反转录步骤两步法
求RT-PCR 流程和注意事项
解答:1.RT-PCR有两种做法:条件具备的话可用kit进行一步法进行;若条件不太好的话可分两步进行逆转录再PCR。但后来发现两步法的结果更加理想,条带特异性强且无拖尾现象,我推 测是体系更加单一比较利于PCR的进行,当然也可能是我买的kit不太好。(promega)。2.RT-PCR应具备的条件高质量的RNA(保留后可做5,3RACE)...
标准的聚合酶链式反应过程分为哪三步?
DNA聚合酶链式反应（PCR）现在有些PCR因为扩增区很短，即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的时间内复制完成，因此可以改为两步法，即退火和延伸同时在60～65℃间进行，以减少一次升降温过程，提高了反应速度。PCR反应扩增出了高的拷贝数后，就要对扩增结果进行检测。荧光素(溴化乙锭，EB)染色凝胶电泳是最...
各位高手谁能给我详细的讲解一下PCR技术的过程
现在有些PCR因为扩增区很短,即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的时间内复制完成,因此可以改为两步法,即退火和延伸同时在60℃-65℃间进行,以减少一次升降温过程,提高了反应速度。编辑本段循环参数 1、预变性(Initial denaturation). 模板DNA完全变性对PCR能否成功至关重要,一般95℃加热3-5分钟。 2、引物退火(Prime...
PCR一步法和两步法有什么区别吗?
举个例子，如果想对同一样本同时扩增2个以上的基因，那么一步法是从RNA开始的， 即分别取相同量的RNA，然后逆转录，然后加入不同的primer PCR，方法固然简单，但逆转录酶很贵。如果两步法，可将RNA逆转录为cDNA，然后每次加入相同量的cDNA，再加不同的引物PCR，这样可比性强， 而且不需逆转录，直接...
两步法逆转录反应过程中是否需要进行离心?
加样之后，是需要离心的，可以起到将各试剂离心到底和混匀的作用。
PCR的两步法和三步法有什么区别
两步法是只有循环中只有“变性”—“退火延展”两个温度变化 三步法是“变性”—“退火”—“延展”三个温度变化 简单说两步法就是2个温度循环 三步法就是3个温度循环 用两步法快些，但要看酶活性，三步法比较保险。这是我十年前上学的时候老师教的，回答完毕！
普通PCR、原位PCR、反向PCR和反转录PCR的 基本原理和操作步骤(一)
现在有些PCR因为扩增区很短,即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的时间内复制完成,因此可以改为两步法,即退火和延伸同时在60℃-65℃间进行,以减少一次升降温过程,提高了反应速度。 4 PCR反应特点 4.1特异性强 PCR反应的特异性决定因素为: ①引物与模板DNA特异正确的结合; ②碱基配对原则; ③Taq DNA聚合酶合成...
怎样从RNA到cDNA
用反转录试剂盒，各个公司都有卖。里面有说明书，不同公司方法不同。都是以RNA为模版，加DT18,加酶，加buffer，加RNAase啥的，然后0°放一会，12°放一会啥的。具体看说明书吧。我用的反转录试剂盒试剂购自TOYOBO 公司，天根公司的也不错我也用过。
RT-qPCR 基本原理
一步法RT-qPCR把逆转录与PCR扩增结合在一起，使逆转录酶与DNA聚合酶在同一管内同样缓冲液条件下完成反应。一步法RT-qPCR只需要利用序列特异性引物。在两步法RT-qPCR中，逆转录和PCR扩增过程是在两个管中完成，使用不同的优化的缓冲液、反应条件、以及引物设计策略。在设计RT-qPCR实验过程中，决定是否...
小分子RNA的检测方法
目前市场上miRNA qPCR检测方法主要有以下两种：1. 两步法； 2.三步加尾法。两种方法的主要差别在于qPCR之前的cDNA制备过程（如图）。其中两步法是通过独特设计的茎环结构引物进行反转录将miRNA反转录成cDNA。而三步法则是给miRNA序列加polyA尾，之后再利用反转录过程将miRNA反转录成cDNA并加上独特设计的...
