请问哪位高手能告诉我如何利用极限稀释法来培养单细胞克隆，非常感谢
单细胞克隆：就是将一个细胞进行培养，使之不断分裂，形成一个细胞群的过程。这一群细胞来源于一个共同的祖先细胞。克隆，就是无性繁殖的意思，单细胞克隆就是将单一的一个细胞培养成一个细胞群的过程。
有限稀释法是一种常用的克隆方法。
将需要再克隆的细胞株自培养孔内吸出并作细胞计数，计出1mL的细胞数。
用HT培养液稀释， 使细胞浓度为50～60个/mL，于96孔培养板中每孔加0.1mL(五六个细胞/孔)。
接种2排，剩余细胞悬液用HT培养液作倍比稀释，再接种2排，如此类推，直至使每孔含0.5～1个细胞。
培养7～10d后，选择单个克隆生长的阳性孔再一次进行克隆。一般需要如此重复3～5次，直至达100％阳性孔率时即可，以确保抗体由单个克隆所产生。
例如：
实验细胞克隆化培养技术—有限稀释法
一、实验目的：
1、掌握用有限稀释法进行细胞克隆化培养技术； 2、学会细胞克隆形成的辩观察技能；
3、配合抗体分泌细胞筛选技术，确定抗体分泌细胞。 二、实验原理：
克隆化培养即单细胞培养技术，用有限稀释法进行杂交瘤细胞克隆化培养，可以及时确定阳性杂交瘤细胞株，同时淘汰因发生染色体丢失或抗体的轻、重链基因分离而出现无抗体分泌阴性细胞株。
一般杂交瘤细胞需经过52—3次反复克隆后，才能达到100%细胞阳性率。
该办法亦适用于一般细胞培养中的细胞纯化、突变细胞株的选择，识别和分离。是细胞株的常用方法。
三、实验材料：
杂交瘤细胞、25毫升培养瓶、96孔细胞培养板（天津有机玻璃厂）、移液管（1毫升、5毫升、10毫升）、弯头滴管、倒置显微镜、CO2培养箱、白细胞计数板、计数器、盖玻片、防水笔、RPMI-1640、小牛血清、青链霉素、10毫升刻度离心管，00橡胶塞，饲养细胞（3-6×105/ml、见腹腔细胞的制备）。
四、实验步骤：
1、分装了每孔0.1毫升腹腔细胞的96孔细胞培养板（可提前24小时准备就绪，置CO2培养箱中备用）；
2、自细胞培养瓶中收集长势良好的杂交瘤细胞（亦可自24孔培养板孔中收集），制成悬液。
3、按白细胞计数方法准确计得细胞悬液的细胞数，一般在105/毫升左右。
4、取3支10毫升刻度离心管排列在超净工作台试管架上，先用无血清培养基将细胞稀释至103/毫升，再用含15%小牛血清的完全培养基稀释到101/毫升细胞，即每0.1毫升1个细胞。
5、每孔0.1毫升细胞悬液。
6、置37℃5%CO2培养箱，4天后取出观察，并在板盖上打上标记，做好记录并统计结果。
7、继续培养时，则在第4-5天更换1/2培养基，约第7-9天可以收获培养液上清用于检测抗体。并重复检测1-2次。
8、选择单克隆生长孔，生长良好，阳性强者，转移到24孔板再做克隆经培养或扩大培养。
五、实验结果：
实验结果以总细胞孔（如96孔）中出现克隆孔统计出克隆百分率，并可进一步按单细胞孔、双细胞孔、多细胞孔分别计算出百分率。
六、注意事项：
1、注意无菌操作，一旦发现污染（孔）必须及时处理；
2、计数细胞要求准确，稀释量亦要准确，否则将造成一孔多细胞克隆或克隆百分离太低；
3、在计数克隆出现率之前，不宜更换培养液，也不宜强烈振动培养板； 4、做克隆化培养的小牛血清必须是优质血清；
5、若做克隆抗体检测时，特别要保护细胞的生长状况，防止细胞生长不良甚至丢失。 七、说明：
哺乳动物细胞通过分离、稀释接种，培养在适宜于单细胞生长的培养液中，形成细胞克隆。运用这项技术可以制作细胞成活曲线，即在接种相同数量细胞的培养瓶中，加入不同浓度的化学药品，或照以不同剂量的射线，观察其对细胞的听见害程度。由此可以在哺乳类细胞中进行诱变试验及分离突变细胞。
哪位电子高手能告诉我一些关于耳机方面的知识?
