qpcr内参基因ct值差260
荧光定量PCR的内参和目的基因一定要放一起吗
荧光定量PCR的内参和目的基因一定要放一起 内参就是一个表达量在各个组基本保持不变的基因，又叫看家基因，比如常用的GAPDH， actin。或者18s rRNA也可以。如果内参表达量一致，说明你PCR的上样量一致，样本的质量也一致。如果出入很大，说明你的样本的浓度或者是质量有问题。测到的目的基因的表达量就不...
pcr中内参照基因
内参就是对照基因，在PCR中，就是肯定能用PCR扩增出来的基因，无论你要扩增什么生物，比如你做的是真菌，都可以扩的出来。阳性对照的目的，有两个：一个是帮助你判断你的PCR扩增的过程中有没有出现什么问题，比如说加样过程中会不会漏加某些试剂，以判定你的PCR体系有没有问题。另一方面，就是用来...
RT-PCR中目的基因与内参基因的循环数都大于30,结果完全不可信吗?_百 ...
不会。做cDNA的时候样品少，经常会上30的。如果你做了复孔，重复样的Ct值一样就可以。如果你做了梯度，Ct值呈线性的话，就可以，如果是乱七八糟的，就不行了。
...定量PCR进行相对定量时,若是目的基因和内参基因扩增效率不一致,为 ...
你先得弄清相对定量什么意思，举个例子，样品a和样品b中检测基因Y的表达水平，以b-actin为内参，相对定量就是用样品a中的基因Y的量除以b-actin得到值y1，用样品b中的基因Y的量除以b-actin得到值y2，然后y1\/y2就是基因y在样品a和b中的相对表达水平。若基因Y和b-actin扩增效率不一致，那么y1\/y2...
实时荧光定量RT-PCR的Fold change怎么计算
=2-[(22.1-18.3)]处理组-[(25-Ct18.2)]对照组=23=8 也就是处理造成Cdk5表达增加了7倍。如果是目的基因和内参基因的扩增效率相差比较大，可以用扩增效率进行校正，也就是Pfaffl方法。所用公式如下：处理所致倍数变化(fold change)= C(A-E)\/D(F-B)扩增效率（E）=10-1\/斜率(理想的PCR...
请教PCR内标 对照
用来检测你模板的质量。也就是说，如果在同一模板中，如果你没扩出目的基因，但扩出了内参，就说明不是模板的问题。阳性对照就是你的实验应该出现的结果，就是用你的结果和阳性对照对比用。阴性对照就是本底，起排除干扰的作用。关于实验原理的问题，建议看《分子生物学实验指南》。
什么是realtime PCR,什么是q-pcr,所用反应物质与普通PCR有何不同
普通PCR结果反映的其实是PCR的结果，而当PCR经过多伦循环到平台期后，很难反映原来模板的浓度；而实时定量PCR 反映的是PCR的过程，它起飞时间的Ct值可以精确反映模板的浓度。定义，操作，原理什么的我就不说了，自己查百度百科和文库，我就从实战给你点注意事项吧。1 选好内参基因，特别是同一物种不同...
相对定量PCR是用目的基因拷贝数\/内参拷贝数,还是用2
2-δδct法。定量的作用是比较两个或多个样本（前提是细胞数目要相等）基因表达量差异的，基因拷贝数\/内参拷贝数只是一个样本的相对定量值。内参的作用只是消除样本间细胞数目的差异。
肌动蛋白基因为什么可以作为荧光定量pcr的内参基因
肌动蛋白基因可以作为荧光定量pcr的内参基因的原因是：内参基因相当于一个标尺，具有校正作用，避免待测样本回收率或者加样误差等因素带来的差异。具有标准化作用，内参基因表达相对稳定，以其为参照，反应基因表达水平的变化。根据查询相关信息显示引入内参基因进行了归一化处理，可以最大限度地减少样本制备，...
我现在要做荧光定量PCR,有3个目的基因,以ACTIN基因作为内参,分析其在...
或者减少复孔量每个目的基因设计2-3个引物，因为引物很便宜，选择溶解曲线最好的做。开始做都会出现复孔不稳定的情况，做几次操作熟练了复孔数值稳定之后就可以不用复孔了，直接把组内样本一个个上上去。关于数据分析，实时荧光定量PCR仪会自带分析软件，设置好对照和内参，如果有同组样本还需要设置...
