qpcr模板cdna浓度多少合适
pcr体系中buffer和cdna的作用分别是什么
1、Buffer：主要是用来控制体系的pH和离子，为DNA聚合酶提供最佳工作环境。2、cDNA：cDNA是逆转录出来的DNA，主要是用来将mRNA变为单链DNA，作为PCR的模板。
反转录PCR合成cDNA引物的选择
在PCR合成cDNA的过程中，引物的选择对于获得准确且特异的产物至关重要。首先，当特定mRNA由于含有终止反转录酶的序列而难以完整复制时，可以使用随机六聚体引物。这种非特异性的引物能使所有RNA分子作为cDNA第一链模板，PCR扩增过程中会赋予所需的特异性。然而，用随机六聚体合成的cDNA中，大约96%来源于rR...
为什么跑PCR要用CDNA,而不用本身的DNA
你做的是不是RT-PCR， 这个就是以反转录得到的cDNA为模板的。我们做的时候一般是提取植物总的RNA，然后采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，主要是获得目的基因或检测基因表达，判断目的基因mRNA转录水平的相对量的变化。因为直接提取DNA的话，并不能证明该基...
pcr技术dna模板如何获得
第一种从cDNA 文库(cDNA library )获得，如厦大韩家淮实验建立的免费cDNA 文库；第二种从mRNA逆转录获得，在这种情况下，mRNA的cDNA，与原来的基因组DNA相同而且无内含子；相反地，对应于在原来基因中没有的而在mRNA存在的3'末端的poly A序列等的核苷序列上，与外显子序列、先导序列以及后续序列等一起...
为什么跑PCR要用CDNA,而不用本身的DNA
两者都可以用于PCR。cDNA是以mRNA为模板反转录形成的，以其为模板PCR可以获得目的基因或检测基因表达。
pcr技术的基本原理和过程
pcr技术的基本原理和过程如下：qRT-PCR（定量逆转录聚合酶链式反应）是利用逆转录酶将RNA模板转录为cDNA，再使用Taqman探针或SYBRGreen等荧光染料检测cDNA的定量过程。以下是关于qRT-PCR原理的更加详细介绍。首先，RNA模板经过逆转录反应转化为cDNA，其中需要引物与逆转录酶配合作用，以产生目标序列所需的反向...
进行PCR扩增时为什么将cDNA模板稀释以后就出现引物二聚体了?
根本原因应该是RNA纯度不够，导致反转录的cDNA浓度低。稀释之后DNA与引物结合的机会少了，引物自己结合成二聚体.多种原因要逐一排除：1.先用内参基因检测一下如 β-actin，GAPDH，18s-rRNA这类基因是生物体或者细胞中稳定表达的基因，表达量几乎不变，如果有条带证明反转录没问题。2.内参检测时候最好...
为什么跑PCR要用CDNA,而不用本身的DNA
cDNA易于从文库中获取，目的性强，且不含DNA中的非编码区和内含子序列，经过扩增后既可以导入原核细胞也可以导入真核细胞，而DNA必须导入真核细胞，否则无法转录。
什么是cDNA,有什么作用
cDNA就是环状DNA的意思，c就是circle的首字母，环状DNA有两种，一种是原核细胞的拟核，拟核就是一个环状的DNA分子，是原核生物邪恶遗传物质；另一种是存在于原核细胞中的除拟核之外的一种小型的环状DNA分子，他也控制一部分形状。
PCR实验中加cDNA模板量是否要一致?
1。是的，一般加样量按质量算（微克），同组样品一定要加一样多，否则无法横向比较。加样体积应精确至小数点后一位。2。不能。PCR本来就半定量了，不能再引入误差了。内参亮度不一致，没人会接受你的数据。
柳北区五味回答： 这个没有明确的规定,一般用的最多的是1-100ng/ul(工作浓度).浓度太低和太好都会影响扩增效率,但并不是绝对的.因为有一些基因表达水平极低,有一些在特殊情况下又极高.qPCR很多时候仅仅反映的是几个样品之间的趋势,而不是绝对值.
镇宣15121922327问： 模板的浓度对PCR有什么影响,一般要多大浓度? - ？
柳北区五味回答： 那要看你用的是什么模板了. pcr的灵敏度很高,几pg的DNA就能检测出来了.一般用pcr产物或者质粒做模板,只需要1ng左右就可以了,如果是基因组或者cDNA做模板,模板量可适当增加.
镇宣15121922327问： PCR实验中加cDNA模板量是否要一致? - ？
柳北区五味回答： 1.是的,一般加样量按质量算(微克),同组样品一定要加一样多,否则无法横向比较.加样体积应精确至小数点后一位.2.不能.PCR本来就半定量了,不能再引入误差了.内参亮度不一致,没人会接受你的数据.
镇宣15121922327问： qrt - pcr加cDNA的量,怎么加 - ？
柳北区五味回答： 因为你所要检测的目的片段丰度不同,所以需要先做个预实验. 怎么做呢? 你先把cdna进行梯度稀释,然后进行pcr,如果你的primer所扩增的ct值在15-25之间,那么就是很不错的稀释梯度啦~ 以后实验久按照这个浓度加就好了
镇宣15121922327问： 10微升pcr体系各药品的比例是多少啊,把你用的说下就行,双蒸水是7.44的有吗 - ？
柳北区五味回答： 你是以什么为模版?用什么酶?这些其实都会影响具体的比例的. 说个大概的吧.以cDNA为模版,cDNA浓度大概100ng/ul,酶用taq. 5Xbuffer——2ul 模版——0.5ul 酶——0.5ul 引物——0.5+0.5 dNTP mix——1ul dd H2O——补足10uL体系即可 双蒸水的pH要求其实不是特别严格,毕竟有buffer调节.
镇宣15121922327问： 【求助】做完RT后,cDNA一般稀释多少倍后上real time比较合适? - ？
柳北区五味回答： 如果认为逆转录效率100%的话 这样得到的cDNA 的浓度应该是100ng/ul 如果原来是100ng/ul,那么稀释过后就只有10ng/ul了
镇宣15121922327问： 做RT - PCR内参的作用是什么?应该如何选择管家基因啊? - ？
柳北区五味回答： 内参的选择:普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下 它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差.PCR时,每个标本都要做对应的内参,...
镇宣15121922327问： ffpe 提取dna 一般浓度和纯度是多少 - ？
柳北区五味回答： rtpcr时提取rna的浓度和纯度要求:浓度20ng/ul以上足够了,如果用的是组织提取,浓度一般很高,可以达到几百甚至几千.如果你用的是病毒、少量细胞,浓度低一些也没有关系. 纯度需要用仪器测一下.260/280理论值应该有2.0以上,260/...
镇宣15121922327问： “RT - PCR扩增目的基因cDNA”需要注意的事项有哪些? - ？
柳北区五味回答： RT-PCR 是将 RNA 的反转录(RT)和 cDNA 的聚合酶链式扩增(PCR)相结 合的技术.首先经反转录酶的作用从 RNA 合成 cDNA,再以 cDNA 为模板, 扩增合成目的片段.RT-PCR 技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞中基 因表达水平...
镇宣15121922327问： PCR模版的问题!? - ？
柳北区五味回答： 我只是说一点简单的流程啊.具体的问题可能会更多,也不可预料的.从引物设计到构建好载体我一块说了吧. 想得到模板,第一你是要有原始的细胞组织之类的,反正能够表达你的蛋白的就行.如果没有,第二种方法,找别人要,看看有没有...