灵敏度（Sensitivity）：指向耳机输入1毫瓦的功率时耳机所能发出的声压级（声压的单位是分贝，声压越大音量越大），所以一般灵敏度越高、阻抗越小，耳机越容易出声、越容易驱动。频率响应（Frequency Response）：频率所对应的灵敏度数值就是频率响应，绘制成图象就是频率响应曲线，人类听觉所能达到的范围大...
哪为高手能告诉我关于主板报警声音的详细资料!
（1） 使用Award BIOS的主板启动时发出的声音信息及含义如下：1短：系统正常启动。2短：CMOS Setup中有参数设置错误。1长1短：内存或主板上有元件出现故障。1长2短：显示器或显卡出现了问题。1长3短：主板上键盘控制器故障。1长9短：主板BIOS芯片故障。多次长鸣：内存条未插紧或损坏。重复短鸣：...
哪位魔方高手能告诉我还原魔方的口诀啊!!!
4B:如果2个位置不对的位置边角相邻,以下一组转动可以使它们对调位置. 底前左与底前右调位转动法(注意要正确持握魔方,使即将被调位的2个方块处于这两个位 置): (右- 底- 右+ )(前+ 底+ 前-) (右- 第+ 右+)底2 4C:如果2个位置不对的边角方块相对,以下一组转动可以使它们调位. 底前左与底后右...
哪位电脑高手告诉我:电脑启动的全过程?
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哪位高手告诉我该如何学好数学??
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...be read,好像是内中发生了错误。哪位高手能告诉我为什么
内存，系统，魔兽 把这3个挨着检查下。 重插（更换）内存，还原（重装）系统，更换魔兽游戏端
哪位高手能否告诉我下面个用C写的斐波那契数列哪里出问题了,算出的数据...
算出负数是可能的，int型或者long long都是有上界的，2个大数相加就会出现负数了，其实你可以试着找一下，那个负数之前的2个正数，记下来，单独拿出来相加，看看是不是负数，就更清楚了。
...自动关机(不是正常关机,是直接跟断电似的直接黑屏)问问高手谁...
"电脑自动关机原因:1.主机散热不良，供电故障，主板故障，可能导致电脑自动关机或自动反复重启。（重启是重要特征：有时关机，有时会重启）2.病毒木马的破坏，当系统核心组件损坏时，正在运行的电脑就可能自动关机。金山安全专家在这里，为您提供专杀工具以及系统修复工具，请点击快速下载。3.正在运行的软件...
哪位QQ堂高手来给我指导指导~
技术吗？67416996,这是我小号中的一个，我大号等级也一般，才奶酪预备兵，4个小好一个品糖高手两个半糖熟练工，和一个采购学徒，你要学什么，如果是飞标，那我无能为力，因为我是垃圾，如果是半身或连泡的话那找我，我打中国城可以连的飞起来，如果你想学穿炮或上墙的话，那也找我好了 ...
哪位红警高手告诉我一下,共和国之辉里,军队无敌和金钱无限或者有很多...
我教你具体怎么修改首先 打开金山游侠然后打开红警选择战役 然后切换的金山游戏 输入金钱数这时会出现很多结果之后把钱花点 在打开金山游侠 输入钱数 这时会出现三个结果 然后把三个结果都改了(注意 此时必须是3个结果 不然的话 就算修改了钱也不能用)如果你做任务 通关后 把红警和金山都关掉 重复上面的程序(要...
惠肩安舒： 其实很简单的啊,就是把你要分离单克隆的细胞收集之后做梯度稀释,稀释到一定的倍数之后,培养,扩出来的就是单克隆了.
庆元县13760775225： 哪位能告诉我,高等数学中求极限时需要什么条件才可以运用等价无穷小将所题式化简? - ？
惠肩安舒： 只要好用就行了.注意只能用于乘除法的式子中相约,不能用于加减法的式子中相消.
