反转录实验条件
DNA复制、转录、翻译的条件? DNA复制、转录、翻译的遗传信息流动方向...
DNA复制、转录、翻译的条件（四要素）：都需要模板、原料、能量、酶，具体如下：依次为：DNA复制 转录 翻译 模板：解旋后的DNA两条单链 DNA的一条单链（反义链） mRNA 酶 ：DNA聚合酶，解旋酶 RNA聚合酶，解旋酶 翻译相关酶（如：缩合酶）原料：脱氧核苷酸 核糖核苷酸 ...
转录需要哪些酶的参与和这些酶的作用
转录需要RNA聚合酶的参与，这些酶的作用是催化RNA合成。在原核生物转录的过程中只有一种RNA聚合酶，催化所有RNA的合成。在真核生物中则有RNA聚合酶Ⅰ、RNA聚合酶Ⅱ和RNA聚合酶Ⅲ三种不同酶。RNA聚合酶Ⅰ存在于细胞核内，催化合成除5SrRNA以外的所有rRNA的合成；RNA聚合酶Ⅱ催化合成mRNA前体，即不均一核...
转录因子实验研究方法有哪些?
大体的实验流程可分为:1.利用甲醛交联转录因子与DNA片段;2.切断DNA为100到500bp的片段;3.通过转录因子特异性抗体,富集与TF结合的DNA;4.去交联后,富集DNA进行芯片或高通量测序。 3.2.1.4ChIP-seq ChIP-seq的实验过程与之间介绍的DIP-seq非常类似,唯一不同是,ChIP-seq可以通过甲醛原位交联TF与DNA,而DIP-seq只...
转录组实验设计要尽量避免哪些因素带来的影响?
1、样本选择：样本选择是转录组学研究中最基本的步骤之一，直接影响到后续的数据分析和结果解释。选择样本时应尽量确保样本之间的相似性，以减少由于生物差异带来的误差。还应考虑到样本数量的合理性，以提高数据的统计学意义。2、对照组设置：在实验设计中应合理设置对照组和实验组，对照组是与实验组具有...
反转录的实验步骤
1. 从细胞或组织中提取RNA。这一步是反转录实验的基础，因为RNA是反转录的模板。提取RNA时，要确保使用适当的试剂和方法，以避免RNA酶的降解。二、进行反转录酶反应。1. 在RNA模板存在的情况下，使用反转录酶将RNA转换为DNA。这是反转录的核心步骤，需要严格控制反应条件以确保反应的顺利进行。2. 反...
DNA复制,转录,翻译所需要的原料都分别是什么
(1)概念：在细胞核中，以DNA的一条链为模板，按照碱基互补配对原则，合成RNA的过程。(2)过程：DNA解旋（需要解旋酶）→游离脱氧核糖核苷酸与DNA一条链上碱基互补配对→RNA新链的延伸→合成的RNA从DNA链上释放，DNA双链恢 转录形成的RNA有三种，mRNA、tRNA、rRNA。mRNA:携带遗传信息，蛋白质合成的模板...
高中生物必修2比较复制转录翻译知识点整理
1、证明DNA是遗传物质的实验关键是：设法把DNA与蛋白质分开，单独直接地观察DNA的作用。2、肺炎双球菌的类型：①、R型(英文Rough是粗糙之意)，菌落粗糙，菌体无多糖荚膜，无毒，注入小鼠体内后，小鼠不死亡。②、S型(英文Smooth是光滑之意)：菌落光滑，菌体有多糖荚膜，有毒，注入到小鼠体内可以使小鼠...
真核生物的转录
RNA聚合酶1负责转录rRNA。RNA聚合酶2负责转录结构基因mRNA和部分snRNA。RNA聚合酶3负责转录tRNA和5s rRNA。 真核生物RNA聚合酶2必须与多与20个转录因子TF2(transcription factor; 或称转录起始因子,transcription initiation factor,TIF;或称一般转录因子,general transcription factor,GTF)逐级组装成“完全的转录起始复合...
什么实验适合做转录组
取样实验适合做转录组。转录组测序关键是取样，选择合适的处理以及对照。除测序数据量外，还有很多指标可以衡量转录组测序质量的，如rRNA消除比例、测序duplicated reads的比例、每个转录本的测序均一性、测序的可重复性、不同GC或不同长度转录本的表达丰度是否存在偏移等。区别 全面快速地获取某一物种特定...
简述RNA转录的基本过程和特点?
有实验表明CAAT框与转录起始频率有关,例如缺失GG,兔子的β珠蛋白基因转录效率只有原来的12%(图17-5)。图17-5 Eukaryotic gene promoter sequences 除启动子外,真核生物转录起始点上游处还有一个称为增强子的序列,它能极大地增强启动子的活性,它的位置往往不固定,可存在于启动子上游或下游,对启动子来说它们正向...
