单克隆抗体中两次筛选分别是什么方法

单克隆抗体制备中两次筛选的方法及原理是什么？~

第一次筛选的原理与方法 细胞融合后 杂交瘤细胞的选择性培养是第一次筛选的关键 普遍采用的HAT选择培养液是在普通的动物细胞培养液中加入次黄嘌呤（H） 氨基喋呤（A）和胸腺嘧啶核苷酸（T）其依据是细胞中的DNA合成有两条途径是生物合成途径（D途径）即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸 为DNA分子的合成提供原料 在此合成过程中 叶酸作为重要的辅酶参与这一过程 而HAT培养液中氨基酸喋呤是一种叶酸的拮抗物 可以阻断DNA合成的D途径 另一条途径是应急途径或补救途径（S途径）它是利用次黄嘌呤一鸟嘌呤磷酸核苷转移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK）催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相应的核苷酸 两种酶缺一不可 因此 在HAT培养液中 未融合的效应B细胞和两个效应B细胞融合的 D途径 被氨基嘌呤阻断 虽 S途径 正常 但因缺乏在体外培养液中增殖的能力 一般10d左右会死亡 对于骨髓瘤细胞以及自身融合细胞而言 由于通常采用的骨髓瘤细胞是次黄嘌呤一嘌呤磷酸核苷转移酶缺陷型（HGPRT）细胞 因此自身没有 S途径 且 D途径 又被氨基喋呤阻断 所以在HAT培养液中也不能增殖而很快死亡 惟有骨髓瘤细胞与效应B细胞相互融合形成的杂交瘤细胞 即具有效应B细胞的 S途径 又具有骨髓瘤细胞在体外培养液中长期增殖的特性 因此能在HAT培养液中选择性存活下来 并不断增殖
第二次筛选的原理和方法在实际免疫过程中 由于采用连续注射抗原的方法 且一种抗原决定簇刺激机体形成相对应的一种效应B淋巴细胞的特异性是不同的 经HAT培养液筛选的杂交瘤细胞特异性也存在差异 所以必须从杂交瘤细胞群中筛选出能产生针对某一预定抗原决定簇的特异性杂交瘤细胞 通常采用有限稀释克隆细胞的方法 将杂交瘤细胞多倍稀释 接种在多孔的细胞培养板上 使每一孔含一个或几个杂交瘤细胞（理论上30%的孔中细胞数为0时 才能保证有些孔中是单个细胞）再由这些单细胞克隆生长 最终选出分泌预定特异抗体的杂交细胞株进行扩大培养 因此 单克隆抗体制备过程中 两次筛选的原理和方法是不相同的
原理
B淋巴细胞在抗原的刺激下 能够分化 增殖形成具有针对这种抗原分泌特异抗体的能力 B细胞的这种能力和量是有限的 不可能持续分化增殖下去 因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的 将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞 再进一步克隆化 这种克隆化的杂交瘤细胞是即具有瘤的无限生长的能力 又具有产生特异性抗体的B淋巴细胞的能力 将这种克隆化的杂交瘤细胞进行培养或注入小鼠体内即可获得大量的高效价 单一的特异性抗体 这种技术即称为单克隆抗体技术

