PCR的两步法和三步法有什么区别
我觉得还是看你用的机器和试剂盒吧,主要是那个聚合酶的要求.有的推荐两步法,有的推荐三步法.比如,ABI,roche都推荐两步法,tiangen的推荐三步法.我觉得,如果引物设计时的Tm值如果接近60度
异同?我觉得还是看你用的机器和试剂盒吧,主要是那个聚合酶的要求。有的推荐两步法,有的推荐三步法。
比如,ABI,roche都推荐两步法,tiangen的推荐三步法。
我觉得,如果引物设计时的Tm值如果接近60度(比如用ABI的primer
express设计的引物),就直接用两步法;如果Tm值不太符合两步法要求,即60度,还是三步法好些!
三步法是“变性”—“退火”—“延展”三个温度变化
简单说两步法就是2个温度循环
三步法就是3个温度循环
用两步法快些，但要看酶活性，
三步法比较保险。
这是我十年前上学的时候老师教的，回答完毕！
很多情况我们都常用三步法，保证在72度延伸，但是如果条件很苛刻，我们用两步法能够得到三步法批不到的片段。您说的如果是定量PCR的话，多情况用二步法，因为可以再60度左右既可以退火又可以延伸，因此很多定量PCR仪推荐用两步法。但是如果你想得到更加严谨的数据，三步法用于定量PCR是更准确的。
其实一步法并非是两步法的改进，根据实验目的不同，有时两步法会更好。举个例子，如果想对同一样本同时扩增2个以上的基因，那么一步法是从rna开始的，
即分别取相同量的rna，然后逆转录，然后加入不同的primer
pcr，方法固然简单，但逆转录酶很贵。如果两步法，可将rna逆转录为cdna，然后每次加入相同量的cdna，再加不同的引物pcr，这样可比性强，
而且不需逆转录，直接pcr即可。当然，如果想快速获得某一种基因，当然一步法好。所以一步法和两步法各有优点，不能一概而论。
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岛厘疏风：[答案] 很多情况我们都常用三步法,保证在72度延伸,但是如果条件很苛刻,我们用两步法能够得到三步法批不到的片段.您说的如果是定量PCR的话,多情况用二步法,因为可以再60度左右既可以退火又可以延伸,因此很多定量PCR仪推荐用两步法.但是...
渭城区15065387477： 普通PCR中一步法、两步法、三步法的定义、区别、通途以及具体的设置条件注意是普通PCR,不是荧光定量PCR,另外与RT - PCR有什么联系? - ？
岛厘疏风：[答案] 一步法,使用特殊引物,全程只设置一个温度即可完成扩增.这种特殊引物有专利. 二步法即循环扩增中设置2个步骤,这个方法主要扩增短片段,一个是95度变性,另一个是退火与扩增的温度,一般设置在55~60之间,当然也有例外. 三步法就是平常...
渭城区15065387477： 实时荧光定量pcr两步法与三步法的异同是什么?如何选择使用?比如引物退火是54度,选择三步法还是2步法? - ？
岛厘疏风： 异同?我觉得还是看你用的机器和试剂盒吧,主要是那个聚合酶的要求.有的推荐两步法,有的推荐三步法. 比如,ABI,roche都推荐两步法,tiangen的推荐三步法. 我觉得,如果引物设计时的Tm值如果接近60度(比如用ABI的primer express设计的引物),就直接用两步法;如果Tm值不太符合两步法要求,即60度,还是三步法好些!
渭城区15065387477： 定量PCR为什么要用两步法而不是普通的三步法 - ？
岛厘疏风： 你这个结论并不对.两步法,三步法并没有本质区别,信号的读取都是在每一个延长结束后读取.定量PCR一开始的时候也是三步法的.两步法,是因为设计引物的时候把退火温度设为酶的工作温度,而且定量PCR的产物都很短,需要的时候都短,所以两步法更方便.三步法的话,花的时间长,不利于快速实验.
渭城区15065387477： 什么是两步法 - ？
岛厘疏风： 你指的是PCR反应中的两步法吗? 经典的PCR程序包括三步:模板变性,引物与模板配对,延伸;这三步的温度一般都不相同. 两步法指的是在引物与模板配对,延伸这两步中采用同一温度,使得这两步在同一温度下进行.这样传统的三步法就变成了两步法,一般适用于GC含量高或引物Tm值高的反应.
渭城区15065387477： PCR一步法和两步法有什么区别吗? - ？
岛厘疏风： 其实一步法并非是两步法的改进,根据实验目的不同,有时两步法会更好.举个例子,如果想对同一样本同时扩增2个以上的基因,那么一步法是从RNA开始的, 即分别取相同量的RNA,然后逆...
渭城区15065387477： PCR一步法和两步法有什么区别吗?？
岛厘疏风： 博凌科为-为你解答:两步法rt-pcr比较 常见,在使用一个样品检测多个mrna时比较有用.然而一步法rt-pcr具有其他优点.一步法rt-pcr在处理大量样品时易于操作,有助于减少残余污 染,因为在cdna合成和扩增之间不需要打开管盖.一步法可以...
渭城区15065387477： RT - PCR一步法与两步法有什么不同? - ？
岛厘疏风：[答案] 博凌科为-为你两步法RT-PCR比较 常见,在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用.然而一步法RT-PCR具有其他优点.一步法RT-PCR在处理大量样品时易于操作,有助于减少残余污 染,因为在cDNA合成和扩增之间不需要打开管盖.一步法可以得到...
渭城区15065387477： 荧光定量三步法中,温度设成了70度对结果有什么影响呢 - ？
岛厘疏风： 三步法PCR 首先95°C 作用3 min. PCR 进行 35 个循环. 步骤 温度 变性 95°C 退火 58°C 延伸 72°C 时间 30 秒 30 秒 30 秒 融解曲线 温度 时间 变温速度 95°C 0秒 20°C/秒 55°C 15 秒 20°C/秒 95°C 0秒 0.1°C/秒 PCR 疑难解答 当 PCR 结果...
渭城区15065387477： 小分子RNA的检测方法 - ？
岛厘疏风： 实时荧光定量PCR技术是1996年由美国Applied biosystems公司推出在定性PCR技术基础上发展起来的核酸定量技术.该技术在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,使每一个循环变得“可见”,...
