标准的聚合酶链式反应过程分为哪三步？

聚合酶链式反应是怎么回事~

聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)，简称PCR，是一种分子生物学技术，用于放大特定的DNA片段，可看作生物体外的特殊DNA复制。PCR在1983年由美国科学家穆利斯发明，随后PCR技术在生物科研和临床应用中得以广泛应用，成为分子生物学研究的最重要技术。穆利斯因此获得了1993年诺贝尔化学奖。
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。但是，DNA聚合酶在高温时会失去活性，因此，每次循环都得加入新的DNA聚合酶，不仅操作繁琐，而且成本高昂，制约了PCR技术的应用和发展。发现耐热DNA聚合同酶-Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃的高温而不失去活性，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷，同时也大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。
标准的聚合酶链式反应过程分为三步：
(1)DNA变性(90～96℃)：DNA双螺旋结构的生物功能在于复制与转录，加热或在碱性条件下可以使DNA双螺旋的氢键断裂，形成单链DNA，称之为DNA变性。解除条件后，变形的单链DNA可以重新结合起来，再形成双链，称之为DNA复性，又叫退火。DNA双链离解一半时温度称为解链温度(Tm)。不同DNA的解链温度不同，取决于DNA中G—C与A—T的含量的区别。G—C间有3个氢键，A—T间有2个氢键，因此G—C比例大的DNA片段解链温度高，一般，G—C含量每增加1％，PCR变性温度增加0.4℃。Tm范围通常一般在85—95℃之间，PCR变性温度选择90～94℃，变性时间为30秒到2分钟；
(2)退火(25～65℃)：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链；
(3)延伸(70～75℃)：在Taq酶(在72℃左右最佳的活性)的作用下，以dNTP为原料，从引物的5′端一3′端延伸，合成与模板互补的DNA链。每一循环经过变性、退火和延伸，DNA含量既增加一倍。
现在有些PCR因为扩增区很短，即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的时间内复制完成，因此可以改为两步法，即退火和延伸同时在60～65℃间进行，以减少一次升降温过程，提高了反应速度。PCR反应扩增出了高的拷贝数后，就要对扩增结果进行检测。荧光素(溴化乙锭，EB)染色凝胶电泳是最常用的检测手段。电泳法检测特异性是不太高的，因此引物两聚体等非特异性的杂交体很容易引起误判。但因为其简捷易行，成为了主流检测方法。近年来以荧光探针为代表的检测方法，有逐渐取代电泳法的趋势。
PCR反应特异性强、灵敏度高、简便、快速，对标本的纯度要求低，不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA粗制品及RNA均可作为扩增模板。可直接用于临床标本如血液、体腔液、洗漱液、毛发、细胞、活组织等DNA扩增检测。

(1)DNA变性(90～96℃)：DNA双螺旋结构的生物功能在于复制与转录，加热或在碱性条件下可以使DNA双螺旋的氢键断裂，形成单链DNA，称之为DNA变性。解除条件后，变形的单链DNA可以重新结合起来，再形成双链，称之为DNA复性，又叫退火。DNA双链离解一半时温度称为解链温度(Tm)。不同DNA的解链温度不同，取决于DNA中G—C与A—T的含量的区别。G—C间有3个氢键，A—T间有2个氢键，因此G—C比例大的DNA片段解链温度高，一般，G—C含量每增加1％，PCR变性温度增加0.4℃。Tm范围通常一般在85—95℃之间，PCR变性温度选择90～94℃，变性时间为30秒到2分钟；

(2)退火(25～65℃)：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链；

(3)延伸(70～75℃)：在Taq酶(在72℃左右最佳的活性)的作用下，以dNTP为原料，从引物的5′端一3′端延伸，合成与模板互补的DNA链。每一循环经过变性、退火和延伸，DNA含量既增加一倍。

DNA聚合酶链式反应（PCR）现在有些PCR因为扩增区很短，即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的时间内复制完成，因此可以改为两步法，即退火和延伸同时在60～65℃间进行，以减少一次升降温过程，提高了反应速度。PCR反应扩增出了高的拷贝数后，就要对扩增结果进行检测。荧光素(溴化乙锭，EB)染色凝胶电泳是最常用的检测手段。电泳法检测特异性是不太高的，因此引物两聚体等非特异性的杂交体很容易引起误判。但因为其简捷易行，成为了主流检测方法。近年来以荧光探针为代表的检测方法，有逐渐取代电泳法的趋势。

