原核表达载体和真核表达载体的区别

真核过表达质粒，原核过表达质粒的区别~急求~~~

一、指代不同
1、真核过表达质粒：真核细胞表达载体之一为pEGFP-N1载体，具有对方面的优点。pEGFP-N1载体上携带有EGFP蛋白表达基因。
2、原核过表达质粒：能携带插入的外源核酸序列进入原核细胞中进行表达的载体。
二、特性不同
1、真核过表达质粒：该质粒具有很强的复制能力，可以满足随宿主细胞分裂时跟随胞质遗传给新生的子细胞，这是真核细胞表达载体保证目的基因稳定表达的因素之一。
2、原核过表达质粒：启动子是DNA链上一段能与RNA聚合酶结合并起始RNA合成的序列，它是基因表达不可缺少的重要调控序列。没有启动子，基因就不能转录。由于细菌RNA聚合酶不能识别真核基因的启动子，因此原核表达载体所用的启动子必须是原核启动子。

三、载体构建不同
1、真核过表达质粒：，由238个氨基酸组成，分子量约为27Kd。GFPGFP在包括热、极端PH和化学变性剂等苛刻条件下都很稳定，用甲醛固定后会持续发出荧光，但在还原环境下荧光会很快熄灭。
2、原核过表达质粒：以含目的基因的克隆质粒为模板，按基因序列设计一对引物（在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点），PCR循环获得所需基因片段。
参考资料来源：百度百科-原核表达载体
参考资料来源：百度百科-真核细胞表达载体

　　区别主要在表达重组元件还有基因标记。promoter，terminater是宿主识别的的,真核可能还需要enhancer,重组到基因组中的话，需要介导重组的序列。筛选标记绝大多数不一样。
　　真核表达载体在宿主中以质粒形式存在的，可以复制。哺乳动物细胞里没有质粒，外源基因整合到基因组中的，所以不能扩增。由于整合多个位点而产生多拷贝。

　　如果说载体的重组，没区别，都是一样的酶切加连接。细菌转化也一样。真核载体在细菌中也可以进行增值。
　　表达的话，一般原核是直接转化细菌通过ISPG诱导进行表达，蛋白表达后的形式一般是通过包涵体或者是分泌型蛋白存在，这种蛋白如果是真核基因来源，不一定拥有相应的蛋白生物活性，因为原核表达缺少真核转录后的蛋白修饰机制。但是原核表达的蛋白容易纯化，很容易获得纯化蛋白做为免疫原等进行使用。
　　而真核表达则是通过脂质体或者是PEI的等转染试剂在体外通过和质粒形成复合体， 将质粒导入细胞后进行瞬时表达。称为瞬时表达的原因是因为质粒在真核细胞中不能扩增。并且不断被细胞所降解，这种表达在一定的时间后就会消失。除非质粒被整合进入细胞的基因组，通过质粒上带的筛选标记，如G418等，通过筛选得到一株稳定表达你的目的蛋白的细胞克隆。但是这种细胞克隆的表达量相比瞬时表达会非常低甚至于检测不到。真核表达的特点是所表达的蛋白一旦表达即拥有相应的生物学活性，因此真核瞬时转染往往用于研究单个基因在细胞中的功能。而不能用于纯化蛋白。
　　此外，真核表达还有用于昆虫细胞的杆状病毒表面展示系统，其本质也是通过转染含有目的基因的重组质粒（特殊质粒，专用于杆状病毒表面展示系统）给昆虫细胞，然后使用野生型的杆状病毒或者是人工改造过的杆状病毒来感染相应的细胞，来是病毒和质粒在昆虫细胞体内发生重组，获得目的基因，并且最终表达于病毒子的表面，所以成为表面展示系统。

一、表达载体不同：

原核表达载体构建重组表达载体：

1、载体酶切：将表达质粒用限制性内切酶（同引物的酶切位点）进行双酶切，酶切产物行琼脂糖电泳后，用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。

2、PCR产物双酶切后回收，在T4DNA连接酶作用下连接入载体。

真核细胞表达载体之一为pEGFP-N1载体，具有对方面的优点。pEGFP-N1载体上携带有EGFP蛋白表达基因。

二、表达实现方式不同：

原核表达载体测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确,进入下步操作。否则应筛选更多克隆，重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点。以此重组质粒DNA转化表达宿主菌的感受态细胞。

真核表达载体具有neo基因，可以采用G418来筛选已成功转染了该载体的靶细胞。这些特殊的结构可以实现目的基因在靶细胞内的稳定表达。

三、获得目的基因方式不同：

pEGFP-N1载体从结构上看，质粒具有很强的复制能力，可以满足随宿主细胞分裂时跟随胞质遗传给新生的子细胞，这是真核细胞表达载体保证目的基因稳定表达的因素之一。

原核表达载体获得目的基因：

1、通过PCR方法：以含目的基因的克隆质粒为模板，按基因序列设计一对引物（在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点），PCR循环获得所需基因片段。

