用cdna为模板扩dna
“RT-PCR扩增目的基因cDNA”需要注意的事项有哪些?
一、RNA 制备 模板 mRNA 的质量直接影响到 cDNA 合成的效率。 由于 mRNA 分子的结构特点, 容易受 RNA 酶的攻击反应而降解,加上 RNA 酶极为稳定且广泛存在,因而在提取过 程中要严格防止 RNA 酶的污染,并设法抑制其活性,这是本实验成败的关键。 所有 的组织中均存在 RNA 酶,人的皮肤、手指、试剂...
cDNA基因克隆的模板为
【答案】：B cDNA是以mRNA为模板在逆转录酶的作用下获得的。因此，本题最佳答案是B。
对RNA病毒可先用反转录酶转录出少量互补DNA(cDNA),然后用PCR技术进行...
【答案】：E PCR技术的特点是敏感、特异、简易、快速，可直接检测粗制DNA标本，扩增基因片段可直接进行序列分析。对RNA病毒可先用反转录酶以RNA为模板，转录出少量互补DNA(cDNA)，然后用PCR技术进行扩增。
cDNA文库合成过程中如何确保双链的准确性和完整性?
在cDNA文库的构建过程中，首先通过Superscript II—RT进行双链合成。步骤如下：1. 在RNase-free PCR管中，加入500ng xul mRNA、Xho I Primer（1.4ug\/ul）和适量水，混合后70℃反应10分钟，随后置于冰上冷却5分钟。 2. 加入5×first strand buffer、0.1M DTT、10mM dNTP和Superscript II—RT，4...
简述cdna文库构建步骤
1.在cDNA样品中加入以下试剂: 2 mol\/L Tris-HCl (pH8.0) 5μl 5 mol\/L NaCl 2μl 0.5 mol\/L EDTA(pH8.0) 2μl 20 mmol\/L S-腺苷甲硫氨酸 1μl 加H2O至 96μl 2.取出两小份样品(各2μl)至0.5ml微量离心管中,分别编为1号和2号,置于冰上。 3.在余下的反应混合液中加入2μl Ec...
RT-PCR(real-time pcr)在检测细胞的凋亡中与其他方法相比有何优缺点_百...
RT-PCR是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平，细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外...
cDNA文库的载体制备
1．pBlueScriptII的提取1．取1ul商品的pBlueScriptII，转化入大肠杆菌宿主菌中，取5ul转化产物均匀涂布在含AMP的LB平板上，37℃培养过夜。2．第二天取一只无菌的50ml离心管，加入10ml AMP抗性的LB液体培养基，挑单克隆于离心管中，37℃，250rpm，培养过夜。3．第三天取200µl小摇后的菌液...
基因组物理图谱,遗传图谱有什么区别,有何用途?
以人类基因组物理图谱为例，它包括两层含义，一是获得分布于整个基因组30 000个序列标志位点(STS，其定义是染色体定位明确且可用PCR扩增的单拷贝序列)。将获得的目的基因的cDNA克隆，进行测序，确定两端的cDNA序列，约200bp，设计合成引物，并分别利用cDNA和基因组DNA作模板扩增；比较并纯化特异带；利用ST...
生物翻译
spl4和spl5. 马产物纯化和测序凝胶笔容易载体(Promega公司)测序基因植物spl3(ORF的加 3UTR区)和300序列缺乏翻译(spl3)基因扩增-18涡轮(stratagene)用cDNA为模板. spl3m产生突变成七的预言引进结合位mir156利用重组PCR技术. 的GUS多名来自pcambia1305.1扩增载体融合在5月底到这些帧生成的基因 的GUS标记...
cDNA文库的cDNA
15分钟灭活反转录酶.2. cDNA第二链的合成1. 第一链反应完成后,取2ul一链产物－20℃冰箱中保存，待电泳检测。其余的产物合并，混匀，然后顺序加入下列试剂(promega):20ul 10×DNA Polymerase I buffer6ul 10mM dNTP(自己配制)xul dd H2O1ul RNase H(2U\/ul)10ul DNA Polymerase I(10U\/ul)...
