每次跑qpcr一定要放内参吗
qpcr复孔之间的差异不能超过多少
0.5，SD值大于0.5需要重跑，体系配好加样，移液枪直上直下打进去最好不要歪着，加体系的时候如果有八通道的枪就用那个，会减小误差。dna量少，都是枪头直接碰到孔底的。
[QPCR,荧光定量PCR,实时定时PCR,求助]QPCR的时候为什么用Sybgreen跑...
Sybgreen本身是一种多肽类物质，结合在DNA双螺旋的小沟里，可能会造成拖带啊之类的情况，所以不是很准。但是用也没有问题。EB的分子量很小，所以会比较准。实时荧光定量PCR的原理是在反应体系中加入Sybgreen，只要有双螺旋生成，Sybgreen结合上去就会发光，对发光的强度定量，就可以实时监控PCR过程。Syb...
用相同的引物做PCR和qPCR的退火温度是一样的吗?我看文献里的,好像不一...
一般不会用同一对引物同时做PCR和qPCR的，普通的PCR引物设计和qPCR引物设计还是有区别的，qPCR用SYBR green做时，大部分人会用两步法，就是把退货和延伸放在一起做，但普通的PCR很少能这么做
如何利用Bio-Rad CFX Manager 3.1分析QPCR数据
3、点击步骤二中的应用程序。程序开启的速度有点慢，请耐心等待。关掉弹出来的无关窗口，点击File，下拉选择Open，选择横向的Data File，点击Data File，弹出你要选择加进去的QPCR数据文件。4、完成步骤三后会弹出你的QPCR曲线结果图。开始对结果图进行分析。首先点击Quantification那栏，看看QPCR的特征曲线跑...
如何利用Bio-Rad CFX Manager 3.1分析QPCR数据
3、点击步骤二中的应用程序。程序开启的速度有点慢，请耐心等待。关掉弹出来的无关窗口，点击File，下拉选择Open，选择横向的Data File，点击Data File，弹出你要选择加进去的QPCR数据文件。4、完成步骤三后会弹出你的QPCR曲线结果图。开始对结果图进行分析。首先点击Quantification那栏，看看QPCR的特征曲线跑...
QPCR为什么跑不出来
提总RNA 然后反转录成cDNA 然后做rt-pcr就可以啦
如何利用Bio-Rad CFX Manager 3.1分析QPCR数据
4、完成步骤三后会弹出你的QPCR曲线结果图。开始对结果图进行分析。首先点击Quantification那栏，看看QPCR的特征曲线跑得怎么样。用鼠标随意点击上面的一条绿色曲线，就出现相对应的哪个孔的Cq值。5 5、开始对曲线进行分析。这里的曲线多数分为两大类，分别代表了两种不同的引物的扩增曲线。曲线中另外出现...
qPCR试剂盒可以做普通的PCR吗?
一般情况下不需要那定量的PCR产物去跑胶电泳，只有在实验结果出现问题，例如无扩增曲线，NTC有起飞等情况下，才去做普通PCR作为核查问题的依据。
QPCR中的sybr green mix可以用来跑普通PCR吗
可以，但这个kit是用来做定量或半定量pcr的，是用来检测基因表达情况的，拿来做一般的pcr太浪费了，而且也不一定有机器，定量的pcr仪器至少20万。
如何通过qPCR比较不同基因的表达
提取样本mRNA,测提取的浓度,按比例调整浓度保持相近的起始量,做反转录合成cDNA,然后用配套的荧光定量试剂配置上样体系,就可以在Real Time-PCR仪上跑了,然后观察仪器上实时显示的数据和最终结果分析比较基因表达差异
青羊区瑞菲回答： 在做QRT-PCR时,一定要有内参,即在PCR时,每个标本都要做对应的内参,而且每次都是看家基因,一般用bate-actin,有时也用GAPDH.内参的选择:普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下.它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差,跑出的条带要进行灰度分析.用目的基因的积分光密度比上内参的光密度就是你这个基因实际表达的量.希望对你有所帮助.