2、通过RT-PCR方法：提取总RNA，以mRNA为模板，逆转录形成cDNA第一链，以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物。

参考资料来源：百度百科-原核表达载体

参考资料来源：百度百科- 真核细胞表达载体

　　区别主要在表达重组元件还有基因标记。promoter，terminater是宿主识别的的,真核可能还需要enhancer,重组到基因组中的话，需要介导重组的序列。筛选标记绝大多数不一样。
　　真核表达载体在宿主中以质粒形式存在的，可以复制。哺乳动物细胞里没有质粒，外源基因整合到基因组中的，所以不能扩增。由于整合多个位点而产生多拷贝。

　　如果说载体的重组，没区别，都是一样的酶切加连接。细菌转化也一样。真核载体在细菌中也可以进行增值。
　　表达的话，一般原核是直接转化细菌通过ISPG诱导进行表达，蛋白表达后的形式一般是通过包涵体或者是分泌型蛋白存在，这种蛋白如果是真核基因来源，不一定拥有相应的蛋白生物活性，因为原核表达缺少真核转录后的蛋白修饰机制。但是原核表达的蛋白容易纯化，很容易获得纯化蛋白做为免疫原等进行使用。
　　而真核表达则是通过脂质体或者是PEI的等转染试剂在体外通过和质粒形成复合体， 将质粒导入细胞后进行瞬时表达。称为瞬时表达的原因是因为质粒在真核细胞中不能扩增。并且不断被细胞所降解，这种表达在一定的时间后就会消失。除非质粒被整合进入细胞的基因组，通过质粒上带的筛选标记，如G418等，通过筛选得到一株稳定表达你的目的蛋白的细胞克隆。但是这种细胞克隆的表达量相比瞬时表达会非常低甚至于检测不到。真核表达的特点是所表达的蛋白一旦表达即拥有相应的生物学活性，因此真核瞬时转染往往用于研究单个基因在细胞中的功能。而不能用于纯化蛋白。
　　此外，真核表达还有用于昆虫细胞的杆状病毒表面展示系统，其本质也是通过转染含有目的基因的重组质粒（特殊质粒，专用于杆状病毒表面展示系统）给昆虫细胞，然后使用野生型的杆状病毒或者是人工改造过的杆状病毒来感染相应的细胞，来是病毒和质粒在昆虫细胞体内发生重组，获得目的基因，并且最终表达于病毒子的表面，所以成为表面展示系统。

主要是因为原核和真核表达系统所需的表达元件不同。

比如说启动子，终止子在两种表达系统中是不一样的。

带有真核表达元件的是真核载体，能在真核生物内表达；
带有原核表达元件的是原核载体，能在原核生物内表达。

两者都具有的为穿梭载体。

1)真核表达载体和原核表达载体就是能在真核生物或原核生物中表达的载体,它们一般都带有能在真核生物或原核生物中表达的必需表达元件;
2)真核表达和原核表达的目的都是为了能够大量获得自己所需要的目的基因的表达产物,最好有生物活性,以便下一步的实验需要.
3)原核表达载体一般只能在原核生物中表达外源基因,但有些穿梭载体可以分别在真核和原核生物中表达它们的表达元件.

原核载体可以将真核基因表达，但是表达出来的蛋白是没有活性的，因为缺少翻译后修饰系统。。。真核的表达载体呢 由于比较大 不适合大量快速扩增，所以要在其载体上构建可以在原核生物 如大肠杆菌中复制的所需的复制原件 。。。。综上 在应用的时候 要构建 穿梭质粒 可以穿梭于 原核和 真核 呵呵 还有就是 原核表达载体的基本元件和真核的有不同的地方 。。。。。总觉得不够正确答案 。。。。。有些人缘的蛋白在原核里没有蛋白翻译后修饰，表达后没有活性，这时候就得在真核里表......

主要是因为原核和真核表达系统所需的表达元件不同。

比如说启动子，终止子在两种表达系统中是不一样的。
带有真核表达元件的是真核载体，能在真核生物内表达；
带有原核表达元件的是原核载体，能在原核生物内表达。

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海宁市18335811828： 真核表达载体和原核表达载体的区别 - ？
笪刮银参： 主要是因为原核和真核表达系统所需的表达元件不同. 比如说启动子,终止子在两种表达系统中是不一样的. 带有真核表达元件的是真核载体,能在真核生物内表达; 带有原核表达元件的是原核载体,能在原核生物内表达. 两者都具有的为穿梭载体. 1)真核表达载体和原核表达载体就是能在真核生物或原核生物中表达的载体,它们一般都带有能在真核生物或原核生物中表达的必需表达元件; 2)真核表达和原核表达的目的都是为了能够大量获得自己所需要的目的基因的表达产物,最好有生物活性,以便下一步的实验需要. 3)原核表达载体一般只能在原核生物中表达外源基因,但有些穿梭载体可以分别在真核和原核生物中表达它们的表达元件.

