以cDNA第一链为模板的PCR是以什么设计引物的
引物是热稳定DNA聚合酶的结合位点，能够使子链合成时按照5’—〉3’的方向进行，不设置引物根本就没办法进行互补链的合成，因此尽管只有一条链也应该设置引物。一条模版合成了互补链后，在加热解链后，模板链和互补链均可再做下一次PCR合成的模版，按照指数增长方式快速的合成多个DNA。
RT-PCR中合成第一链cDNA为RNA和DNA组成的“杂双链”，在设计PCR的引物时候也是根据cDNA第一链设计的，因此将第一链cDNA可以用来PCR。
第二链cDNA是在第一链cDNA的基础上使用RNAase将RNA消化，利用百度百科上的几种方法合成与第一链cDNA互补的第二链cDNA，此刻就是构成了真正的，不包含RNA的“双链cDNA”，对双链cDNA修饰后用于构建cDNA文库。
当然合成第二链cDNA后也能用作PCR反应
所以合成第一链cDNA用来PCR可以，想要再合成第二链cDNA做PCR也可以。
你是要扩展cDNA第二条链吗？
是要扩展全长吗？
如果不是，就和普通的PCR一样。
如果是，一般用同聚体加尾法。
mRNA
要知道模板序列
自身引导合成法和置换合成法合成cDNA第二链的优缺点是什么?
1. 自身引导合成法首先，通过变性降解去除杂交分子中的RNA，使得单链cDNA的3'端形成发夹结构作为引物。在大肠杆菌聚合酶I Klenow或反转录酶的作用下，这个引物引导第二链的合成。然而，这种方法存在一些缺点：S1核酸酶在切割发夹结构时，可能导致mRNA 5'端序列出现缺失和重排。此外，如果S1核酸酶纯度不足...
反转录PCR中以第一链cDNA为模板合成第二链PCR时引物该怎么设,还有这个...
引物是热稳定DNA聚合酶的结合位点，能够使子链合成时按照5’—〉3’的方向进行，不设置引物根本就没办法进行互补链的合成，因此尽管只有一条链也应该设置引物。一条模版合成了互补链后，在加热解链后，模板链和互补链均可再做下一次PCR合成的模版，按照指数增长方式快速的合成多个DNA。
RACE技术的技术原理
然后用一个基因特异引物GSP1（gene specific primer，GSP）作为上游引物，用一个含有部分接头序列的通用引物UPM（universal primer，UPM）作为下游引物，以cDNA第一链为模板，进行PCR循环，把目的基因3' 末端的DNA片段扩增出来。（见下图）SMARTTM 5'-RACE原理先利用mRNA的3'末端的poly(A)尾巴作为一个引...
以cDNA第一链为模板的PCR是以什么设计引物的
一般以mRNA为模板设计引物扩增目的片段。
反转录PCR引物如何设计?已经得到cDNA第一链,引物设计是以cdna为模版,设...
不，需要两条，因为随着你PCR的进行，另一条互补链会被引物扩增出来，因此你需要两条引物都加进去。
真核生物mRNA测序
2、mRNA捕获：真核生物的成熟mRNA带有poly-A尾，因此可以采用附着poly-T oligo的磁珠从总RNA中捕获mRNA。3、mRNA片段化：4、cDNA第一链合成：以mRNA为模板合成cDNA。5、cDNA第二链合成：以cDNA第一链为模板合成cDNA第二链。6、双链cDNA末端修复：3'加A，5'修复。7、加接头：8、PCR富集mRNA文库。...
RT-PCR的原理是什么?有何用途?
RT—PCR（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction）是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。原理是提取组织或细胞中的总RNA或者mRNA，在反转录酶的作用下将RNA或者mRNA反转录成cDNA，再以该cDNA第一链为模板进行PCR扩增，根据靶基因设计用于PCR扩增的基因特异的上下游...
组建cDNA文库的组建有哪些步骤?
（3）cDNA第二链的合成：通常有自身引导合成法和置换合成法两种方法合成。自身引导合成法。用碱处理mRNA-cDNA杂交体，水解mRNA模板，cDNA第一链3′端能够形成发夹结构，这种结构可用作合成cDNA第二链的引物。在大肠杆菌DNA聚合酶Klenow片段或反转录酶的作用下，以四种dNTP为原料完成双链cDNA的合成，利用...
