4000ul，果然这样才合理。就这样开开心心地常温孵化抗体3h。在这期间去了趟...
microRNA的qPCR内参可以用GAPDH吗
mirna的荧光定量pcr可以用actin做内参miRNA通过与转录本的相互作用，关闭或抑制基因的表达。最近的研究表明它们影响了约三成的基因。miRNA在多个组织中差异表达，这就让表达图谱分析成为研究的重点。同时，miRNA的过表达和抑制也是近年来常用的研究方法。我知道和使用过的U6内参基因只有两个：RNU6-1和RNU6-...
韩城市氨酚回答： 在做QRT-PCR时,一定要有内参,即在PCR时,每个标本都要做对应的内参,而且每次都是看家基因,一般用bate-actin,有时也用GAPDH.内参的选择:普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下.它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差,跑出的条带要进行灰度分析.用目的基因的积分光密度比上内参的光密度就是你这个基因实际表达的量.希望对你有所帮助.
佼芸19756666476问： RT - PCR数据分析 - ？
韩城市氨酚回答： 需要样本间平行比较.目的基因/GAPDH比值越大,说明目的基因表达量越高.比如1号样本目的基因/GAPDH比值等于0.5;2号样本目的基因/GAPDH比值等于0.8;那就说明2号样本中目的基因的表达量比1号样本高.
佼芸19756666476问： 做RT - PCR内参的作用是什么?应该如何选择管家基因啊? - ？
韩城市氨酚回答： 内参的选择:普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下 它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差.PCR时,每个标本都要做对应的内参,...
佼芸19756666476问： 我想做PCR内参选beta - actin还是GAPDH好 - ？
韩城市氨酚回答： 常用的蛋白内参有 beta actin 和 GAPDH,它们是有区别的 GAPDH分子量为146KD,检测条带大约在36kD,beta actin分子量为42KD.一般选择内参与要检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上另外,细胞总蛋白的Western Blot的内参蛋白一般用 beta actin ,膜蛋白的Western Blot一般用GAPDH为内参
佼芸19756666476问： RT - PCR 结果,请教问题可能出在哪一部分.谢谢？
韩城市氨酚回答： 你提取的四个RNA中,除了2号浓度很低之外,另外三个肯定符合做RT-PCR的要求了,CDNA也是,浓度是够的. 而电泳图中PCR产物的1234都是引物二聚体,没有出现你的目的基因 所以我的判断是:问题出在PCR这一过程.有可能是引物设...
佼芸19756666476问： GADPH是什么 - ？
韩城市氨酚回答： GAPDH是参与糖酵解的一种关键酶,由4个30-40kDa的亚基组成,分子量146kDa,检测条带大约在36kDa.GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达,广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参.因为GAPDH 作为管家基因在同种细胞或者...
佼芸19756666476问： 14 - 3 - 3蛋白western选用什么内参 - ？
韩城市氨酚回答： 要检测蛋白分子量是在28~33kD之间?那内参可以选用a-tubulin(56kD)或者β-actin(42kD)GAPDH(36kD)可能稍微小了的
佼芸19756666476问： 请问PCR电泳分析是内参和marker有什么区别么,前者和后者的作用区别在哪儿呢,谢谢 - ？
韩城市氨酚回答： 不太一样.内参是相对定量用的,marker是定大小的. 内参一般是RT-PCR用的,当底物是cDNA文库这种混合物时,除了扩增目的片段,往往还要扩增一个内参.内参一般选择细胞内的管家基因,表达量不会随着细胞状态而变化的,如U6,GAPDH等.由于PCR定量结果受底物影响较大,枪不准或者操作不当带来的很大误差,所以用目的片段的定量结果除以内参的定量结果,就能得到一个相对准确的比值,即相对定量. marker一般是用在普通pcr之后的跑电泳过程中.marker是一系列确定大小的DNA片段,跑出一个ladder,然后你的扩增片段与ladder比较,就可以知道片段的大概长度,然后判断是不是你要的片段,还是杂带.
佼芸19756666476问： pcr结果出不来,每次都是只有100bp以下的条带,没有其他的条带不管是扩gapdh,还是目的基因,都是只在100bpmarker下有一个条带,其他地方没有任... - ？
韩城市氨酚回答：[答案] 首先试剂应该没有问题,现在连作为marker的基因都扩不好,那么一个是你的引物有问题,另一个就是反转录出问题了.遇到这样的问题应该一步一步的排除.首先确定反转录没有问题,一般的鉴定办法是扩增marker基因,但是你现在g...
佼芸19756666476问： 请问,GAPDH作为RT - PCR内参的原理是什么呀?我知道为什用它做内参了,就是不清楚怎么用它, - ？
韩城市氨酚回答：[答案] 一般认为一些持家基因的表达量在不同状态下变化不大,所以可以认为它们表达是恒定的,故而用来做内参 简而言之,就是你有两个样品(譬如不同生长条件或者不同组织的),要比较其中某基因A表达转录变化,就分别比较两个样品中A相对于...
