如何筛选在真核细胞中的阳性克隆
看你的目的而定,质粒是起运载体的作用,是工具,导入什么细胞,就不好说了,植物细胞,动物细胞,微生物。动物细胞采用显微注射技术,植物细胞采用农杆菌转化法,基因枪法,还用我国发明的花粉管通道法,微生物就用钙离子处理法。看你导入目的基因的目的,...
这是一种分子生物学的方法。
比如，在大肠杆菌中导入一个目的基因，要怎样才知道有没有导入进去呢？所以要同时导入一个报告基因（目的基因和报告基因位于同一个载体上）。导入了报告基因的大肠杆菌在含抑制性物质的培养基上就可以生长，而不含报告基因的大肠杆菌（就是转化失败的）就不能生长。这样过了两三天后，在培养基上看见的菌落就是阳性科隆。这一过程就是阳性科隆筛选。一般选用的报告基因像青霉素抗性基因，链霉素抗性基因等等。
如果还想了解得更详细，就去买本分子生物学实验书或入门书籍看看就明白了。
高考生物问题
8、我们讲的真核生物仅仅只是看有无完整的细胞核，简单来说有没有核膜。而不是看其他细胞结构。9、对，细胞膜有流动性。10、这个牵扯到生物化学的内容，举个简单的例子。假如你缺失了乳糖分解酶，你就会因为无法分解牛奶中的乳糖而换上乳糖不耐受证。再比如黑色素的合成与酪氨酸酶(tyrosinase)密切相关...
求助!关于真核载体的构建
真核载体是指有核生物在其他生物上的寄生或营腐生 一定要有载体并且含有一定的营养价值
G418原代细胞如何筛选
是稳定转染最常用 的选择试剂。当neo基因被整合进真核细胞基因组合适的地方后，则能启动neo基因编码的序列转录为mRNA，从而获得抗性产物氨基糖苷磷酸转移酶的高效 表达，使细胞获得抗性而能在含有G418的选择性培养基中生长。G418的这一选择特性，已在基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面得以...
载体质粒有哪些
这些载体质粒的主要功能包括：提供复制原点以便质粒在宿主细胞中复制，包含标记基因以便于筛选和鉴定含有质粒的细胞，具有多克隆位点以便于插入外源基因等。不同类型的载体质粒根据其用途和宿主细胞类型的不同而有所区别。例如，原核生物表达载体质粒主要用于大肠杆菌等原核细胞的基因克隆和表达，而真核生物表达...
原核系统中影响外源基因表达效率的主要因素?
这主要是由于外源基因在受体植物的基因组内插入位点不同造成的。这就是所谓的"位置效应"。为了消除位置效应,使外源基因都能够整合在植物基因组的转录活跃区,在目前的表达载体构建策略中通常会考虑到核基质结合区以及定点整合技术的应用。 核基质结合区(matrix association region,MAR)是存在于真核细胞染色质中的一段...
中科院生物化学研究生历年考题
3.请你尽可能多地列举RNA生物功能的种类。 4.说明基因芯片的工作原理及其在生物学研究中的意义。 5.简述反转录(还原)病毒HIV的结构特征及其可能的致病机理。 6.简述真核生物染色体上组蛋白的种类,组蛋白修饰的种类及其生物学意义。 7.如何用实验证明双功能酶所催化的2种化学反应是否发生在同一催化部位。
原核表达载体和真核表达载体的区别
2、PCR产物双酶切后回收，在T4DNA连接酶作用下连接入载体。真核细胞表达载体之一为pEGFP-N1载体，具有对方面的优点。pEGFP-N1载体上携带有EGFP蛋白表达基因。二、表达实现方式不同：原核表达载体测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确,进入下步操作。否则应筛选更多克隆，重复亚克隆或亚克隆至不同酶...
...运用正向遗传学方法设计筛选具有系统获得性抗性的水杨酸突变体的方案...
例如,植物起始密码子周围的序列的典型特征是AACCAUGC,动物的起始密码子周围的的序列CACCAUG原核生物与两者之间的差别较大。 Kozak的详细研究前的起始密码子的ATG相邻基地定向诱变,转录和翻译的影响,并总结出围绕ACCATGG在真核生物中,最有效的序列的转录和翻译起始密码子,特别是-3位A的词条效率是非常重要的。购买的...