如何获得cDNA?需要哪些步骤?
把 cDNA 克隆到载体中之前，必须把这种杂交体中的 RNA 转变成 DNA 链，即形成双链 DNA 分子。2.利用 cDNA 第一链的 3' 末端常常出现发夹环的特征，这种发夹结构是反转录酶在第一链末端“返折”并且进行复制第一链的结果，用这种方法合成的双链 cDNA 在一端有一个发夹环，可以用单链特异的 S1...
RT-PCR中合成第一链cDNA为什么可以进行PCR,难道不需要合成第二链吗
RT-PCR中合成第一链cDNA为RNA和DNA组成的“杂双链”，在设计PCR的引物时候也是根据cDNA第一链设计的，因此将第一链cDNA可以用来PCR。第二链cDNA是在第一链cDNA的基础上使用RNAase将RNA消化，利用百度百科上的几种方法合成与第一链cDNA互补的第二链cDNA，此刻就是构成了真正的，不包含RNA的“双链cDNA...
甫科盐酸：[答案] 一般以mRNA为模板设计引物扩增目的片段.
于洪区17667429620： 以cDNA第一链为模板的PCR是以什么设计引物的 - ？
甫科盐酸： 一般以mRNA为模板设计引物扩增目的片段.
于洪区17667429620： 反转录PCR中以第一链cDNA为模板合成第二链PCR时引物该怎么设,还有这个PCR的模板只有一条链为什么设还有这个PCR的模板只有一条链为什么设上... - ？
甫科盐酸：[答案] 引物是热稳定DNA聚合酶的结合位点,能够使子链合成时按照5'—〉3'的方向进行,不设置引物根本就没办法进行互补链的合成,因此尽管只有一条链也应该设置引物.一条模版合成了互补链后,在加热解链后,模板链和互补链均可再做下一次...
于洪区17667429620： 何为原位PCR? - ？
甫科盐酸： 原位PCR是原位杂交细胞定位和PCR的高灵敏度相结合的技术,使得靶基因检测有了极大的改进.此技术是在细胞(爬片、甩片或涂片)或组织(石蜡、冰冻切片)上直接对靶基因片段进行扩增,通过掺入标记基团直接显色或结合原位杂交进行检测的方法.
于洪区17667429620： 反转录PCR引物如何设计?已经得到cDNA第一链,引物设计是以cdna为模版,设计上下游引物吗?cDNA不是只有一条链吗,是不是只需要一条引物?求详解. - ？
甫科盐酸：[答案] 不,需要两条,因为随着你PCR的进行,另一条互补链会被引物扩增出来,因此你需要两条引物都加进去.
于洪区17667429620： AS - PCR和ARMS - PCR的区别 - ？
甫科盐酸： PCR这里是指常规的PCR吧?就是以DNA为模板,dNTP为原料,在Taq DNA聚合酶的作用下,扩增DNA.RT-PCR即Reverse transcription-PCR,顾名思义就是讲mRNA通过反转录成第一链cDNA后,以第一链cDNA为模板进行PCR.
于洪区17667429620： 原核表达载体的原核表达载体调控原件 - ？
甫科盐酸： (1)通过PCR方法:以含目的基因的克隆质粒为模板,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),PCR循环获得所需基因片段. (2)通过RT-PCR方法:提取总RNA,以mRNA为模板,逆转录形成cDNA第一链,以逆...
于洪区17667429620： 分不清反转录和反转录PCR,希望能人帮我解释一下 - ？
甫科盐酸： 个人理解..反转录是指从RNA到cDNA的这一步.RT-PCR是指从RNA反转合成cDNA第一链,然后以cDNA 为模板扩增目的片断,已达到检测目标基因是否表达等目的.....
于洪区17667429620： PCR和realtimePCR的引物一样?RT - PCR和real ？
甫科盐酸： ~完成定量PCR包含RT和real-time PCR两部分:①RT即逆转录反应,以RNA为模板,采用逆转录引物合成cDNA第一链;②Real-time PCR即实时定量PCR,以①中的...
于洪区17667429620： 何为ARMS - PCR - ？
甫科盐酸： 扩增阻滞突变系统PCR,也叫等位基因特异性PCR.基于引物3'末端碱基与模板结合的严谨性而发展起来的一种技术,最初主要是用于等位基因分型,目前已经有基于该技术的体细胞突变检测试剂盒问世
