gapdh内参的ct值一般多少
作者&投稿：幸霞 （若有异议请与网页底部的电邮联系）
敏沾19228955430问： 怎样来鉴别反转录cDNA的质量?？
佛冈县欣可回答： 用内参引物做一下Realtime PCR就行了,常见的ACTB、GAPDH、18S都可.一般大型实验室都会有自己独门的内参引物.如果Ct值在9~18之间,一般质量都不会有太大问题.
敏沾19228955430问： GAPDH的CT值应该位于什么区间 - ？
佛冈县欣可回答： 从你的两个图的纵坐标来看,可能是仪器读取时有问题.请检查仪器是否有损坏,或者板子、封口膜是否与仪器兼容,反应溶液是否有气泡.下面一个图如果仪器没有问题则可以说扩增失败.
敏沾19228955430问： 我想做PCR内参选beta - actin还是GAPDH好 - ？
佛冈县欣可回答： 常用的蛋白内参有 beta actin 和 GAPDH,它们是有区别的 GAPDH分子量为146KD,检测条带大约在36kD,beta actin分子量为42KD.一般选择内参与要检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上另外,细胞总蛋白的Western Blot的内参蛋白一般用 beta actin ,膜蛋白的Western Blot一般用GAPDH为内参
敏沾19228955430问： 做RT - PCR内参的作用是什么?应该如何选择管家基因啊? - ？
佛冈县欣可回答： 内参的选择:普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下 它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差.PCR时,每个标本都要做对应的内参,...
敏沾19228955430问： 为什么认为ct值大于35为检测不到 - ？
佛冈县欣可回答： 如何通过荧光定量目的基因和GAPDH计算相对表达量 内参就是一个表达量在各个组基本保持不变的基因,又叫看家基因,比如常用的GAPDH, actin.或者18s rRNA也可以. 如果内参表达量一致,说明你PCR的上样量一致,样本的质量也一致...
敏沾19228955430问： 运用pcr溶解曲线分析怎样计算结果 - ？
佛冈县欣可回答： 如果有标准曲线,按照标准曲线计算.一般都是相对量.则用delta delta CT方法来计算.举例如下: 对照组基因A的CT值为20, 内参(比如βactin)CT值15.实验组基因A CT值18,内参CT值14. 首先算加样量:delta CT=15-14=1.2的1次方是2.也就是说.
敏沾19228955430问： 做RT - PCR的时候为什么要设置标准反应体系和管家基因反应体系? - ？
佛冈县欣可回答： 在做QRT-PCR时,一定要有内参,即在PCR时,每个标本都要做对应的内参,而且每次都是看家基因,一般用bate-actin,有时也用GAPDH.内参的选择:普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下.它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差,跑出的条带要进行灰度分析.用目的基因的积分光密度比上内参的光密度就是你这个基因实际表达的量.希望对你有所帮助.
敏沾19228955430问： 做RT - PCR内参的作用是什么?应该如何选择管家基因 - ？
佛冈县欣可回答： 内参就是在cDNA里面的啊 比如你有三种反转录的cDNA 就分别用内参的引物做三组 和目标基因一起做就行了 不过是要单独加 不是和目标基因的引物加在一个孔里
敏沾19228955430问： qPCR数据中对照组在表格中标准差怎么计算 - ？
佛冈县欣可回答： 3. Real-time qPCR定量方法可以分为绝对定量和相对定量.绝对定量是用一系列已知浓度的标准品制作标准曲线,在相同的条件下目的基因测得的荧光信号量同标准曲线进行比较,从而得到目的基因的量.该标准品可以是纯化的质粒DNA,体...
敏沾19228955430问： 怎样获得DNA扩增效率标准曲线 - ？
佛冈县欣可回答： 是实时定量吗?相对定量delta delta Ct法的话,即比较内参与目的基因扩增效率是否相同,用Ct值为纵轴,模板cDNA稀释倍数为横轴做拟合曲线,比较目的与内参这两条拟合曲线之间R平方值是否符合要求(一般要大于0.99)及斜率是否相同,才能进行下一步的定量试验.