东洲区罗塞回答： 从基因文库中筛选某一克隆的常用办法是分子杂交. 首先把属于一个文库的细菌或噬菌体以较低密度接种在培养皿上以取得相当分散的菌落或噬菌斑,然后用硝酸纤维滤膜吸印,使培养皿和滤膜的相对应的位置上具有相同的克拢同时另行制备供分子杂交用的...
度方13940164359问： pcr,cDNA引物的问题 - ？
东洲区罗塞回答： 同学,从你问问题的情况我猜想你可能有些基本问题很含糊. 我试着分析一下.1.首先PCR是体外大量扩增目的DNA的技术. 你问模板DNA是什么,这是不需要问的,你想扩增的目的基因是什么什么就是模板.你用cDNA来做PCR模板当然是...
度方13940164359问： 请教下用cDNA作为模板跑PCR相关经验? - ？
东洲区罗塞回答： 你的引物是设计到这个基因编码区的什么位置的?你考虑下是不是cDNA的降解问题. 还有你试验的时候降低退火温度,不要提高.提高更扩不出来了.
度方13940164359问： 引物设计问题,以mRNA序列设计引物,然后用cDNA为模板来扩增,在设计引物时mRNA序列是否要反转序列?我想的是,不反转的话设计的引物是和... - ？
东洲区罗塞回答：[答案] cDNA和mRNA的序列是互补的,如果用两个引物,最后的两条DNA序列分别对应于mRNA和cDNA中的一段.由于引物方向从5'至3',所以两个引物对应于mRNA和cDNA中相应序列即可.
度方13940164359问： “RT - PCR扩增目的基因cDNA”需要注意的事项有哪些? - ？
东洲区罗塞回答： RT-PCR 是将 RNA 的反转录(RT)和 cDNA 的聚合酶链式扩增(PCR)相结 合的技术.首先经反转录酶的作用从 RNA 合成 cDNA,再以 cDNA 为模板, 扩增合成目的片段.RT-PCR 技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞中基 因表达水平...
度方13940164359问： 怎样从cDNA文库中扩基因 - ？
东洲区罗塞回答： 1.已经知道目的基因了,就可以合成这段DNA序列了,在合成的时候将它标记,作为探针备用;2.把含有cDNA序列的噬菌体或细菌克隆用硝酸纤维素膜印记,3.将探针和硝酸纤维素膜做分子杂交,4含有与探针同源的基因就会与探针杂交,5.在显微镜下观察,找到杂交的克隆6,再硝酸纤维素膜的相同位置就是要的克隆,然后可以将其pcr,就能获得大量的所需基因了
度方13940164359问： pcr技术扩增 - ？
东洲区罗塞回答： PCR(聚合酶链式反应)是利用DNA在体外摄氏95度时解旋,55度时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至72度左右DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链.由PCR技术制造的PCR仪实际就是一个温控设备,能...
度方13940164359问： 我用cDNA做模板扩增,1100bp的片段能扩出来,260bp的短片段反而扩不出来? - ？
东洲区罗塞回答： cDNA文库里不含有你要的基因.制备cDNA文库时,是不能把所有基因组基因都转入文库的.
度方13940164359问： 如果在RT荧光PCR中,用一步法RNA直接转成DNA不行,结果用cDNA二步法转成DNA却可以 - ？
东洲区罗塞回答： 有可能,一步法的试剂里面,可能污染了,不小心引入了RNase,或者试剂失效.你可以使用cDNA为模板,用一步法的试剂,上机试试,看看会不会有效果...如果还是没有效果,就说明试剂有问题了,那个试剂不要反复冻融.
度方13940164359问： 模板CDNA可以跑出目标片段,PCR扩增后却跑不出来 - ？
东洲区罗塞回答： lu3002说的对,扩增得到的cDNA应该是弥散带,你跑出目的条带说明扩增的对,一般扩增出来的cDNA并不需要电泳,而是直接进行扩增.你的cDNA很明显是出现了降解或者没有扩增成功,建议重新制模板.