芜湖县致平回答：[答案] 你按照买的反转录试剂盒来做就行.(1)、从细胞中提取细胞总RNA用GIBCO公司的Trizol试剂提取细胞总RNA.按试剂使用说明操作:离心收集细胞,倾去细胞液,向沉淀中加1 ml Trizo1(每106-107细胞),混匀至室温5分钟,用1 ml加...
居狠18267988948问： 病毒RNA的反转录步骤 - ？
芜湖县致平回答：[答案] RNA → DNA → RNA → 蛋白质 逆转录 (解旋) 转录 翻译
居狠18267988948问： 逆转录和反转录一样吗?在反转录中是否需要核糖核酸酶?*作用是什么? 求解!!! - ？
芜湖县致平回答： 逆转录和反转录一样的意思,反转录其实分为两步,以RNA为模板合成第一链cDNA,然后用核酸酶消化RNA-DNA中的部分RNA,之后以RNA为引物合成cDNA第二条链
居狠18267988948问： RNA是如何反转录成cDNA的?过程和原理怎样?请教 - ？
芜湖县致平回答： 操作步骤是先加RNA、OligodT、随即引物、水 65C反应10min,冰上放置5min后:这一步是让RNA变性,把RNA的二级结构打开; 再加dNTP,RNaseA,BUFFER, MTV逆转录酶, 反应25℃10min:这一步是让反转录引物(oligodT,随机引物)和模板RNA退火结合 37℃60min:这一步是反转录酶的工作温度 70℃10min:这一步是变性,把合成的cDNA和RNA变性开,就拿到单链的cDNA
居狠18267988948问： RNA逆转录的具体过程是怎样的? - ？
芜湖县致平回答： 更正一下tchxb的答案: 先转出与RNA互补的DNA单链,后转出双链DNA RNA首先反转录成cDNA(负链DNA),构成RNA-DNA中间体.中间体中的RNA再经过RNA酶H水解,而以剩下的负链DNA复制成双股DNA. tchxb的答案基本上是对的.
居狠18267988948问： mRNA反转录形成cDNA 大致分为哪些步骤?大致便可,谢啦.. - ？
芜湖县致平回答：[答案] 先从细胞提取总RNA,然后根据大多数真核mRNA含有多聚腺嘌呤(polyadenylic acid ,polyA)尾的特点,用寡聚dT纤维素柱将mRNA分离出,以mRNA为模板,在多聚A尾上结合12-18个dT的寡聚dT片段,作为合适的起始引物,在逆转录酶作用下合成
居狠18267988948问： 由mRNA反转录形成cDNA的过程大致分为哪些步骤? - ？
芜湖县致平回答：[答案] 在PCR仪中,95度变性,72度延伸,Tm温度退火,来回30-35个循环,最后4度,就能得到反转录的cDNA.
居狠18267988948问： PT - PCR操作流程 - ？
芜湖县致平回答： 是RT-PCR啊. 一、实验器具与材料: 1、移液枪:1ml、200μl、20μl、10μl、2μl 2、吸头:1ml、200μl、20μl 3、匀浆管:5ml 4、吸头台:放置1ml吸头的一个,放置20μl吸头的一个 5、EP管:1.5ml、0.2ml、100μl 6、试剂瓶:2个60ml的棕色...
居狠18267988948问： 小分子RNA的检测方法 - ？
芜湖县致平回答： 实时荧光定量PCR技术是1996年由美国Applied biosystems公司推出在定性PCR技术基础上发展起来的核酸定量技术.该技术在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,使每一个循环变得“可见”,...
居狠18267988948问： DNA怎么逆转录.举几个例子 - ？
芜湖县致平回答： 到目前为止,没听过DNA逆转录,我们只学过RNA逆转录.Temin等人发现,某些引起肿瘤的RNA病毒以RNA为模板,反向地合成DNA(即反转录,也称逆转录),然后再以这段病毒为模板,互补地合成RNA,这是病毒复制的另一种方式. 希望能够对你有所帮助.
