qpcr内参基因表达量不一致
在进行Real time-PCR实验中,理想的内参基因应满足哪些基本条件?_百度...
在进行Real time-PCR实验中，理想的内参基因应满足基本条件：PCR反应进行的条件：引物(PCR引物为DNA片段，细胞内DNA复制的引物为一段RNA链）、酶、dNTP、模板和缓冲液（其中需要Mg2+）。引物有多种设计方法，由PCR在实验中的目的决定，但基本原则相同。PCR所用的酶主要有两种来源：Taq和Pfu，分别来自...
做反转录PCR的时候为什么需要内参基因
内参基因表达水平一致结果才具有可信度～内参不齐怎么说明是细胞数引起的目的基因上下调还是目的基因本身表达的变化～
经过pcr扩增之后,为什么就能证明基因的表达量的多少呢?
你用的是半定量PCR的方法，现在已经不再被主流杂志接受了，当然不论用什么方式，一定是用的cDNA为模板的。而且做PCR之前一定要先跑电泳确定PCR反应体系中模板量保持一致，而且要再用一组内参基因（actin,GAPDH之类都OK）引物同时进行PCR，计算时用靶基因的量减去内参基因的量，然后再比较。
real time PCR实验为什么要使用内参基因
这个是根据定量PCR算法决定的，如果是相对定量，就需要内参，内参主要是使样品均一化，你做实验的时候，可能提取RNA时所用的样品是相同的，反转录时所用的mRNA的量是相同的，做定量PCR时所加的cDNA量也是相同的。但是你的样品是新长的部分，还是老的部分？反转录时是加相同的体积还是相同打质量，这些...
想做实时定量PCR,怎么找内参基因,设计内参基因的引物?
根据你的情况，已经扩增出来的基因片段如果是你的目标基因的话那当然不能作为内参。如果你的材料--芍药没有发表过内参基因的话，就得自己筛选了，这样就比较麻烦，首先就是要确定内参基因在你的比较组的各种情况下表达是稳定的。建议你再多查查文献，特别是国外的文献，已有发表的概率还是很大的。实在不...
我现在要做荧光定量PCR,有3个目的基因,以ACTIN基因作为内参,分析其在...
或者减少复孔量每个目的基因设计2-3个引物，因为引物很便宜，选择溶解曲线最好的做。开始做都会出现复孔不稳定的情况，做几次操作熟练了复孔数值稳定之后就可以不用复孔了，直接把组内样本一个个上上去。关于数据分析，实时荧光定量PCR仪会自带分析软件，设置好对照和内参，如果有同组样本还需要设置...
求助PCR所检测的基因水平以及蛋白水平的区别
基因翻译蛋白质, PCR可以检测基因的表达量，绝对定量和相对定量。但基因翻译表达蛋白质是个复杂的过程，有可能出现基因量大而蛋白质少，或者相反，甚至其他情况。所以，PCR是从基因层面DNA或mRNA进行的检测， 而Western Blot是目前一种结合内参对蛋白质进行半定量的方法，Elisa可以定量检测某些蛋白、激素等 ...
pcr ct值越高是否说明表达越低,△ct值越高说明表达也低,是吗?_百度知 ...
如果有标准曲线，按照标准曲线计算。一般都是相对量。则用delta delta CT方法来计算。举例如下：对照组基因A的CT值为20， 内参（比如βactin)CT值15。实验组基因A CT值18，内参CT值14。首先算加样量：delta CT=15-14=1。2的1次方是2。也就是说实验组的加样量是对照组的2倍。基因A: delta CT...
用RT-PCR检测目的基因表达差异,需将内参基因的电泳条带亮度调成一致...
说个小窍门：样品作一系列的稀释，然后每份取1ul点到一块凝胶上，稍等片刻吸收后，不要电泳，直接EtBr染色。根据亮度再进行一次细微的稀释调整。
半定量pcr内参基因扩增条件和目的基因扩增条件一样吗
半定量pcr内参基因扩增条件和目的基因扩增条件一样 以参照物为标准,对PCR终产物进行分析或对PCR过程进行监测,从而达到评估样本 中靶基因的拷贝数,称为定量PCR.根据反应体系是否设有参照物以及是否与标本在同一管中进行扩增,定量PCR可分为四种：①有限稀释法,即倍比稀释法：通过稀释阳性样品直至靶基因不能...
