细胞提取RNA求助
1. 保证细胞数量要足够，提取的时候细胞应该铺70%以上.
2.细胞裂解很关键，详细按照试剂盒的要求操作，保证有足够的裂解时间。
3.试剂使用要规范，要严格使用进口无RNA酶的枪头进行操作。
4.特此强调洗脱RNA的水一定要干净无RNA酶。
如果还不能提取出来，可以更换提取方法，比如TRZOL法或者更换试剂盒
Carrier RNA共沉淀剂提取RNA或者DNA同沉淀增加沉淀量体积使沉淀视
举例：
比说现收DNADNA几ng些DNA离沉淀候沉管底看看办候加点DNA共沉淀剂些共沉淀剂跟DNA能发任何反应没相互干扰沉候团管底根据管底否加共沉淀剂做判断目标DNA否沉淀说白共沉淀剂即carrier DNA指示剂作用通间接判断目标DNA或者RNA提取情况
共沉淀剂要些物质跟目标发反应干扰目标跟目标相同沉降系数都作共沉淀剂
用比glycogen酵母RNA 或者 tRNAhenry DNA鲑鱼精DNA线性丙烯酰胺等等
carrier DNARNA干扰目标RNA理化性质总RNA浓度肯定变提取核酸少目标RNA知道知道面
1. 请自行准备：无水乙醇、PBS及无RNA酶的1.5mL离心管。
2. 取出析出液和洗涤液，按以下操作：
a) 析出液：4.5mL加入25.5mL无水乙醇；9mL加入51mL无水乙醇。
b) 洗涤液：9mL加入21mL无水乙醇；18mL加入42mL无水乙醇。
c) 配制好的析出液如出现沉淀，可在37℃溶解，摇匀后使用。
3. 细胞处理：a) 培养板培养的单层贴壁细胞，弃培养基，PBS清洗一遍，弃PBS；
b) 培养瓶培养的贴壁细胞应先用胰酶消化，处理为细胞悬液， 细胞量在105-106为佳， 1,000 rpm 离心 5分钟，彻底弃去上清，加入100μL PBS振荡至细胞悬浮；
c) 培养的细胞为悬浮细胞，1,000 rpm 离心 5分钟，彻底弃去上清，加入100μL PBS振荡至细胞悬浮。
4. 加入200μL裂解液，20 μL 消化液，充分振荡混匀，56℃水浴10 分钟至细胞完全裂解。
5. 加入500μL析出液，轻轻颠倒混匀，如有半透明悬浮物，不影响RNA的提取与后续实验。
6. 将吸附柱放入收集管内，将上述溶液转入吸附柱内，静置2 分钟，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。
7. 将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液至吸附柱内，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。
8. 将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm 4℃离心2 分钟，离去残留的洗涤液。
9. 取出吸附柱，放入新的无RNA酶的1.5 mL 离心管内，加入50-200μL 洗脱液，静置3 分钟，12,000 rpm 4℃ 离心2 分钟，收集RNA溶液。
您好，现在这个行业发展的不错，生物实验技术外包也会跟着发展，比如一些高校或者企业部分实验不想自己内部开展，或者涉及的设备比较昂贵，技术要求高，都会寻求外包。但是现在竞争也比较大，的得看单位这边整体做的怎么样。
其次要看下你选择单位的规模如何，上海这边的，你可以看下基尔顿生物。
提取细胞rna一个培养皿加多少trizol
（仅供参考）1ml就可以了，细胞的RNA提取比较容易，只要你提取过程能够保证不污染，RNA一般不会降解，质量也应该不错。如果要使浓度高一点，你可以稀释的时候少加点DEPC水，我不知道你是多少水稀释的，可以减少一下。
RNA病毒的提取方法
3、 0.1%DEPC水：100ml dd水中加入DEPC0.1ml，充分振荡，37℃孵育12h以上，121℃高压灭菌20min，于4℃保存。 1、 样品处理（1） 组织：50-100mg组织中加入1ml TROzlo试剂。（2） 单层细胞：加入TROzlo试剂1ml\/cm2平板。（3） 悬浮细胞：处理前洗涤细胞，以防止RNA降解。每5-10×105动物...
