细胞提取RNA求助

提取RNA提取不出来求助~

1. 保证细胞数量要足够，提取的时候细胞应该铺70%以上.
2.细胞裂解很关键，详细按照试剂盒的要求操作，保证有足够的裂解时间。
3.试剂使用要规范，要严格使用进口无RNA酶的枪头进行操作。
4.特此强调洗脱RNA的水一定要干净无RNA酶。
如果还不能提取出来，可以更换提取方法，比如TRZOL法或者更换试剂盒

Carrier RNA共沉淀剂提取RNA或者DNA同沉淀增加沉淀量体积使沉淀视
举例：
比说现收DNADNA几ng些DNA离沉淀候沉管底看看办候加点DNA共沉淀剂些共沉淀剂跟DNA能发任何反应没相互干扰沉候团管底根据管底否加共沉淀剂做判断目标DNA否沉淀说白共沉淀剂即carrier DNA指示剂作用通间接判断目标DNA或者RNA提取情况
共沉淀剂要些物质跟目标发反应干扰目标跟目标相同沉降系数都作共沉淀剂
用比glycogen酵母RNA 或者 tRNAhenry DNA鲑鱼精DNA线性丙烯酰胺等等

carrier DNARNA干扰目标RNA理化性质总RNA浓度肯定变提取核酸少目标RNA知道知道面

操作步骤：
样品处理：
a. 植物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混匀。
b. 动物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液，用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。
c. 贴壁细胞：直接在培养板中加入裂解液裂解细胞，每106细胞加1ml 裂解液。用取样器吹打混匀。
d. 细胞悬液：离心收集细胞。每106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液混匀。
e. 血液处理：取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10分钟，10000rpm离心1分钟。弃上清，若沉淀含有红细胞，可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。离心后沉淀加入1 ml裂解液混匀。
将处理后的样品在室温放置5分钟，使得核酸蛋白复合物完全分离。
向匀浆样品中加0.2ml氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置3-5分钟。
2-8℃ 12000 rpm离心10分钟。RNA主要在上层无色的水相中，把水相转移到新管中，不要吸到沉淀。
吸附柱前处理：在吸附柱中加入500ul 洗柱液，室温放置2分钟，2-8℃ 12,000 rpm离心2min，弃废液。6. 第4步收集的上清中加入200ul无水乙醇混匀，加入吸附柱静置2分钟，2-8℃ 12000rpm离心2min，弃废液。7. 向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，2-8℃ 12,000 rpm离心2min，弃废液。8. 向吸附柱中加入600ul漂洗液，2-8℃ 12,000 rpm离心2min，弃废液。9. 12000rpm离心2min，弃掉收集管，将吸附柱置于室温放置数分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除。10. 将吸附柱放入新管中，向膜中央滴加50-100ul RNase free ddH2O，室温放置5min，12000rpm室温离心2min即得到RNA。

注意事项：
所有相关器皿耗材都应为RNase-free产品，操作过程要小心，带口罩、手套避免环境中RNA酶污染样品。
RNA在水溶液中OD值可能在1.5-1.9之间，但这并不表示RNA不纯，需电泳检测。

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商河县13658108060： 请教如何从培养细胞提取mRNA - ？
雪巩九味： 离心收集细胞. 可用0.5MLltrizol,振荡--- 100微升氯仿 ,剧烈振荡,分层静置,12000RPM台式离心机 4度 10分钟--------取80%上清 ,加500微升异丙醇,沉淀总RNA,12000RPM,4度,5分钟 ----弃上清,加1ML75%冰乙醇洗涤,12000RPM,4度,5分钟------倒去吸边,空气中干燥30分钟-------加20-50微升DEPC处理的消毒三蒸水,溶解,低温保存备用.如果不保留样本,可不用DEPC处理的三蒸水,用消毒三蒸水即可则进入逆转录. 另外液体的体积可按上述比例.