应尝18380594572问： 荧光定量PCR的内参和目的基因一定要放一起吗 - ？
青羊区瑞菲回答： 荧光定量PCR的内参和目的基因一定要放一起内参就是一个表达量在各个组基本保持不变的基因,又叫看家基因,比如常用的GAPDH, actin.或者18s rRNA也可以.如果内参表达量一致,说明你PCR的上样量一致,样本的质量也一致.如果出入很大,说明你的样本的浓度或者是质量有问题.测到的目的基因的表达量就不可靠了
应尝18380594572问： ,第一次做荧光定量PCR,内参基因可以跑出来,但是荧光峰度比较低,溶解曲线也不错,但目的基因完全跑不出 - ？
青羊区瑞菲回答： 朋友,首先跟你说一下我的经验,其实这里有个误区,其实普通PCR对Realtime PCR的指导意义实在是太小,因为realtime PCR的引物跟普通PCR的引物有很大差别,realtime PCR的引物因为要顾及试验体系的要求,所以在引物性能方面有一...
应尝18380594572问： pcr中阴参,阳参的作用 - ？
青羊区瑞菲回答： 阴参是监控核酸提取和PCR加样,扩增,是否有阳性样本的交叉污染.阳参是监控PCR试剂是否失效,以及作为标准品作定量功能的.阳性内参就是一定会P出来条带,阴性内参就是一定不会P出来条带.阳性没结果一般是实验体系、实验参数不对,阴性有结果一般是有污染.
应尝18380594572问： 关于PCR的问题有点糊涂 Real time PCR 和 RT - PCR(逆转录PCR) Q - PCR RT - QPCR - ？
青羊区瑞菲回答： 一般RT-PCR指的就是real time PCR,qPCR基本上与RT-PCR是等同的.没有见过RT-qPCR这样表述的.逆转录后再做PCR这是两个独立的过程,先做逆转录,再做PCR,这里的PCR可以是普通PCR,也可以是qPCR.做逆转录的时候一般是需要用管家基因作为内参的,但是qPCR不一定需要,要看你的目的.通过比较管家基因与目的基因在不同条件下的表达水平的差异,是常用的半定量方法,半定量也加相对定量.相应的有绝对定量,就是绘制标准曲线,测目的基因和病原体的拷贝数
应尝18380594572问： 反向PCR怎么做 - ？
青羊区瑞菲回答： 反向pcr(inverse pcr)反向pcr是一种多聚合酶链式反应(pcr)应用的方法,可使已知序列的核心区边侧的未知rma成几何级数扩增.用适当的限制性内切裂解含核心区的rma,以产生适合于pcr扩增大小的片段,然后片段的末端再连接形成环状分子.pcr的引物同源于环上核心区的末端序列,但其方向可使链的延长经过环上的未知区而不是分开引物的核心区.这种反向pcr方法可用于扩增本来就在核心区旁边的序.
应尝18380594572问： 如何通过qPCR比较不同基因的表达 - ？
青羊区瑞菲回答： 提取样本mRNA,测提取的浓度,按比例调整浓度保持相近的起始量,做反转录合成cDNA,然后用配套的荧光定量试剂配置上样体系,就可以在Real Time-PCR仪上跑了,然后观察仪器上实时显示的数据和最终结果分析比较基因表达差异
应尝18380594572问： 跑pcr之前要不要鉴定dna的质量 - ？
青羊区瑞菲回答： 通常不需要,因为已经很清楚每个内参的属性.但还需要看你用定量做什么,比如说做组织表达,或者诱导表达,我们都会偏好于不同的内参.
应尝18380594572问： 提取rna需要在生物安全柜里吗 - ？
青羊区瑞菲回答： 这个是根据定量,如果是相对定量,就需要内参,内参主要是使样品均一化,你做实验的时候,可能提取RNA时所用的样品是相同的,反转录时所用的mRNA的量是相同的,做定量PCR时所加的cDNA量也是相同的.但是你的样品是新长的部分,还是老的部分? 换海尔新出的那种“智净”系列的安全柜吧,海尔独有的一个“恒风速”专利,是全生命周期都能保障安全柜风速恒定的,一步解决所有安全柜久用过滤器堵塞,风速降低或不均匀这些问题,一劳永逸的.海尔设备不用说了,国产最靠谱的了,现在刚好是新款
应尝18380594572问： 提取病毒DNA为模板做pcr,是否需要内参 - ？
青羊区瑞菲回答： 实验室操作不需要内参,但是如果是国际化产品的话需要内参的.