如何选择正确的RNA提取方法
细胞或组织的彻底匀浆对RNA提取来说，是一个很关键的步骤，它能够防止RNA的损失和降解。匀浆的方法应根据细胞或组织的类型来选择。大部分培养的细胞可以置于细胞裂解液中，通过简单的涡旋震荡来匀浆；而动物组织、植物组织、酵母和细菌、真菌则常常需要更加剧烈的方法，通常用液氮研磨。比如说细菌（特别是...
如何从血清中提取RNA
像以上全血的RNA提取有两种思路：1）直接处理抗凝的全血，即加入如Trizol的裂解液直接往下做。此方法有个缺点：处理的体积血液体积有限，一般1ml Trizol处理100ul血液，最多不超过200ul.2) 先去除血液中的红细胞分离出其中的白细胞（即淋巴细胞），然后提取白细胞的RNA。此方法的缺点：只能提取得到淋...
RNA的提取方法
3、玻璃棒缠绕法：用盐酸胍裂解细胞，将裂解物铺于乙醇上，然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅，DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。4、异丙醇沉淀法：基本同1法，仅用二倍容积异丙醇替代乙醇，可去除小分子RNA（在异丙醇中可溶状态）5、表面活性剂快速制备法：用TritonX-100A或NP40表面活性剂破碎细...
RNA提取分离纯化时应注意什么?
这种结构为真核mRNA的提取，提供了极为方便的选择性标志，寡聚（dT）纤维素或寡聚（U）琼脂糖亲合层析分离纯化mRNA的理论基础就在于此。 mRNA的分离方法较多，其中以寡聚（dT）-纤维素柱层析法最为有效，已成为常规方法。此法利用mRNA 3’末端含有Poly（A+）的特点，在RNA流经寡聚（dT）纤维素柱...
RNA提取方法或技术有哪些
通过使用biog结合液\/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶,然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤,抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱....
求TRIZOL提取RNA的详细步骤
厚百提供：1、在提取组织RNA时，每50～100mg组织用1ml Trizol试剂对组织进行裂解；提取细胞RNA时，先离心沉淀细胞，每5-10 ╳106个细胞加1ml Trizol后，反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞。2、将组织或细胞的Trizol裂解液转入EP管中,在室温15~30C下放置5分钟；在EP管中，按照每1ml TRIZOL加0...
细胞提取总RNA检测RIN太低是什么原因?有什么方法解决
RIN(RNA Integrity Number):RNA完整性计数,看你的RNA是不是完整,质量好不好,太低就说明降解严重~~~其实提取RNA的条件没那么苛刻,在普通的通风橱里就可以操作,外源RNase的污染比较好消除,关键是破壁时的内源降解.如果用trizol法就必须考虑trizol的量.另外,相同的方法提取不同细菌的RNA效果也不一样....
RNA病毒RNA病毒提取方法
RNA病毒的提取方法主要包括以下步骤:试剂准备: 需要TROzlo试剂、氯仿、75%乙醇（0.1% DEPC配制）。塑料器皿需用0.1% DEPC水浸泡。0.1% DEPC水的制备方法是将100ml蒸馏水加入DEPC 0.1ml，充分振荡后在37℃孵育至少12小时，然后121℃高压灭菌20分钟，最后储存在4℃。样品处理: 对于组织，取50-100mg...
山岭瑞德： 离心收集细胞. 可用0.5MLltrizol,振荡--- 100微升氯仿 ,剧烈振荡,分层静置,12000RPM台式离心机 4度 10分钟--------取80%上清 ,加500微升异丙醇,沉淀总RNA,12000RPM,4度,5分钟 ----弃上清,加1ML75%冰乙醇洗涤,12000RPM,4度,5分钟------倒去吸边,空气中干燥30分钟-------加20-50微升DEPC处理的消毒三蒸水,溶解,低温保存备用.如果不保留样本,可不用DEPC处理的三蒸水,用消毒三蒸水即可则进入逆转录. 另外液体的体积可按上述比例.
