反转录实验步骤和原理
列出5S rRNA基因的转录起始步骤。稳定转录起始复合物是在哪一点形成的...
【答案】：TFⅢA结合到C框上，引来TFⅢC，接着TFⅢB定位于起始位点的上游。从这点上讲，前起始复合物是稳定的，不需要TFⅢA或TFⅢC的持续存在。这可在体外用纯化了的组分进行这一反应来验证。结合上TFⅢB后，用高盐处理洗掉TFⅢA和TFⅢC，TFⅢB依然结合在上面，并能引来聚合酶Ⅲ。
实验二 RT-PCR扩增GADPH
RT-PCR，即逆转录聚合酶链反应，是分子生物学中不可或缺的工具，它能将RNA转化为cDNA，为基因扩增提供模板。这项技术的核心在于严谨的步骤和精准的试剂选择，下面我们将深入解析这一实验的各个环节。2.1 RT-PCR原理与关键步骤 首先，从组织或细胞中提取的总RNA或mRNA需要经过逆转录，由逆转录酶催化，...
如图为生物体内遗传信息的传递与表达过程.据图回答:(1)比较图一与图二...
③转录和⑤翻译三个过程能在人体正常细胞中进行，而④RNA的复制和②逆转录只能发生在少数RNA病毒中，且逆转录过程需要逆转录酶的催化．（5）图四表示遗传信息的表达过程，包括转录和翻译，即图三中的③⑤过程．活化的毒性物质是晶体蛋白在蛋白酶的作用下形成的一种多肽分子．（6）①本实验的目的是判断...
...实验来证明其遗传信息的传递方向,请补充实验步骤并
要证明甲型流感病毒遗传信息的传递方向，可设计以下实验；（1）将提取到的病毒RNA均分为两份，放入试管A、B；（2）向试管A中加入一定量的核糖核苷酸和RNA聚合酶（转录过程），向B试管中加入等量的脱氧核苷酸和逆转录酶（逆转录过程），在适宜条件下培养；（3）一段时间后，提取A、B两试管中产物利用...
病毒转染原理及步骤
慢病毒载体的构建原理 慢病毒载体的构建涉及到特异性扩增、基因整合和包装质粒的制备。通过PCR技术，将目的基因插入到慢病毒载体中，同时确保载体具备足够的转录、逆转录和整合功能。高纯度的病毒液则在包装细胞内生成，经浓缩后成为病毒感染细胞的高效工具。实际应用与实验流程 在实验中，慢病毒载体的构建与...
培养细胞如何提取mRNA,如何逆转录?
加20-100 ul热的（70℃）Buffer OEB到柱子上，用Tip来回吸打3-4次，高速离心1分钟。9）、为保证最大的 mRNA产量，可再次重复第8步。10）、电泳。RNA提取的原理就是核酸在异丙醇中的溶解度很低！其他步骤都是防止RNA降解和使RNA从细胞中溶出。逆转录过程请看参考资料。
真核生物的转录
在早期的实验指出,另外有一个转录因子TFⅡA会结合到起始复合体上并稳定其结构,但目前已证实TFⅡA只是在纯化TFⅡD时一起沉淀下来的蛋白而巳,在转录的起始过程中并非是必需的因子。 步骤二:TFⅡB 如图三,转录因子TFⅡB对起始复合体的结合与否,为转录起始作用过程的速率限制步骤(rate-limiting step)。而RNA聚合酶...
RNA反转录为cDNA 原理 主要想知道各个水浴、冰浴步骤在实验中的作用
第一次70度水浴5min为让RNA二级结构打开，便于引物结合。第一次冰浴1min为了退火，让引物能够结合RNA。37度水域是让cDNA聚合。第二次70℃水浴是再变性，让引物脱离模板RNA和cDNA第一链。第二次冰浴是为了让cDNA-RNA复性成为cDNA-RNA杂合双链。明白没有？
基因组表达连续分析SAGE的原理和实验路线
其次，通过将这些标签集中在一个克隆中进行测序，并将连续的短序列数据输入计算机处理，可以对大量的mRNA转录物进行分析。SAGE的实验流程包括以下步骤：首先，使用biotinylated oligo(dT)反转录cDNA，并使用限制性内切酶AE进行酶切，确保每个转录物至少有一个酶切位点。将cDNA分为两部分，分别连接接头A或B，...
人群中有若干种遗传病是由于苯丙氨酸的代谢缺陷所导致,人体内苯丙氨 ...
因此还需要向试管中加入核糖体和tRNA．③实验步骤：第二步：本实验的目的是探究某种抗生素能否阻断某种细菌DNA和人体DNA的转录过程．因此该实验的自变量为是否加入某种抗生素，即A管中加入适量某种抗生素水溶液，B管中加入等量的蒸馏水，同时A、B试管中加入适量的细菌DNA（作为转录的模板）．向C试管滴加适量...
巴塘县蟾麝回答：[答案] 1.mRNA的纯化 2.cDNA第一链的合成 3.cDNA第二链的合成 4.cDNA克隆 5.将重组体导入宿主细胞 6.cDNA文库的鉴定 7.目的cDNA克隆的分离和鉴定 大概就这7个过程把.
