wb内参是跟目的蛋白一起加吗
IB\/IP\/WB常用内参和标签
在WB（Western Blot）实验中，内参蛋白是不可或缺的参照物，它们用于调整和评估实验结果中的蛋白表达差异。选择内参的首要条件是其在不同组织细胞中表达稳定，如β-actin、β-tubulin、GAPDH和Lamin B等常见的内参蛋白，它们的表达量恒定，适合监控实验体系的正常运作。β-actin，作为细胞浆内的肌动蛋白，...
索莱宝Western Blot内参抗体选择原则
三、表达位置的精确匹配 在蛋白检测的普遍应用中，β-actin和β-Tubulin是常客。然而，针对核蛋白研究，如核蛋白目的蛋白，Lamin A、Lamin B、Histone H3等核内参抗体将提供更精确的内部参照。对于膜蛋白，Na,K ATPase是理想选择；线粒体蛋白则可以选择VDAC1和COX IV作为内参。但请注意，内参的选择并非...
western 内参用的GAPDH 和B-actin蛋白的分子量是多少
GAPDH的分子量约为146千道尔顿（KD），在检测条带上通常显示出36kD的信号。而B-actin的分子量更低，为42KD。这些内参蛋白的存在对于实验的准确性和可比性至关重要，因为它们作为参照标准，确保在不同条件或组织中对比目的蛋白表达时，样本量的精确控制是必不可少的。尤其当目的蛋白表达量较低时，内参...
实时定量pcr内参以及相对标准曲线的问题
每个样品需要测定目的基因A，B和内参，那就做3*3*3=27个孔就好了，3个样品，每个样品测三个基因，每一个基因做3个重复取平均。标准曲线的话，既然你已经做内参了，标准曲线就不用做了。把你的目的基因测得的量除以内参，做一个标准化就可以比较不同样品中目的基因的差异了。
RT-PCR是,内参是什么时候加入,作用是什么?谢谢
time一定要分开来。常说的qpcr，qrt-pcr，都是通过实时（real time）的方法，测定样品中某个模版的起始量ct值 但是呢，由于之前rna提取、反转等步骤，各个步骤存在不同的效率，ct值并无法真实反应样品中模版的绝对量，因此，需要一个内参来做为参考。比方说，a基因的ct值，在a样品中是18，在b样品中...
核蛋白的western blot 是能用B-action 作为内参吗
核蛋白的western blot一般是不能用B-action作为内参的 因为beta-action是质内参，细胞核里没有的。核内参可以用Lamin B或者histone，前者分子量比较大，后者分子量比较小，看具体核蛋白的大小来选择。
western 抗体是根据物种选的么
首先要考虑的就是实验样本来源于什么物种。1、哺乳动物的组织或者细胞样本，通常选择β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B、Histone H3、Na,K atpase等。2、植物来源实验样本，则可以选择plantactin、Rubisco等。3、其他来源样本研究较少，所以就应该参照文献报导，选择合适的蛋白作为内参。二.目的蛋白分子...
蛋白质印记图里的action是啥意思
核蛋白的western blot一般是不能用B-action作为内参的 因为beta-action是质内参，细胞核里没有的。核内参可以用Lamin B或者histone，前者分子量比较大，后者分子量比较小，看具体核蛋白的大小来选择。8548
关于western blot 内参是什么
我们一般都是用Actin，也就是肌动蛋白来做内参的。
请问荧光定量PCR进行相对定量时,若是目的基因和内参基因扩增效率不一致...
你先得弄清相对定量什么意思，举个例子，样品a和样品b中检测基因Y的表达水平，以b-actin为内参，相对定量就是用样品a中的基因Y的量除以b-actin得到值y1，用样品b中的基因Y的量除以b-actin得到值y2，然后y1\/y2就是基因y在样品a和b中的相对表达水平。若基因Y和b-actin扩增效率不一致，那么y1\/y2...
单县曲奥回答： Western Blot为什么必须要用内参 要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot.因为Western Blot操作相对简单方便,既可以定性分析表达产物,同时还可以指示目的蛋白量的相对变化.虽然,...