陇县参芪回答：[答案] 2、3、6、8 您想要什么解释?2是模板,3是原料,8是环境条件,6是催化剂
励弘15313777839问： RNA是如何反转录成cDNA的?过程和原理怎样?请教 - ？
陇县参芪回答： 操作步骤是先加RNA、OligodT、随即引物、水 65C反应10min,冰上放置5min后:这一步是让RNA变性,把RNA的二级结构打开; 再加dNTP,RNaseA,BUFFER, MTV逆转录酶, 反应25℃10min:这一步是让反转录引物(oligodT,随机引物)和模板RNA退火结合 37℃60min:这一步是反转录酶的工作温度 70℃10min:这一步是变性,把合成的cDNA和RNA变性开,就拿到单链的cDNA
励弘15313777839问： 反转录的实验步骤要做实验了,越具体越好要写实验报告 - ？
陇县参芪回答：[答案] 你按照买的反转录试剂盒来做就行.(1)、从细胞中提取细胞总RNA用GIBCO公司的Trizol试剂提取细胞总RNA.按试剂使用说明操作:离心收集细胞,倾去细胞液,向沉淀中加1 ml Trizo1(每106-107细胞),混匀至室温5分钟,用1 ml加...
励弘15313777839问： 为什么反转录反应需要rnase inhibitor - ？
陇县参芪回答： 1. 其实反转录要求不是很高,所有器具消毒操作带手套口罩就行,没必要加RNaseInhibitor 2. 2.OD260/280实际上反应的是蛋白质杂质的比例,可以间接的反应有没有RNA酶污染,所以这个比值低了有可能是RNA酶污染,也可能是提取操作或者...
励弘15313777839问： “反转录”是在反转录病毒合成RNA还是合成蛋白质是进行的啊? - ？
陇县参芪回答： 反转录是在反转录酶的作用下合成mRNA的,mRNA进一通过转录酶合成DNA,进而基因(DNA)指导蛋白质的合成,事实上合成蛋白质的分为转录和翻译两个过程!所以反转录是在反转录病毒合成RNA,而不是在合成蛋白质时进行的!
励弘15313777839问： 论述反转录法提取目的基因的全过程 - ？
陇县参芪回答： 以目的基因转录成的信使RNA为模板,反转录成互补的单链DNA(cDNA),然后在酶的作用下合成双链DNA,从而获取所需的基因.是基因工程中提取目的基因的重要方法之一.优缺点 优点:该方法专一性强,目的基因不含内含子,可合成自然界不存在的新基因.缺点:操作复杂,形成的mRNA为单链,生存时间短,很不稳定,要求的技术条件也较高.因为直接从生物体中提取的基因的编码区是不连续的有不编码蛋白质的内含子部分,而反转录来的cDNA的编码区是连续的(成熟mRNA中的序列都是由基因的编码区的外显子部分转录来的),为了节省目的基因片段的长度,选择cDNA为目的基因.
励弘15313777839问： 在研究基因突变的时候,直接提取DNA和提取RNA反转录为cDNA进行分析有什么区别?分别在什么条件下使用这两种方法呢? - ？
陇县参芪回答：[答案] RNA有可能再转录之后再修饰,可能会去掉一部分DNA再连起来,这时候得到的cDNA就和基因组上的cDNA有区别,突变要是发生在这部分(是不是外显子我还真不知道,好像还就不是)你提取逆转录的cDNA就没用呗
励弘15313777839问： 要做Real - time PCR,都要准备什么? 已解决 - ？
陇县参芪回答： 细胞按要求培养,抽RNA, 反转录为cDNA.有细胞计数,测RNA 浓度(分光光度计)等环节.选择反应物,待测样本:0hr, P4, L4, P12, L12, P24, L24, P36, L36 九种 阴性对照:即无模板对照, NTC 作为标准的样品:如果有必要做标准曲线...
励弘15313777839问： 什么叫逆转录 - ？
陇县参芪回答： 逆转录reverse transcription:以RNA以模板合成DNA的过程,是RNA病毒的复制形式,需逆转录酶的催化.其过程先以RNA为模板,合成RNA/DNA杂化双链,然后水解RNA链,再以剩下的DNA单链为模板合成DNA双链.逆转录病毒的逆转录酶有催化这三个过程进行的活性. 艾滋病病毒(HIV)就是一种逆转录病毒. 还有一些病毒没有RNA就以蛋白质为模版进行逆转录~
励弘15313777839问： 设计一个检测某一基因是否转录的检测方法的实验,简述其过程与原理. - ？
陇县参芪回答： 原理:转录是以一条DNA链为模板,合成出一条mRNA的过程.所以,检测某一基因在特定条件下是否转录,可以提取样品的mRNA,反转录成cDNA,然后用扩增该基因的PCR引物扩增,如果有条带就是说明转录,没有条带就是不转录. 过程: 1.提取样品mRNA; 2.反转录合成cDNA; 3.设计该基因特异的PCR引物; 4.进行PCR扩增,电泳,检测结果.