海宁市18335811828： 真核表达载体的特点,原核表达载体的特点 - ？
笪刮银参：[答案] 原核表达一般周期短,但蛋白的活性不能确定 真核表达经过糖基化,磷酸化,和目的蛋白相似性高,周期要长,往往有的还有养细胞

海宁市18335811828： 真核细胞表达和原核细胞表达有什么不同?他们表达产生的活性蛋白有什么不同?希望能够详细一点解答! - ？
笪刮银参： 首先得从细胞的结构说起:真核细胞具有各种胞内细胞器,而原核细胞却除核糖体之外不存在其他细胞器.这与基因的表达是密不可分的. 真核细胞的基因是有外显子和内含子组成的,而原核细胞却无此之分.在细胞内DNA进行转录是都是从启动子开始,按照碱基互补配对原则依次进行.只是翻译产物会有所不同,真核细胞的翻译初产物,需要进行进一步的加工修剪,这就用到了内质网和高尔基体,通过细胞器的加工可以将内含子的翻译产物去掉.而原核细胞就简单的多了,只要按部就班的来就行,不需要修饰. 鉴于两者的不同,在做基因工程的时候原核细胞的DNA一般可以通用,而真核细胞DNA则必须进行修饰.

海宁市18335811828： 真核表达系统与真核表达载体的区别 - ？
笪刮银参：[答案] 真核表达系统主要是昆虫表达系统,以大量纯化蛋白为目的,同原核表达系统相对应. 真核表达载体不以大量纯化蛋白为目的,主要为了在某些细胞系中表达该基因并研究其功能.

海宁市18335811828： 原核基因表达产物和真核基因表达产物的差异 - ？
笪刮银参：[答案] 由于原核生物基因组内不含内含子的特点,当用原核生物进行原核基因的表达时,发生转录的RNA不会被剪切,翻译后的蛋白质同母体中的蛋白质大体一致;但是用原核生物表达真核生物的目的基因,由于原核生物(比方说大肠杆菌...

海宁市18335811828： 有没有什么质粒既能在细菌表达又能在细胞表达 - ？
笪刮银参： 所有的质粒都是在细菌(原核)中构建和扩增的,但要在真核细胞中表达需要真核表达载体,要在原核细胞中表达需要原核表达载体.这两种载体主要的区别是启动子和polyA加尾信号的不同,一个适合在原核细胞中表达,一个适合在真核细胞...

海宁市18335811828： 载体构建时,如何区分质粒是真核表达还是原核表达,二者的启动子分别有哪些? - ？
笪刮银参： 这个做你就有点盲目了,我觉得你应该先确定你要原核表达,还是真和表达,确定后,在选择质粒.正如你所说载体是可以构建的,所以质粒作为载体,其启动子也是可以构建的,,现在实验室往往自己构建所需要的载体进行表达,就是我需要什么样的质粒,我就构建什么样的质粒. 明白哇.质粒的启动子不同之处在于原核和真核表达体系的不同,他们是特异针对不同的表达方式去构建的,有好多呢

海宁市18335811828： 原核基因表达产物和真核基因表达产物的差异 - ？
笪刮银参： 由于原核生物基因组内不含内含子的特点,当用原核生物进行原核基因的表达时,发生转录的RNA不会被剪切,翻译后的蛋白质同母体中的蛋白质大体一致;但是用原核生物表达真核生物的目的基因,由于原核生物(比方说大肠杆菌)不具备真核生物中的折叠酶,就面临着蛋白无法正确折叠装配的问题,翻译后的蛋白可能就没有活性,此时就应选择真核生物(如酵母)进行基因的表达.希望我的解释对你有用.

海宁市18335811828： 原核生物和真核生物基因表达体系有什么差别? - ？
笪刮银参： 原核基因一般多个成簇排列,共用一个启动子,翻译出几个不同的多肽分子; 真核基因大多单独存在,各有启动子,一般一条成熟的mRNA分子只能翻译出一种多肽分子.原核的调控主要是受环境条件和营养状况的影响.环境条件主要是通过调控转录,开关某些基因的表达、改变其代谢方式来适应环境条件的变化(主要是其中的营养水平的变化). 对于真核的来说,激素水平、发育阶段、空间位置等都是基因表达调控的主要受点,营养和环境的影响反而是次要的了.也就是说,原核的更容易受·外界影响·,更直接;而真核的更加有序、程序化,更多地受·内在影响·.粗略的就记得这么多,希望能帮到你.

海宁市18335811828： 比较原核生物基因表达和真核生物表达调控的异同点 - ？
笪刮银参：[答案] 原核生物没有内含子,只有外显子.原核没有重复基因是连续基因. 真核生物既有内含子又有外显子,有重复基因,非连续的基因