PCR反应特异性强、灵敏度高、简便、快速，对标本的纯度要求低，不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA粗制品及RNA均可作为扩增模板。可直接用于临床标本如血液、体腔液、洗漱液、毛发、细胞、活组织等DNA扩增检测。

沙漠地区温差大，平均年温差可达30～50℃，日温差更大，夏天午间地面温度可达60℃以上，若在沙滩里埋一个鸡蛋，不久便烫熟了。夜间的温度又降到10℃以下。由于昼夜温差大，达到60℃，因此，有利于植物贮存糖分，所以沙漠绿洲中的瓜果都特别甜。这还只是指空气温度而言，变化更为剧烈的是沙子表面的温度。在炎热的夏天，干燥的沙子在中午强烈的日光照射之下，其温度可以达到70℃。当夜色降临的时候，沙漠表面沙子的温度便开始下降，甚至可以降到10℃以下，仅一天之内的温度变化，就已经超过70℃了。

沙漠中，虽然气温和地表温度变化剧烈，但地下的温度却比较稳定。比如，同样是在夏天，当表面的沙子一天之内温差的变化达70℃时，在地下40cm深处的温度变化只有5℃左右，而平均只是在25℃左右。在寒冷的冬天，地下的温度也比气温和地表温度高得多。有人曾经测量过，当沙子温度高达66℃时，地面以下46cm的洞内，温度仅为16℃。动物如果能够躲进这个洞穴之中，那将是多么凉爽啊！而且在洞穴内，湿度也比较高，这有助于动物减少体内水分的消耗和散失。

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封开县13646964169： PCR技术具体的过程 - ？
东野都牛黄：[答案] PCR技术(聚合酶链式反应)由变性--退火(复性)--延伸三个基本反应步骤构成: ①模板DNA的变性:模板DNA经加热至94℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应...

封开县13646964169： 生化退火的名词解释 - ？
东野都牛黄： ＂退火“生物化学概念名词,与生物化学概念名词＂复性＂同义.DNA分子受热变性,双链分开,若再缓慢冷却至室温,则在260nm处吸光度降到变性前的值,这一过程称为“退火”.经退火处理,可使变性DNA的两条多核苷酸链重新聚合成...

封开县13646964169： 聚合酶链式反应的过程是怎样的? ？
东野都牛黄： PCR(聚合酶链式反应)是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链,低温(经常是60°C左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至DNA聚合酶最适反应温度(72°C左右),DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链.基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备,能在变性温度,复性温度,延伸温度之间很好地进行控制.

封开县13646964169： PCR共分几步? - ？
东野都牛黄：[答案] 标准的PCR过程分为三步: 1.DNA变性 (90℃-96℃):双链DNA模板在热作用下,氢键断裂,形成单链DNA 2.退火 (25℃-65℃):系统温度降低,引物与DNA模板结合,形成局部双链. 3.延伸 (70℃-75℃):在Taq酶(在72℃左右,活性最...

封开县13646964169： 高中生物的聚合酶链式反应原理中标志的基因在哪步进行?？
东野都牛黄： PCR技术,就是你说的聚合酶链式反应.它的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于DNA碱基对排列顺序.PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板...

封开县13646964169： 简述聚合酶链式反应(PCR)的原理和具体过程. - ？
东野都牛黄： 原理就是DNA半保留复制吧 过程只要记住 1.DNA变性(90℃-96℃):双链DNA模板在热作用下, 氢键断裂,形成单链DNA 2.退火(25℃-65℃):系统温度降低,引物与DNA模板结合,形成局部双链. 3.延伸(70℃-75℃):在Taq酶(在72℃左右,活性最佳)的作用下,以dNTP为原料,从引物的5′端→3′端延伸,合成与模板互补的DNA链. 还有就是体外快速DNA复制 还有就是PCR反应五要素: 参加PCR反应的物质主要有五种即引物(PCR引物为DNA片段,细胞内DNA复制的引物为一段RNA链)、酶、dNTP、模板和缓冲液(其中需要Mg2+). 个人觉得这些才是重点

封开县13646964169： 标准的PCR过程一般分为变性、复性、延伸三大步,这三大步需要的温度依次是() - ？
东野都牛黄：[选项] A. 94℃、55℃、72℃ B. 72℃、50℃、92℃ C. 50℃、92℃、72℃ D. 80℃、50℃、72℃

封开县13646964169： 聚合酶链式反应的定义、原理及应用 - ？
东野都牛黄：[答案] 聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,为最常用的分子生物学技术之一.典型的PCR由(1)高温变性模板;(2)引物与模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反应组成一个循...