商河县13658108060： 提取RNA提取不出来求助 - ？
雪巩九味： 1. 保证细胞数量要足够,提取的时候细胞应该铺70%以上. 2.细胞裂解很关键,详细按照试剂盒的要求操作,保证有足够的裂解时间. 3.试剂使用要规范,要严格使用进口无RNA酶的枪头进行操作. 4.特此强调洗脱RNA的水一定要干净无RNA酶. 如果还不能提取出来,可以更换提取方法,比如TRZOL法或者更换试剂盒

商河县13658108060： 细胞提RNA方法有哪些 - ？
雪巩九味： 将Trizol、氯仿、冷PBS、EP管、灭酶枪头、一次性手套、EP管架、吸管等物品带入细胞室. 1、 取出EP管、做好标记 2、 取出细胞、收集上清保存备用 3、 用冷PBS冲洗细胞两次 4、 加入1ml Trizol (24孔板每孔加0.5ml即可),调小刻度用移液器吹打细胞至液体澄清(生化:摇动混匀后室温孵育10min)

商河县13658108060： 请教高手关于从细胞中提取总RNA - ？
雪巩九味： Carrier RNA是共沉淀剂,就是和你提取的RNA或者DNA同时沉淀,增加沉淀的量和体积,使你最后的沉淀可视.举个例子:比如说你现在回收DNA,而你的DNA只有几个ng,那么这些DNA你离心沉淀他们的时候,沉在管底你是看不到他们的,...

商河县13658108060： 怎样提取细胞核内的RNA - ？
雪巩九味： 怎样提取细胞核内的RNA 如何分别从细胞浆和细胞核中抽提RNA 操作步骤: 样品处理: a. 植物组织:取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨,把粉末加入到1ml裂解液中混匀. b. 动物组织:取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液,...

商河县13658108060： 如何提取单个细胞的RNA - ？
雪巩九味： 如何提取单个细胞的RNA 1. 首先严格说不是DNA的降解,是DNA被打断后形成的片段,因为一般DNA都很长,在操作过程中容易受外力的作用而断裂,形成片段,这是正常现象,提取中无法避免,只能尽量减少; 2. 如果是降解的话,会形成弥散形的条带,条带区分不明显; 3. 操作中注意用力要柔和,不要用力的摇晃和吹打等,所使用的枪头最好提前用剪刀斜着剪一下,使枪头孔径变大,可以保证抽吸的时候减少对DNA的剪切力; 4. 注意加入RNA酶,降解RNA;

商河县13658108060： 提取细胞的RNA时,如何有超纯水还是去离子水? - ？
雪巩九味： 提取RNA时应该使用DEPC处理过的水,999ml三蒸水中加入1mlDEPC,搅拌过夜使之充分溶解,分装到小瓶里,121℃高压30min,使DEPC分解,封口膜包口就可以保存备用了.配置及分装时候小心点,DEPC具有一定的毒性.

商河县13658108060： 几种提取RNA的方法 - ？
雪巩九味：[答案] 摘要:以肝脏组织和NDV感染的鸡胚尿囊液为例,简单介绍了几种提取细胞或组织液中总RNA及mRNA的方法-SOD-蛋白酶K法、异硫氰酸胍法、loigo(dT)纤维素亲和层析法.SDS-蛋白酶K法提取RNA经济可靠,但纯度稍低;异硫...

商河县13658108060： 怎么提取RNA? - ？
雪巩九味： 我们实验室用的是TRIZOL试剂盒,原理就是先组织匀浆,然后将RNA与蛋白质等分离,这个用的是戊二醇,然后再用柱子加各种溶剂,各种12000r/min离心,多次离心之后,经过洗涤干燥,再溶于DEPC水就可以冷藏了. 整个实验中要注意尽量避免实验材料与空气接触,以免被RNA酶降解其中的RNA,要知道RNA酶可是无处不在啊,还有DEPC是有毒的(一般分子实验所用的都多多少少有毒...),所以要小心~

商河县13658108060： 如何从冻存的细胞提取RNA十万火 - ？
雪巩九味： 1). 将冻存管从液氮或冰箱中取出; 2). 不待细胞溶解,将Trizol500ul-1ml直接放入冻存管中,此时Trizol会冻成冰状; 3). 将冻存管缓慢融化,并用加样器吹打混匀; 4). 将细胞裂解液移至Eppendorf管中,16000′g离心1min,吸出管底絮状...