鱼咏15520633973问： 反转录的实验步骤要做实验了,越具体越好要写实验报告 - ？
巴塘县蟾麝回答：[答案] 你按照买的反转录试剂盒来做就行.(1)、从细胞中提取细胞总RNA用GIBCO公司的Trizol试剂提取细胞总RNA.按试剂使用说明操作:离心收集细胞,倾去细胞液,向沉淀中加1 ml Trizo1(每106-107细胞),混匀至室温5分钟,用1 ml加...
鱼咏15520633973问： RNA是如何反转录成cDNA的?过程和原理怎样?请教 - ？
巴塘县蟾麝回答： 操作步骤是先加RNA、OligodT、随即引物、水 65C反应10min,冰上放置5min后:这一步是让RNA变性,把RNA的二级结构打开; 再加dNTP,RNaseA,BUFFER, MTV逆转录酶, 反应25℃10min:这一步是让反转录引物(oligodT,随机引物)和模板RNA退火结合 37℃60min:这一步是反转录酶的工作温度 70℃10min:这一步是变性,把合成的cDNA和RNA变性开,就拿到单链的cDNA
鱼咏15520633973问： RNA反转录为cDNA 原理 主要想知道各个水浴、冰浴步骤在实验中的作用RNA反转录过程步骤如下:将提取的RNA用DEPC水吹起,加入引物1、引物2,加... - ？
巴塘县蟾麝回答：[答案] 第一次70度水浴5min为让RNA二级结构打开,便于引物结合. 第一次冰浴1min为了退火,让引物能够结合RNA. 37度水域是让cDNA聚合. 第二次70℃水浴是再变性,让引物脱离模板RNA和cDNA第一链. 第二次冰浴是为了让cDNA-RNA复性成为cDNA-...
鱼咏15520633973问： 论述反转录法提取目的基因的全过程 - ？
巴塘县蟾麝回答： 以目的基因转录成的信使RNA为模板,反转录成互补的单链DNA(cDNA),然后在酶的作用下合成双链DNA,从而获取所需的基因.是基因工程中提取目的基因的重要方法之一.优缺点 优点:该方法专一性强,目的基因不含内含子,可合成自然界不存在的新基因.缺点:操作复杂,形成的mRNA为单链,生存时间短,很不稳定,要求的技术条件也较高.因为直接从生物体中提取的基因的编码区是不连续的有不编码蛋白质的内含子部分,而反转录来的cDNA的编码区是连续的(成熟mRNA中的序列都是由基因的编码区的外显子部分转录来的),为了节省目的基因片段的长度,选择cDNA为目的基因.
鱼咏15520633973问： RNA的提取和反转录的实验步骤? - ？
巴塘县蟾麝回答： 小麦总RNA的提取 实验目的 从黄化小麦苗中提取总RNA,可以为cDNA文库的构建做好准备.我们重点是要保证RNA的完整性、产率、防止修饰和纯度,尤其是完整性、防止修饰和纯度.RNA是单链,2'OH是它的化学性质远比DNA活泼.所...
鱼咏15520633973问： RNA逆转录的具体过程是怎样的? - ？
巴塘县蟾麝回答： 更正一下tchxb的答案: 先转出与RNA互补的DNA单链,后转出双链DNA RNA首先反转录成cDNA(负链DNA),构成RNA-DNA中间体.中间体中的RNA再经过RNA酶H水解,而以剩下的负链DNA复制成双股DNA. tchxb的答案基本上是对的.
鱼咏15520633973问： RNA反转录为cDNA 原理 主要想知道各个水浴、冰浴步骤在实验中的作用 - ？
巴塘县蟾麝回答： 第一次70度水浴5min为让RNA二级结构打开,便于引物结合. 第一次冰浴1min为了退火,让引物能够结合RNA. 37度水域是让cDNA聚合. 第二次70℃水浴是再变性,让引物脱离模板RNA和cDNA第一链. 第二次冰浴是为了让cDNA-RNA复性成为cDNA-RNA杂合双链. 明白没有?
鱼咏15520633973问： 设计一个检测某一基因是否转录的检测方法的实验,简述其过程与原理. - ？
巴塘县蟾麝回答： 原理:转录是以一条DNA链为模板,合成出一条mRNA的过程.所以,检测某一基因在特定条件下是否转录,可以提取样品的mRNA,反转录成cDNA,然后用扩增该基因的PCR引物扩增,如果有条带就是说明转录,没有条带就是不转录. 过程: 1.提取样品mRNA; 2.反转录合成cDNA; 3.设计该基因特异的PCR引物; 4.进行PCR扩增,电泳,检测结果.
鱼咏15520633973问： 由mRNA反转录形成cDNA的过程大致分为哪些步骤? - ？
巴塘县蟾麝回答： 在PCR仪中,95度变性,72度延伸,Tm温度退火,来回30-35个循环,最后4度,就能得到反转录的cDNA.
