单克隆细胞筛选有限稀释法
G418筛选阳性克隆的优化方法有哪些?
另一种方法是使用套环，将套环固定在阳性克隆周围，然后在套环内加入胰蛋白酶或EDTA进行消化。消化完成后的物质会被吸收到新的培养孔中进行培养。最后，通过有限稀释法，将这些阳性克隆分散到96孔板中进行精确筛选，确保每个孔只含有单一的阳性克隆。通过这样的步骤，筛选过程更为精确和有效，提高了阳性克隆...
求大神讲解一下单克隆筛选的原理,最好通俗一点哈
稳转细胞株构建、药物靶点筛选等应用中重要的一环,优质的单克隆细胞能够更好地为不同领域科学研究和药物研发提供支持。通俗的讲:就是将混合细胞通过3D打印技术（更精准高效）\/直接用96孔板分离，此时一部分目标细胞就与其他细胞分离开来，经过筛选，得到目标细胞进行培养就能得到同种细胞了 ...
如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养
经选择性培养基筛选后的杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞。通常采用有限稀释克隆细胞的方法，将杂交瘤细胞多倍稀释，接种在多孔细胞培养板上培养，使每孔细胞不超过一个（理论上30%的孔中细胞数为0时，才能保证有些孔中是单个细胞），再由这些单细胞克隆生长，然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗...
如何挑取单克隆?
筛选单克隆细胞的方法多种多样，每一种都旨在确保精确性和效率。有限稀释法通过观察单个细胞的生长，揭示了其潜在的特性；而流式细胞术则以精确的细胞排序技术，实现细胞群体的精细化筛选。微流控单细胞捕获技术，如高通量分析，为大规模分析提供了可能。激光捕获显微切割则在单细胞的精细操作中展现其卓越...
如何筛选动物单克隆抗体
经HAT培养液筛选的杂交瘤细胞特异性也存在差异,所以必须从杂交瘤细胞群中筛选出能产生针对某一预定抗原快定簇的特异性杂交瘤细胞.通常采用有限稀释克隆细胞的方法,将杂交瘤细胞多倍稀释,接种在多孔的细胞培养板上,使每一孔含一个或几个杂交瘤细胞（理论上30%的孔中细胞数为0时,才能保证有些孔中是单...
细胞转染,挑单克隆
细胞培养：细胞的大规模克隆.细胞培养,既包括微生物细胞的培养,细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞.单克隆一般常指动植物细胞的克隆,细胞培养一般是指动物、微生物等细胞的细胞克隆.二者没有什么明显区别.单克隆在单克隆抗体制备中比较常见.其实是对骨髓瘤细胞的细胞...
有限稀释法 为进行克隆化的简单有效方法,每孔接种的杂交瘤细胞...
【答案】：A "克隆化"的目的是使每孔为单一细胞系分泌单一特异性抗体。因此，"有限稀释法"接种的杂交瘤细胞数量是每孔1个。
G418的选择细胞原理是什么?
这样再次筛选是必不可少的。只有经过2次以上的筛选之后才能找到那种我们想要的强分泌目的蛋白的，遗传稳定的细胞克隆。G418（Geneticin,遗传霉素） 是一种氨基糖苷类抗生素 ,在分子遗传试验中，是稳定转染最常用的抗性筛选试剂。它通过抑制转座子Tn601，Tn5 的基因,干扰核糖体功能而阻断蛋白质合成，对原核...
单克隆抗体的两次筛选剂 以及原因
惟有骨髓瘤细胞与效应B细胞相互融合形成的杂交瘤细胞，既具有效应B细胞的“S途径”，又具有骨髓瘤细胞在体外培养液中长期增殖的特性，因此能在HAT培养液中选择性存活下来，并不断增殖。B 第二次筛选的原理和方法:通常采用有限稀释克隆细胞的方法，将杂交瘤细胞多倍稀释，接种在多孔的细胞培养板上，使每...
请问哪位高手能告诉我如何利用极限稀释法来培养单细胞克隆,非常感谢
其实很简单的啊，就是把你要分离单克隆的细胞收集之后做梯度稀释，稀释到一定的倍数之后，培养，扩出来的就是单克隆了。
河津市丹栀回答： 有限稀释法是一种常用的克隆方法. 将需要再克隆的细胞株自培养孔内吸出并作细胞计数,计出1mL的细胞数. 用HT培养液稀释, 使细胞浓度为50~60个/mL,于96孔培养板中每孔加0.1mL(五六个细胞/孔).接种2排,剩余细胞悬液用HT培...
陆通13554682308问： 请问用有限稀释法筛选单克隆细胞的过程之中,培养液中也要加G418吗? - ？
河津市丹栀回答： 当然也是需要加筛选抗生素的,否则长出来的单克隆有可能是没有转入目的基因的母细胞.
陆通13554682308问： 单克隆抗体中两次筛选分别是什么方法 - ？
河津市丹栀回答： 第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞,用连续注射抗原,下面具体介绍一下: 1、在实际免疫过程中,由于采用连续注射抗原的方法,且一种抗原决定簇刺激机体形成相对应的一种效应B淋巴细胞,因此,从小鼠脾脏中取出的效应B淋巴...
陆通13554682308问： 简述人工制备单克隆抗体的方法? - ？
河津市丹栀回答： 单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体.通常采用杂交瘤技术来制备,杂交瘤(hybridoma)抗体技术是在细胞融合技术的基础上,将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤...
陆通13554682308问： 细胞 在96孔板 怎么 挑取单个克隆细胞 - ？
河津市丹栀回答： 无限稀释法,就是铺到96板的一个孔,然后倍数稀释下去,到最后就会有一个细胞的孔,还有就是细胞计数,然后再铺96孔,也会出现一个细胞,但是对于挑单克隆来说,我觉得没必要单个细胞,单个细胞也不容易长起来,虽然挑克隆可能是混转的,但是不会影响实验需求.
陆通13554682308问： 如何筛选动物单克隆抗体 - ？
河津市丹栀回答： 单克隆抗体制备过程中,总共有两次筛选,第一次筛选出杂交瘤细胞,第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞,两次筛选的原理和方法是不相同的.第一次筛选的原理与方法:细胞融合后,杂交瘤细胞的选择性培养是第一次筛选的关键.普...
陆通13554682308问： 请问哪位高手能告诉我如何利用极限稀释法来培养单细胞克隆,非常感谢 - ？
河津市丹栀回答： 其实很简单的啊,就是把你要分离单克隆的细胞收集之后做梯度稀释,稀释到一定的倍数之后,培养,扩出来的就是单克隆了.
陆通13554682308问： 怎样制备单克隆抗体？
河津市丹栀回答： 这个在高三的生物选修很详细地说了... 难道楼主忘记了? 好啦..找给你... 1)免疫脾细胞的制备 制备单克隆抗体的动物多采用纯系 Balb/c小鼠.免疫的方法取决于所用抗原的性质.免疫方法同一般血清的制备,也可采用脾内直接免疫法. 2)骨...