商水县18854563741： 提取RNA提取不出来求助 - ？
山岭瑞德： 1. 保证细胞数量要足够,提取的时候细胞应该铺70%以上. 2.细胞裂解很关键,详细按照试剂盒的要求操作,保证有足够的裂解时间. 3.试剂使用要规范,要严格使用进口无RNA酶的枪头进行操作. 4.特此强调洗脱RNA的水一定要干净无RNA酶. 如果还不能提取出来,可以更换提取方法,比如TRZOL法或者更换试剂盒
商水县18854563741： 细胞提RNA方法有哪些 - ？
山岭瑞德： 将Trizol、氯仿、冷PBS、EP管、灭酶枪头、一次性手套、EP管架、吸管等物品带入细胞室. 1、 取出EP管、做好标记 2、 取出细胞、收集上清保存备用 3、 用冷PBS冲洗细胞两次 4、 加入1ml Trizol (24孔板每孔加0.5ml即可),调小刻度用移液器吹打细胞至液体澄清(生化:摇动混匀后室温孵育10min)
商水县18854563741： 请教高手关于从细胞中提取总RNA - ？
山岭瑞德： Carrier RNA是共沉淀剂,就是和你提取的RNA或者DNA同时沉淀,增加沉淀的量和体积,使你最后的沉淀可视.举个例子:比如说你现在回收DNA,而你的DNA只有几个ng,那么这些DNA你离心沉淀他们的时候,沉在管底你是看不到他们的,...
商水县18854563741： 怎样提取细胞核内的RNA - ？
山岭瑞德： 怎样提取细胞核内的RNA 如何分别从细胞浆和细胞核中抽提RNA 操作步骤: 样品处理: a. 植物组织:取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨,把粉末加入到1ml裂解液中混匀. b. 动物组织:取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液,...
商水县18854563741： 如何提取单个细胞的RNA - ？
山岭瑞德： 如何提取单个细胞的RNA 1. 首先严格说不是DNA的降解,是DNA被打断后形成的片段,因为一般DNA都很长,在操作过程中容易受外力的作用而断裂,形成片段,这是正常现象,提取中无法避免,只能尽量减少; 2. 如果是降解的话,会形成弥散形的条带,条带区分不明显; 3. 操作中注意用力要柔和,不要用力的摇晃和吹打等,所使用的枪头最好提前用剪刀斜着剪一下,使枪头孔径变大,可以保证抽吸的时候减少对DNA的剪切力; 4. 注意加入RNA酶,降解RNA;
商水县18854563741： 提取细胞的RNA时,如何有超纯水还是去离子水? - ？
山岭瑞德： 提取RNA时应该使用DEPC处理过的水,999ml三蒸水中加入1mlDEPC,搅拌过夜使之充分溶解,分装到小瓶里,121℃高压30min,使DEPC分解,封口膜包口就可以保存备用了.配置及分装时候小心点,DEPC具有一定的毒性.
商水县18854563741： 几种提取RNA的方法 - ？
山岭瑞德：[答案] 摘要:以肝脏组织和NDV感染的鸡胚尿囊液为例,简单介绍了几种提取细胞或组织液中总RNA及mRNA的方法-SOD-蛋白酶K法、异硫氰酸胍法、loigo(dT)纤维素亲和层析法.SDS-蛋白酶K法提取RNA经济可靠,但纯度稍低;异硫...
商水县18854563741： 怎么提取RNA? - ？
山岭瑞德： 我们实验室用的是TRIZOL试剂盒,原理就是先组织匀浆,然后将RNA与蛋白质等分离,这个用的是戊二醇,然后再用柱子加各种溶剂,各种12000r/min离心,多次离心之后,经过洗涤干燥,再溶于DEPC水就可以冷藏了. 整个实验中要注意尽量避免实验材料与空气接触,以免被RNA酶降解其中的RNA,要知道RNA酶可是无处不在啊,还有DEPC是有毒的(一般分子实验所用的都多多少少有毒...),所以要小心~
商水县18854563741： 如何从冻存的细胞提取RNA十万火 - ？
山岭瑞德： 1). 将冻存管从液氮或冰箱中取出; 2). 不待细胞溶解,将Trizol500ul-1ml直接放入冻存管中,此时Trizol会冻成冰状; 3). 将冻存管缓慢融化,并用加样器吹打混匀; 4). 将细胞裂解液移至Eppendorf管中,16000′g离心1min,吸出管底絮状...