湘桥区谷氨回答： 不同基因之间表达量差异很大,可达上千甚至上万倍之差,所以CT值差10以内属正常现象,但通常选用内参基因属于表达量较高的持家基因,如果目标基因和内存基因表达量(CT值差)过大,用内参基因来衡量目标基因的表达量(绝对值)就不完全可靠,但至少可以说明目标基因表达非常低.
丙爱13094209257问： - △△Ct是什么意思 - ？
湘桥区谷氨回答： 在做定量PCR的时候,先比较内参的Ct值的差别(相减,delta Ct).然后再比较目的基因的Ct值差别 (还是相减,delta Ct).然后再把得到的两个delta Ct进行相减,得到最后的结果△△Ct. 计算基因表达倍数的差别时,算为2的△△Ct方.前面是否加减号,取决于你一开始的时候做减法的时候那个放在前面.
丙爱13094209257问： 做RT - PCR内参的作用是什么?应该如何选择管家基因啊? - ？
湘桥区谷氨回答： 内参的选择:普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下 它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差.PCR时,每个标本都要做对应的内参,...
丙爱13094209257问： 运用pcr溶解曲线分析怎样计算结果 - ？
湘桥区谷氨回答： 如果有标准曲线,按照标准曲线计算.一般都是相对量.则用delta delta CT方法来计算.举例如下: 对照组基因A的CT值为20, 内参(比如βactin)CT值15.实验组基因A CT值18,内参CT值14. 首先算加样量:delta CT=15-14=1.2的1次方是2.也就是说.
丙爱13094209257问： 荧光定量基因拷贝数低和酶或引物有关系么 - ？
湘桥区谷氨回答： 没有阳性对照吗?如果内参的CT值不正常,那么很可能是你的qPCR体系的问题.内参正常的话,就有可能是引物或者目的基因丰度太低的原因了.引物的话,我们用的试剂盒推荐的浓度是25nM-900nM,是一个很广的范围了,我们自己也试过几个浓度,都可以.所以引物浓度并不是主要的问题,做做普通PCR看看能不能P出来,条带有多亮.
丙爱13094209257问： qPCR数据中对照组在表格中标准差怎么计算 - ？
湘桥区谷氨回答： 3. Real-time qPCR定量方法可以分为绝对定量和相对定量.绝对定量是用一系列已知浓度的标准品制作标准曲线,在相同的条件下目的基因测得的荧光信号量同标准曲线进行比较,从而得到目的基因的量.该标准品可以是纯化的质粒DNA,体...
丙爱13094209257问： 定量PCR中,用内参基因进行标准化,为什么要用几何平均,谢谢 - ？
湘桥区谷氨回答： 因为内参和目标基因的扩增效率有可能不一样,所以CT值不能直接相减.只能是内参间先算出相对量,目的基因也算出相对量(倍数),然后在用目的基因的倍数除以内参的倍数.
丙爱13094209257问： ct值是什么意思 深入解析PCR检测中的关键参数ct值? - ？
湘桥区谷氨回答： 总之,ct值是PCR检测中的一个关键参数,可以用来判断样本中目标基因的数量.在实际应用中,需要对PCR反应的效率进行校准,以保证检测结果的准确性.颤裂PCR技术是一种基于DNA扩增的方隐洞仿法,可用于检测病原体、基因突变、...
丙爱13094209257问： 如何处理Real time PCR的数据结果 - ？
湘桥区谷氨回答： 学习做Realtime PCR, 实验结果是出来了,得到的内参、目的基因的Ct 值在15-25 之间,熔 融曲线基本上也是单峰,但不太会处理这个结果,对着数据发愁.不同的处理方法得到不 同的结果. 做的是相对定量,SYBR Green, 选用2^(-△ △ Ct)法...
丙爱13094209257问： 基因表达量变化差值是什么? - ？
湘桥区谷氨回答： 差值是△CT,即是相对于某个内参基因的相对表达量,而不是绝对表达量; 在此基础上再进行比值,即△△CT,是(某两个处理之间的)差异表达倍数.