东野虾19293607148问： western blot的内参怎么用的 - ？
单县曲奥回答： 根据不同位置比如胞浆、线粒体、细胞核选择;与你的目的蛋白分子量要有差距,不然跑在一起无法分开~
东野虾19293607148问： wb 中内参齐为什么蛋白就一致 - ？
单县曲奥回答： = 胞浆蛋白就是胞浆里的蛋白啊……用普通的提取方法就好了,网上一搜一大堆…… 做胞浆蛋白的话,wb的内参一般为β-actin或者gapdh,主要还是要看你的细胞表达哪一个.
东野虾19293607148问： WB试验之如何选择内参抗体 - ？
单县曲奥回答： 你选择的目的蛋白位于什么地方~细胞核 胞质 线粒体~你要观察的是目的蛋白在哪一部分的含量~选择相应的内参~全细胞比如GAPDH HSP90AA1等~还有内参分子量要与目的蛋白分子量有一定差距~避免分不开~当然你可以选择不同种属的抗体来避免这个问题~
东野虾19293607148问： westernblotting中内参的作用是什么希望大家可以讲解 ？
单县曲奥回答： 嗯,同意楼上的说法,内参一般都是选用细胞内表达稳定,表达量比较高的蛋白,比如一些骨架蛋白.这些蛋白一般认为不会因为实验处理,细胞状态不同而在总蛋白中的含量有大的起伏.有内参的话,你的目的蛋白的表达的比较才有意义,否则的话,你说某一组的目标蛋白表达升高了,怎么排除你上样上多了的原因.
东野虾19293607148问： 做wb的bax和bcl - 2的目的蛋白时会出现时间长的细胞凋亡而导致内参出不来吗 - ？
单县曲奥回答： α-平滑肌肌动蛋白是23kD.1、如果是提取的总蛋白,然后做WB,用β-actin或者GAPDH做内参肯定是没有问题的,这是公认的东西.2、如果用膜蛋白提取试剂盒提取蛋白,再用β-actin作为内参似乎不妥,因为理论上来讲β-actin在膜上是不表达的.WB能做出β-actin来是因为膜蛋白提取时把胞质蛋白也提出来了.然而,如果我们试验目的是用药物处理细胞,比较处理前后某种膜蛋白的表达情况,此时用膜蛋白提取试剂盒提取膜蛋白后再用β-actin做内参似乎就不妥了,因为你根本不知道药物处理前后混杂了多少的胞质蛋白进来.如果没有胞质蛋白混进去的话,β-actin就是检测不到的.
东野虾19293607148问： western blot总蛋白定量必要吗 - ？
单县曲奥回答： 总蛋白定量是标准程序.由于跑胶的时候每个点样孔,每个跑道有一定的容量,加多了会堵塞,加太少则有可能检测不到,造成假阴性.所以有必要对总蛋白量有所控制.但是对有经验的人士来说,做到适量的加样确实不需要分光光度计测量那...
东野虾19293607148问： 什么是内参抗体?购买内参抗体需要注意什么? ？
单县曲奥回答： 要用内参即是内部参照(Internal Control),对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白(Housekeeping Proteins),它们在各组织和细胞中的表达相...
东野虾19293607148问： 荧光定量PCR的内参和目的基因一定要放一起吗 - ？
单县曲奥回答： 荧光定量PCR的内参和目的基因一定要放一起内参就是一个表达量在各个组基本保持不变的基因,又叫看家基因,比如常用的GAPDH, actin.或者18s rRNA也可以.如果内参表达量一致,说明你PCR的上样量一致,样本的质量也一致.如果出入很大,说明你的样本的浓度或者是质量有问题.测到的目的基因的表达量就不可靠了
东野虾19293607148问： 求助 关于上样量 - ？
单县曲奥回答： >这要根据你做的蛋白表达量多少,一般是用dab显色要50-100μg,用ecl曝光上样量为20-40μg.但根据你蛋白表达量的不同目标蛋白绝对量dab法至少50pg,ecl法至少20pg.我也用组织作过western,蛋白浓度的确很高. 通常我上50-100ug,足...
