利用细胞………单克隆抗体时有两次筛选,第一次筛选的目的是?第二次筛选的目的?

作者&投稿:强范 (若有异议请与网页底部的电邮联系)
单克隆抗体中两次筛选分别是什么方法~

第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞,用连续注射抗原,下面具体介绍一下:
1、在实际免疫过程中,由于采用连续注射抗原的方法,且一种抗原决定簇刺激机体形成相对应的一种效应B淋巴细胞,因此,从小鼠脾脏中取出的效应B淋巴细胞的特异性是不同的,经HAT培养液筛选的杂交瘤细胞特异性也存在差异,所以必须从杂交瘤细胞群中筛选出能产生针对某一预定抗原快定簇的特异性杂交瘤细胞;
2、通常采用有限稀释克隆细胞的方法,将杂交瘤细胞多倍稀释,接种在多孔的细胞培养板上,使每一孔含一个或几个杂交瘤细胞(理论上30%的孔中细胞数为0时,才能保证有些孔中是单个细胞),再由这些单细胞克隆生长,最终选出分泌预定特异抗体的杂交细胞株进行扩大培养。

拓展资料:
单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体,称为单克隆抗体。通常采用杂交瘤技术来制备,杂交瘤(hybridoma)抗体技术是在细胞融合技术的基础上,将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。
参考资料:单克隆抗体百度百科:网页链接

第一次筛选:

(1)筛选对象:脾细胞、瘤细胞、脾-脾细胞、瘤-瘤细胞、脾-瘤细胞(即羊红细胞免疫过的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合后得到的细胞混合液)。另有少量多细胞聚体,因寿命短而迅速死亡,故无需特殊筛选。

(2)筛选方法:用HAT选择培养基筛选出正常生长的细胞。(注重:HAT培养基含有次黄嘌呤H、氨基喋呤A和胸腺嘧啶核苷T。其中氨基喋呤能阻断核酸合成的主通路,而次黄嘌呤在磷酸核糖转移酶HGPRT的催化下能合成RNA或胸腺嘧啶核苷在胸腺嘧啶核苷激酶TK的催化下合成DNA均属于核酸合成的旁通路。)

(3)筛选结果:脾-瘤细胞正常生长,其它细胞都会死亡。(析因:脾细胞和脾-脾细胞的核酸合成主通路被氨基喋呤阻断,虽有核酸合成的旁通路,但不能长期增殖;瘤细胞和瘤-瘤细胞缺乏核酸合成旁通路的酶,核酸合成主通路又被氨基喋呤阻断,因核酸合成障碍而死亡;脾-瘤细胞具有脾细胞的核酸合成旁通路酶,虽核酸合成主通路被氨基喋呤阻断,但可利用培养基中的次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷合成核酸而得以生存。)

第二次筛选:

(1)筛选对象:多克隆杂交瘤细胞群体。(即产生多种抗体的脾-瘤细胞混合群体。)

(2)筛选方法:抗体检测( 如 免疫荧光技术、放射免疫技术等,实际上是利用稀释法,在聚乙烯微板孔内逐个杂交瘤细胞分开培养,然后检查每孔中产生特定抗体的能力)。

(3)筛选结果:产生专一性抗体的杂交瘤细胞。

两次筛选的目的分别是:

  1. 第一次筛选:是否拥有抗体基因并且能表达。

  2. 第二次筛选:已经融合的细胞是否能够表达抗体。



第一次获得杂交细胞,第二次获得可以产生抗体的杂交细胞。


制备单克隆抗体所采用的细胞工程技术包括( )①细胞培养 ②细胞融合...
单克隆抗体主要涉及的细胞工程技术包括动物细胞培养、动物细胞融合技术,无胚胎移植,B错误;C、单克隆抗体主要涉及的细胞工程技术包括动物细胞培养、动物细胞融合技术,无胚胎移植,C错误;D、单克隆抗体主要涉及的细胞工程技术包括动物细胞培养、动物细胞融合技术,无胚胎移植,细胞核移植,D错误.故选:A.

细胞融合的意义与应用
4、淋巴细胞杂交瘤和单克隆抗体的制备。应用:细胞融合不仅可用于基础研究,而且还有重要的应用价值,在植物育种方面已经成功的有萝卜+甘蓝、粉蓝烟草+郎氏烟草、番茄+马铃薯等。细胞融合另一个重要应用就是制备单克隆抗体。单克隆抗体可以用作诊断试剂,治疗疾病和运载药物,具有准确,高效,简易,快速等...

单克隆与克隆的区别
“单”和“克隆”要分开看,克隆是因为它是无性增殖来的,通常是一种人工诱导的无性生殖方式或者自然的无性生殖方式(如植物)。是原来细胞的基因的完全复制过来的,一个克隆就是一个多细胞生物在遗传上与另外一种生物完全一样。单是因为它只是因为要提取一种抗体,并不是多种。因此,单克隆抗体是...

