有限稀释法+单克隆
单克隆挑不出如何解决(单克隆,转染,细胞液,稀
如果有细胞长不起来，有可能是折腾时间太久，细胞状态不好了。细胞还贴壁吗？如果贴壁接换回液。单克隆化没什么技巧。单克隆荧光阳性细胞的挑选：荧光蛋白标记的细胞以荧光倒置显微镜和FACS检测荧光细胞百分比，必要时重复转染一次，有限稀释法获得荧光阳性单克隆：于96孔板中8孔为一组，每组除第一孔外其余...
动物细胞工程单克隆抗体的制备
细胞融合的关键在于提供无菌环境和精确操作，以防止污染。融合后的阳性克隆需通过灵敏、准确的检测方法筛选，如RIA法、ELISA法或免疫荧光法，以确认其产生特异性抗体的能力。克隆化是通过有限稀释法等手段，从杂交瘤细胞中获得单一细胞系，确保稳定性和一致性。制备后的单克隆抗体有着广泛的应用，如作为诊断...
请问哪位高手能告诉我如何利用极限稀释法来培养单细胞克隆,非常感谢
其实很简单的啊，就是把你要分离单克隆的细胞收集之后做梯度稀释，稀释到一定的倍数之后，培养，扩出来的就是单克隆了。
单克隆抗体中两次筛选分别是什么方法
2、通常采用有限稀释克隆细胞的方法，将杂交瘤细胞多倍稀释，接种在多孔的细胞培养板上，使每一孔含一个或几个杂交瘤细胞（理论上30%的孔中细胞数为0时，才能保证有些孔中是单个细胞），再由这些单细胞克隆生长，最终选出分泌预定特异抗体的杂交细胞株进行扩大培养。
单克隆抗体
4.杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化 在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞，只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞，因此，必须进行筛选和克隆化。通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。采用灵敏、快速、特异的免疫学方法，筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞，并进行克隆扩增。经过全面鉴定其...
利用培养基限定法纯化动物细胞的方法利用培养基限定法纯化动物细胞的方...
在建立限定条件后，需要进行目标细胞的分离和筛选。通常可以采用单克隆稀释法或限制性稀释法来分离单个细胞。对于单克隆稀释法，可以通过限制性稀释来分离单个细胞，并在培养基中进行单个细胞的培养和筛选。对于限制性稀释法，可以通过限制性稀释来使细胞生长成为单个细胞的克隆，从而纯化目标细胞。4. 验证目标...
细胞转染,挑单克隆
无限稀释法，就是铺到96板的一个孔，然后倍数稀释下去，到最后就会有一个细胞的孔，还有就是细胞计数，然后再铺96孔，也会出现一个细胞，但是对于挑单克隆来说，我觉得没必要单个细胞，单个细胞也不容易长起来，虽然挑克隆可能是混转的，但是不会影响实验需求。大家都是用什么方法挑选细胞单克隆的 单...
单克隆抗体的制备技术路线和关键点
1.有限稀释法克隆 (1)克隆前1天制备饲养细胞层(同细胞融合)。 2)将要克隆的杂交瘤细胞从培养孔内轻轻吹干,计数。 (3)调整细胞为3～10个细胞\/ml。 (4)取头天准备的饲养细胞层的细胞培养板,每孔加入稀释细胞100μl。孵育于37℃、5%CO2孵箱中 。 (5)在第7天换液,以后每2～3天换液1次。 (6)8～9天...
单克隆抗体的制备过程
只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶，并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性，因此能在HAT培养基中存活和增殖。4、杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化 在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞，只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞，因此，必须进行筛选和克隆化。通常采用有限稀释法进...
求大神讲解一下单克隆筛选的原理,最好通俗一点哈
谢邀！细胞单克隆筛选 细胞单克隆筛选是根据细胞所具有的特性将单个细胞从混合的细胞样品中分离出来的一种技术,是抗体制备细胞株优化、稳转细胞株构建、药物靶点筛选等应用中重要的一环,优质的单克隆细胞能够更好地为不同领域科学研究和药物研发提供支持。通俗的讲:就是将混合细胞通过3D打印技术（更精准高效...
北流市天麻回答： 单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体.通常采用杂交瘤技术来制备,杂交瘤(hybridoma)抗体技术是在细胞融合技术的基础上,将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤...
秋竖19447623137问： 单克隆抗体制备的基本原理与过程?有什么意义? - ？
北流市天麻回答： 哈哈~我们刚考到这题 原理: B淋巴细胞在抗原的刺激下,能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力.B细胞的这种能力和量是有限的,不可能持续分化增殖下去,因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的.将这种B细胞与...
秋竖19447623137问： 求有限稀释法(limiting dilution analysis,LDA)具体步骤 - ？
北流市天麻回答： 有限稀释法是一种常用的克隆方法. 将需要再克隆的细胞株自培养孔内吸出并作细胞计数,计出1mL的细胞数. 用HT培养液稀释, 使细胞浓度为50~60个/mL,于96孔培养板中每孔加0.1mL(五六个细胞/孔).接种2排,剩余细胞悬液用HT培...
秋竖19447623137问： 请问用有限稀释法筛选单克隆细胞的过程之中,培养液中也要加G418吗? - ？
北流市天麻回答： 当然也是需要加筛选抗生素的,否则长出来的单克隆有可能是没有转入目的基因的母细胞.
秋竖19447623137问： 单克隆抗体中两次筛选分别是什么方法 - ？
北流市天麻回答： 第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞,用连续注射抗原,下面具体介绍一下: 1、在实际免疫过程中,由于采用连续注射抗原的方法,且一种抗原决定簇刺激机体形成相对应的一种效应B淋巴细胞,因此,从小鼠脾脏中取出的效应B淋巴...
秋竖19447623137问： 制备单克隆抗体的技术流程是怎样的呢? ？
北流市天麻回答： (一)抗原提纯与动物免疫 对抗原的要求是纯度越高越好,尤其是初次免疫所用的抗... 融合细胞呈克隆生长,经有限稀释后(一般稀释至0.8个细胞/孔),按Poisson法计...
秋竖19447623137问： 怎样制备单克隆抗体？
北流市天麻回答： 这个在高三的生物选修很详细地说了... 难道楼主忘记了? 好啦..找给你... 1)免疫脾细胞的制备 制备单克隆抗体的动物多采用纯系 Balb/c小鼠.免疫的方法取决于所用抗原的性质.免疫方法同一般血清的制备,也可采用脾内直接免疫法. 2)骨...
秋竖19447623137问： 如何筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞? - ？
北流市天麻回答： 选择性培养基.
秋竖19447623137问： 细菌单菌落问题? - ？
北流市天麻回答： 1.平板划线法:用接种针在固体平板上进行三区或四区划线,培养后可得单克隆2.平板涂布法:做好平板,将菌液做浓度梯度稀释,取每个梯度稀释液少于200微升,涂布于平板上,培养后会在较低浓度得平板上长出单菌落3.混匀平板法,先不做平板,和上面类似,将菌液做浓度梯度稀释,取每个梯度稀释液少许和不热得培养基混匀,然后在倒板,也会在较低浓度得平板上长出单菌落