滦平县百科回答： 不同基因之间表达量差异很大,可达上千甚至上万倍之差,所以CT值差10以内属正常现象,但通常选用内参基因属于表达量较高的持家基因,如果目标基因和内存基因表达量(CT值差)过大,用内参基因来衡量目标基因的表达量(绝对值)就不完全可靠,但至少可以说明目标基因表达非常低.
符疤19254702624问： 荧光PCR的cDNA的量不同会影响结果吗 - ？
滦平县百科回答： 相同样品相同基因cDNA的量不同,得到的Cq值就不同.基因的表达量少,Cq值就会偏大.如果这个基因的表达量很小且加入的cDNA量又不足的话就可能由于反应循环数过多导致反应体系中的酶活性下降,从而使得结果不稳定和可重复性差.所以想要得到一个可信的结果就需要使得得到的Cq值在一定的范围之内,不能太大也不能太小.
符疤19254702624问： western blot 的内参不一致,急求助 - ？
滦平县百科回答： 要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot.因为Western Blot操作相对简单方便,既可以定性分析表达产物,同时还可以指示目的蛋白量的相对变化.虽然,顺利的时候Western Blot做起来...
符疤19254702624问： 做RT - PCR内参的作用是什么?应该如何选择管家基因啊? - ？
滦平县百科回答： 内参的选择:普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下 它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差.PCR时,每个标本都要做对应的内参,...
符疤19254702624问： northern blot 实验为什么要做内参对照 - ？
滦平县百科回答： 内参通常选择18s rRNA,28s rRNA,或者U6 SnRNA,一方面起阳性对照的作用,另一方面这些内参基因表达量比较均一.你在比较不同样本的目的带是否有区别是,可以用内参的带作为对照.举例来说,你用qPCR得到如下结果:某种miRNA的表达量在肿瘤组织和癌旁组织中有差异;当你用northern进行验证时,如果两种组织样本内参的条带一样,而miRNA的目的带有差别,这样才能验证你第一种方法的结果.如果不做内参,就不能下结论,因为目的带的差异有可能是其他原因引起的,比如说上样量不一致.
符疤19254702624问： 如何通过qPCR比较不同基因的表达 - ？
滦平县百科回答： 提取样本mRNA,测提取的浓度,按比例调整浓度保持相近的起始量,做反转录合成cDNA,然后用配套的荧光定量试剂配置上样体系,就可以在Real Time-PCR仪上跑了,然后观察仪器上实时显示的数据和最终结果分析比较基因表达差异
符疤19254702624问： 荧光定量PCR的内参和目的基因一定要放一起吗 - ？
滦平县百科回答： 荧光定量PCR的内参和目的基因一定要放一起内参就是一个表达量在各个组基本保持不变的基因,又叫看家基因,比如常用的GAPDH, actin.或者18s rRNA也可以.如果内参表达量一致,说明你PCR的上样量一致,样本的质量也一致.如果出入很大,说明你的样本的浓度或者是质量有问题.测到的目的基因的表达量就不可靠了
符疤19254702624问： 定量PCR中,用内参基因进行标准化,为什么要用几何平均,谢谢 - ？
滦平县百科回答： 因为内参和目标基因的扩增效率有可能不一样,所以CT值不能直接相减.只能是内参间先算出相对量,目的基因也算出相对量(倍数),然后在用目的基因的倍数除以内参的倍数.
符疤19254702624问： 内参基因在植物的各组织中表达量都一致吗 ？
滦平县百科回答： 不一定,一般内参基因(内对照基因)选用看家基因,如Actin基因在一些物种中地上和地下部会出现微小差异.如果做基因表达分析,同一器官或组织不同基因比较,以同部位的看家基因做内对照即可,如果不同部位或器官中某一基因的表达量对比,选择看家基因时要多参考一些文献,看选取的内对照基因是否有空间表达的明显差异.
符疤19254702624问： 什么是内参基因?常用内参基因有哪些? - ？
滦平县百科回答： 这个概念一般是用在定量PCR中.定量PCR是要检测某个基因的表达,降低或者提高,但是当你得出结果以后,你并不知道是它本身的表达降低/提高了,还是你操作过程中造成的误差(比如提RNA时的损失),所以这个时候需要同时检测另外的基因作为参照.这个基因就是内参基因,这类基因是生物体或者细胞中稳定表达的基因,表达量几乎不变.常用的内参基因如 β-actin,GAPDH,18s-rRNA等