第一次筛选:
首先在（效应）B淋巴细胞和骨髓瘤细胞进行杂交时可能出现的情况应该先弄清楚，（一）可能的情况有：
(1)（效应）B淋巴细胞和（效应）B淋巴细胞的融合
(2)
(效应）B淋巴细胞和骨髓瘤细胞的融合（即杂交瘤细胞）
(3
)骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞的融合（即瘤瘤细胞）
(4
)单个骨髓瘤细胞
(5
)单个（效应）B淋巴细胞
（二）筛选的目的————获得杂交瘤细胞
（三）筛选的方法
用选择性培养基来完成，即HAT培养基。含有次黄嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶，其中氨基喋呤可阻断DNA合成的主要途径。主要途径阻断后，依靠应急途径即在HGPRT（次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶）和TK（胸苷激酶）作用下，利用胸腺嘧啶和次黄嘌呤合成DNA，缺少其中一种，DNA合成不能发生。用于杂交的骨髓瘤细胞系均由经有毒药物诱导而成选择产生的代谢缺陷型细胞，细胞内均无TK或HGPRT，所以单个或融合骨髓瘤细胞在HAT培养液中将死亡。B细胞虽然有HGPRT和TK，但在体外通常培养条件下，尤其是在单个细胞环境下难于长期存活和增殖传代。因此只有杂交瘤细胞才能在HAT培养液中生长繁殖。所以通过以上方法可以选择出杂交瘤细胞，但虽然都是杂交瘤细胞，但可能是同一抗原的不同抗原决定基刺激产生的。所以产生抗体是不纯的。如果不进一步提纯，这样得到的是多克隆抗体。所以就有了第二次筛选。第二次筛选
要想获得单克隆抗体，所以必须得到由一个细胞分裂而成的一个细胞群，
由这样的细胞群产生的抗体才是真正意义的单克隆抗体。
(一)
筛选的目的
筛选只针对某一种特定的抗原决定簇产生抗体的杂交瘤细胞，即得到由一个细胞分裂而成的一个细胞群并且能产生所需抗体
（二）筛选的方法
(1)
分离单个细胞置入多孔培养板的每个孔中培养
(2)
利用抗原抗体杂交技术检测每孔细胞是否产生所注射抗原的抗体
我之前在北京新东方中小学一对一当高考生物的老师，所以对这些知识点真是很了解，新东
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第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，用连续注射抗原，下面具体介绍一下：

1、在实际免疫过程中，由于采用连续注射抗原的方法，且一种抗原决定簇刺激机体形成相对应的一种效应B淋巴细胞，因此，从小鼠脾脏中取出的效应B淋巴细胞的特异性是不同的，经HAT培养液筛选的杂交瘤细胞特异性也存在差异，所以必须从杂交瘤细胞群中筛选出能产生针对某一预定抗原快定簇的特异性杂交瘤细胞；

2、通常采用有限稀释克隆细胞的方法，将杂交瘤细胞多倍稀释，接种在多孔的细胞培养板上，使每一孔含一个或几个杂交瘤细胞（理论上30%的孔中细胞数为0时，才能保证有些孔中是单个细胞），再由这些单细胞克隆生长，最终选出分泌预定特异抗体的杂交细胞株进行扩大培养。

拓展资料：

单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体，称为单克隆抗体。通常采用杂交瘤技术来制备，杂交瘤（hybridoma）抗体技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。

参考资料：单克隆抗体百度百科：网页链接

第一次是筛选出杂交瘤细胞，第二步是筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。应该用特异性抗原来选择。

第一步：用HAT选择培养基筛选出正常生长的细胞。
第二步：抗体检测

是克隆化培养抗体检测吧 特地翻的笔记 希望对你有帮助

单克隆抗体制备过程中，总共有两次筛选，第一次筛选出杂交瘤细胞，第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，两次筛选的原理和方法是不相同的。
第一次筛选的原理与方法：细胞融合后，杂交瘤细胞的选择性培养是第一次筛选的关键。普遍采用的HAT选择性培养液是在普通的动物细胞培养液中加入次黄嘌呤（H）、氨基喋呤（A）和胸腺嘧啶核苷酸（T）。其依据是细胞中的DNA合成有两条途径：一条途径是生物合成途径（“D途径”），即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸，为DNA分子的合成提供原料。在此合成过程中，叶酸作为重要的辅酶参与这一过程，而HAT培养液中氨基喋呤是一种叶酸的拮抗物，可以阻断DNA合成的“D途径”。另一条途径是应急途径或补救途径（“S途径”），它是利用次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK）催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相应的核苷酸，两种酶缺一不可。因此，在HAT培养液中，未融合的效应B细胞和两个效应B细胞融合的“D途径”被氨基喋呤阻断，虽“S途径”正常，但因缺乏在体外培养液中增殖的能力，一般10d左右会死亡。对于骨髓瘤细胞以及自身融合细胞而言，由于通常采用的骨髓瘤细胞是次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶缺陷型（HGPRT）细胞，因此自身没有“S途径”，且“D途径”又被氨基喋呤阻断，所以在HAT培养液中也不能增殖而很快死亡。惟有骨髓瘤细胞与效应B细胞相互融合形成的杂交瘤细胞，既具有效应B细胞的“S途径”，又具有骨髓瘤细胞在体外培养液中长期增殖的特性，因此能在HAT培养液中选择性存活下来，并不断增殖。
第二次筛选的原理和方法：在实际免疫过程中，由于采用连续注射抗原的方法，且一种抗原决定簇刺激机体形成相对应的一种效应B淋巴细胞，因此，从小鼠脾脏中取出的效应B淋巴细胞的特异性是不同的，经HAT培养液筛选的杂交瘤细胞特异性也存在差异，所以必须从杂交瘤细胞群中筛选出能产生针对某一预定抗原快定簇的特异性杂交瘤细胞。通常采用有限稀释克隆细胞的方法，将杂交瘤细胞多倍稀释，接种在多孔的细胞培养板上，使每一孔含一个或几个杂交瘤细胞（理论上30%的孔中细胞数为0时，才能保证有些孔中是单个细胞），再由这些单细胞克隆生长，最终选出分泌预定特异抗体的杂交细胞株进行扩大培养。因此，单克隆抗体制备过程中，两次筛选的原理和方法是不相同的。