G418筛选后如何确保得到遗传稳定且强表达目的蛋白的细胞克隆?
in H2O）溶解性：清澈溶液（100mg\/ml in H2O）储存条件：4℃保存，有效期2年G418 Sulfate是一种氨基糖苷类抗生素，与庆大霉素相似，主要作用于细菌、酵母、原生动物、高等植物和哺乳动物的原核或真核细胞，通过抑制蛋白合成达到筛选目的。它在转化了含有抗新霉素基因质粒的真核细胞筛选中具有广泛应用。
高中生物总结
真核细胞的主要结构和功能是考查重点,一般以结构识图为考查的主流方向,偶有曲线和表格出现,也要关注与生活、社会实践相结合的知识点。在考题中常见的命题形式是运用生物体结构与功能相适应来理解、解释有关现象,如心肌细胞比腹肌细胞显著多的细胞器是线粒体、分泌蛋白形成多的,高尔基体则较多等。在复习本专题内容时...
芷使碘佛： 看你的目的而定,质粒是起运载体的作用,是工具,导入什么细胞,就不好说了,植物细胞,动物细胞,微生物.动物细胞采用显微注射技术,植物细胞采用农杆菌转化法,基因枪法,还用我国发明的花粉管通道法,微生物就用钙离子处理法.看你导入目的基因的目的,...
洪洞县13084396929： 基因克隆筛选的几种方法和相关的技术特征有哪些 - ？
芷使碘佛： 这是一套通用方法,简单方便.利用目的基因筛选就要考虑各种情况,很麻烦:能否顺利表达(克隆载体不表达,原核真核,修饰定位、辅因子等等);是否便于筛选(抗生素筛选很方便,如果目的基因是酶、转录因子或结构蛋白,怎么筛选?);不能通用(每研究一种蛋白,就要换一种载体/宿主/筛选方法)...
洪洞县13084396929： 什么叫阳性克隆筛选法? 请打击帮帮忙!! - ？
芷使碘佛： 这是一种分子生物学的方法. 比如,在大肠杆菌中导入一个目的基因,要怎样才知道有没有导入进去呢?所以要同时导入一个报告基因(目的基因和报告基因位于同一个载体上).导入了报告基因的大肠杆菌在含抑制性物质的培养基上就可以生长,而不含报告基因的大肠杆菌(就是转化失败的)就不能生长.这样过了两三天后,在培养基上看见的菌落就是阳性科隆.这一过程就是阳性科隆筛选.一般选用的报告基因像青霉素抗性基因,链霉素抗性基因等等. 如果还想了解得更详细,就去买本分子生物学实验书或入门书籍看看就明白了.
洪洞县13084396929： 如何进行重组DNA阳性克隆的鉴定 - ？
芷使碘佛： 首先,要了解重组DNA的大小; 然后选择引物进行PCR; 最后跑电泳,看在相应位置是否存在DNA带.
洪洞县13084396929： 基因克隆中蓝白斑筛选法筛选阳性克隆的原理. - ？
芷使碘佛： 蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法: 是根据载体的遗传特征筛选重组子,如α-互补、抗生素基因等.现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段,其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和前146个氨基酸的编码信息.在这...
洪洞县13084396929： 生物技术制药试题 - ？
芷使碘佛： 真核基因带有内含子,因此常常采用采用反转录PCR,克隆cDNA.常用阳性克隆检测可以DNA杂交、表达文库筛选(蛋白质杂交)、功能筛选、序列测定等.
洪洞县13084396929： 怎样检测 双荧光素酶报告基因检测试剂盒 - ？
芷使碘佛： (1) 用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点.(2)设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段,将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒(pGL3-basic)中.(3)筛选阳性克隆,测序.扩增克隆并提纯质粒备用.
洪洞县13084396929： 真核基因会不会因为太大而不能用质粒做载体.如果是用什么做载体 - ？
芷使碘佛： 真核基因大的原因是有内含子部分,但是连入质粒载体中进行表达的时候大部分都是在原核细胞中进行的.我们做真核基因的时候往往用反转录的方法获得目的基因从而不包含内含子,所以即使是真核基因也不会用大片段.
洪洞县13084396929： 用DNA探针法检测基因,具体怎么操作?越详细越好 - ？
芷使碘佛： DNA探针是最常用的核酸探针,指长度在几百碱基对以上的双链DNA或单链DNA探针.现已获得DNA探针数量很多,有细菌、病毒、原虫、真菌、动物和人类细胞DNA探针.这类探针多为某一基因的全部或部分序列,或某一非编码序列.这些...
洪洞县13084396929： DNA,纯化,表达,连接. - ？
芷使碘佛： DNA 纯化 在生物技术实验中,我们粗提取的DNA需分离纯化去处蛋白质等杂质,我们都需要将最终的结果在琼脂糖凝胶, 或PAGE凝胶上走电泳观察,以判断我们实验的正确性以及DNA片段的完整性.同时通过紫外分光光度计测定OD260,OD...