庆元县13760775225： 数列的极限我怎么搞不清楚啊,看的很迷茫,我是自学的高数,有哪位高手能否给我指点一二,谢谢了 - ？
惠肩安舒： 我们学的是高数A,不知道你学的是哪个版本?如果你学的是高数A的话,我建议你要首先看懂课本,不懂的一定要通过问别人或者查资料弄明白;然后,数列的极限其实并不难,只需要掌握一些求解的方法即可,当然,为了掌握这些方法,你就要通过大量的练习来让你能熟练灵活的应用这些方法;最后,你如果觉得自己能力能行,就做一些拔高的题目,他们能给你提供更多的方法,你能记住当然更好,不能记住的话,这些方法也能很好的启发你的思维,为你以后做题提供模版.
庆元县13760775225： 有哪位高手能帮我详细的证明一下函数极限的唯一性 - ？
惠肩安舒： 0;|x-x.|<. 反证法, 假设另外还存在一个A1为f(x)在x0处的极限,总存在正数δ ;|x-x.|<.时的极限.下面根据上面的定义证明唯一性;ε 那么常数A就叫做函数f(x)当x→x;δ 时,对应的函数值f(x)都满足不等式:|f(x)-A|<.|<δ2 时;δ 时,且 |A...
庆元县13760775225： 高数极限的求法看书总是模模糊糊的看不明白,麻烦哪位大神能用简洁明了的语言告诉我这些个极限怎么区分,怎么求.细致一点,书上的语言看的我云里雾里... - ？
惠肩安舒：[答案] 1)洛必达法则求极限 2)无穷小代换求极限 3)求含参数的极限,关键是把握常量变量的关系 4)1的∞次方的极限是重点 5)函数连续计算中要会对点进行修改定义、补充定义,看看书上怎么写的 6)闭区间连续函数性质四定理非常重要,把它们背下...
庆元县13760775225： 【极限】请问哪位高手给我解释一下如何转换的,真没看懂给采纳,谢谢 - ？
惠肩安舒： -cos²x = sin²x - 1x->0时 sinx和x是同阶无穷小量可以直接替代代入原式就得到结果了
庆元县13760775225： 哪位高手可以帮我解答一下电影垂直极限里面的生存技巧?就是在野外应该如何生存 - ？
惠肩安舒： 其实,在生活里、在我们身边一样有这种冒险的机会,通过野外生存俱乐部专业人员的指导、组织,平时普普通通的我们也能亲身体验这种野外生存的探险乐趣,做一次征服自然、征服自我的英雄.说起野外生存其实就是在保证安全的前提下,...
庆元县13760775225： {tanx—sinx}/x2 x趋向0 的极限是什么 哪位高手告诉我? - ？
惠肩安舒： 用泰勒公式展开也可以 用罗比达法则也行 tanx=f(0)+f'(0)x+f''(0)/2*x^2+0(x^2)=x+0(x^2) 0(x^2)表示对x^2的高阶无穷小 sinx=x+0+0(x^2)=x+0(x^2) limx->0 (tanx-sinx)/x^2=limx->0 0/x^2=0 或者用罗比达法则 lim x->0 (tanx-sinx)/x^2 =lim x->0 [sec^2x-cosx]/2x =limx-> 0 [2sec^2x*tanx+sinx]/2 =0 希望对你有帮助
庆元县13760775225： 像1/7+1/9 - 1/7+1/9 10/13+1/5 - 3/13 +4/5 这样的题型我总是不会做,哪位高手可以告诉我方法? - ？
惠肩安舒： 1/7+1/9-1/7+1/9=(1/7-1/7)+(1/9+1/9)=0+2/9=2/910/13+1/5-3/13 +4/5 =(10/13-3/13) +(4/5 +1/5)=7/13+1=1又7/13
庆元县13760775225： 在CS极限跳跃中就是KZ的地图看好多高手会空中加速 请问哪位高手能说下其中的诀窍吗? 谢谢了？
惠肩安舒： 知道超级跳的原理吧? 跟那个原理一样. 1.EDGEFRCTION并不是什么时候都存在,只是人物到达建筑边缘并有向外面掉出去的趋势才有的摩擦力 EDGE就是这个意思.作为普通的平地上 摩擦力为1 . 2.小跳 助跑 小跳会让你损失10个单位的速度,...