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兰考县15279995054： 单克隆抗体中两次筛选分别是什么方法 - ？
绽符血尿： 第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞,用连续注射抗原,下面具体介绍一下: 1、在实际免疫过程中,由于采用连续注射抗原的方法,且一种抗原决定簇刺激机体形成相对应的一种效应B淋巴细胞,因此,从小鼠脾脏中取出的效应B淋巴...

兰考县15279995054： 单克隆抗体两次筛选分别是怎样筛选的? - ？
绽符血尿：[答案] 先用HAT培养基,目的是筛选融合细胞. 再用筛选得到的杂交瘤细胞做ELISA,筛选目的细胞株(就是抗你最初所用免疫小鼠蛋白的抗体)

兰考县15279995054： 单克隆抗体制备过程中两次筛选有什么区别?___. - ？
绽符血尿：[答案] 单克隆抗体制备过程中共有2次筛选,一次筛选出杂交瘤细胞,第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞.这两次筛选的原理和方法不同:第一次筛选的原理是细胞中DNA合成有2种途径,方法是用选择培养基进行筛选;第二...

兰考县15279995054： 单克隆抗体需哪2次筛选? - ？
绽符血尿： 第一次筛选是在两细胞融合后 目的是选出符合要求的杂交瘤细胞 而第二次筛选则是在杂交瘤细胞培养后 此次筛选则是为了选出能产生符合要求的单一抗体的杂交瘤细胞 就是这样 这些内容在高三生物课本第七十二页有详细叙述

兰考县15279995054： 制备单克隆抗体需要进行几次筛选,目的分别是什么? - ？
绽符血尿：[答案] 两次.第一次是筛选出浆细胞—浆细胞融合细胞 和 浆细胞—骨髓瘤细胞融合细胞(抗原抗体反应) 第二次是筛选出浆细胞—骨髓瘤细胞融合细胞(继续培养)

兰考县15279995054： 如何筛选动物单克隆抗体 - ？
绽符血尿： 单克隆抗体制备过程中,总共有两次筛选,第一次筛选出杂交瘤细胞,第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞,两次筛选的原理和方法是不相同的.第一次筛选的原理与方法:细胞融合后,杂交瘤细胞的选择性培养是第一次筛选的关键.普...

兰考县15279995054： 制备单抗需要经过几次筛选,分别是什么? - ？
绽符血尿： 第一次筛选:筛选出杂交瘤细胞. 第二次筛选:筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞. 第一次筛选使用的是选择性培养基. 第二次筛选使用的是稀释法.

兰考县15279995054： 单克隆抗体制备过程中两次筛选有什么区别 - ？
绽符血尿： 这好像是高中生物吧 先说骨髓瘤细胞和B淋巴细胞融合,共有3种情况,B淋巴和B淋巴融合,B淋巴和骨髓瘤细胞融合,骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞融合 第一次筛选是为了筛选出能无限增殖的细胞,这只有两种情况: 1、经过免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞的融合细胞 2、骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞的融合细胞 第二次是为了筛选出能产生单克隆抗体的细胞 那么只可能是,经过免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞的融合细胞. 所以有两次筛选

兰考县15279995054： 利用细胞………单克隆抗体时有两次筛选,第一次筛选的目的是?第二次筛选的目的?过程中有两种酶是什么? - ？
绽符血尿：[答案] 第一次是选出杂交瘤细胞,第二次是选择出具有能够产生特异性抗体的杂交瘤细胞.胰蛋白酶,