单克隆抗体用的到底是效应B细胞还是B淋巴细胞?
严格来讲,是效应B淋巴细胞。效应B淋巴细胞属于B淋巴细胞的一种,是已经被抗原刺激而分化的B淋巴细胞(浆细胞),可以分泌特异性抗体。而未受到抗原刺激的B淋巴细胞是不能分泌特异性抗体的。只不过,教材一般没有去刻意强调这一点,不必过于纠结。只要知道融合的B淋巴细胞是效应B淋巴细胞就可以了。

什么是单克隆抗体?
用具备这种特性的单个杂交瘤细胞培养成细胞群,可制备针对一种抗原表位的特异性抗体,即单克隆抗体。单克隆抗体是人工制备的杂交瘤细胞生产的,杂交瘤细胞是由一个经抗原激活后的B细胞与一个骨髓瘤细胞融合形成。单克隆抗体优点:纯度高,灵敏度高,特异性强,交叉反应少,制备的成本低。缺点:对技术有...

单克隆和多克隆
单克隆细胞将合成针对一种抗原决定簇的抗体,称为单克隆抗体。抗原刺激机体,产生免疫学反应,由机体的浆细胞合成并分泌的与抗原有特异性结合能力的一组球蛋白,这就是免疫球蛋白,这种与抗原有特异性结合能力的免疫球蛋白就是抗体。抗原通常是由多个抗原决定簇组成的,由一种抗原决定簇刺激机体,由一个B...

为什么不用人的体细胞做单克隆抗体
体细胞杂交技术是植物细胞工程的技术手段,克隆动物和制备单克隆抗体是动物细胞工程的应用,克隆动物运用的技术手段是细胞核移植技术,制备单克隆抗体运用的是动物细胞融合技术。

单克隆抗体制备为何不用人的细胞?
B淋巴细胞不能在体外生长,而骨髓瘤细胞可在体外生长繁殖,用细胞杂交技术使骨髓瘤细胞与免疫的淋巴细胞融合得到融合细胞。这种细胞既具有B淋巴细胞合成专一抗体的特性也有骨髓瘤细胞能在体外培养增殖永存的特性。

小鼠的细胞可以用兔单克隆抗体吗
你好应该使用小鼠的骨髓瘤细胞 用作兔子的单克隆抗体的材料

单克隆为什么用脾脏B细胞
因为脾脏是最大的淋巴器官,其中含有大量的效应B细胞。

友谊县18725815463: 利用细胞………单克隆抗体时有两次筛选,第一次筛选的目的是?第二次筛选的目的?过程中有两种酶是什么? -
冻杜果复:[答案] 第一次是选出杂交瘤细胞,第二次是选择出具有能够产生特异性抗体的杂交瘤细胞.胰蛋白酶,

友谊县18725815463: 单克隆抗体中两次筛选分别是什么方法 -
冻杜果复: 第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞,用连续注射抗原,下面具体介绍一下: 1、在实际免疫过程中,由于采用连续注射抗原的方法,且一种抗原决定簇刺激机体形成相对应的一种效应B淋巴细胞,因此,从小鼠脾脏中取出的效应B淋巴...

友谊县18725815463: 单克隆抗体需哪2次筛选? -
冻杜果复: 第一次筛选是在两细胞融合后 目的是选出符合要求的杂交瘤细胞 而第二次筛选则是在杂交瘤细胞培养后 此次筛选则是为了选出能产生符合要求的单一抗体的杂交瘤细胞 就是这样 这些内容在高三生物课本第七十二页有详细叙述

友谊县18725815463: 在制备单克隆抗体是为什么要进行两次筛选 -
冻杜果复: 第一次筛选出杂交瘤细胞,第二次筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞

友谊县18725815463: 单克隆抗体两次筛选的理由? -
冻杜果复: 第一2113次:筛选出AB型细胞(A:浆细胞,B:骨髓瘤细胞),不要AA、5261BB型. 第二次:筛选出有特异性的4102杂交瘤细胞,检验阳性.单克隆细胞特点:1653灵敏度高、特异性强、可大量制备 杂交瘤细胞特点:能体外大版量繁殖....忘记了...详细请看人教版生物权选修三

友谊县18725815463: 制备单克隆抗体过程,是需要两次筛选还是三次筛选?为什么? -
冻杜果复: 两次. 第一次是筛选出杂交瘤细胞,第二次是筛选出能产生特异抗体的杂交瘤细胞.

友谊县18725815463: 单克隆抗体制备过程中两次筛选有什么区别 -
冻杜果复: 这好像是高中生物吧 先说骨髓瘤细胞和B淋巴细胞融合,共有3种情况,B淋巴和B淋巴融合,B淋巴和骨髓瘤细胞融合,骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞融合 第一次筛选是为了筛选出能无限增殖的细胞,这只有两种情况: 1、经过免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞的融合细胞 2、骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞的融合细胞 第二次是为了筛选出能产生单克隆抗体的细胞 那么只可能是,经过免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞的融合细胞. 所以有两次筛选

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