G418筛选后如何确保得到遗传稳定且强表达目的蛋白的细胞克隆？
在常规的4周筛选过程中，阳性克隆通常表现出较好的稳定性。然而，如果外源基因未能成功整合到细胞的基因组内，目标基因可能会丢失，这无疑增加了筛选的复杂性。由于整合的概率低且随机，表达目的蛋白的量会因为这种随机性而产生显著差异。随着培养时间的推移，那些失去外源基因和表达能力较弱的细胞会逐渐占据优势，而强表达目标蛋白的细胞会逐渐减少。因此，进行多次筛选是必不可少的步骤，以寻找遗传稳定且高效分泌目标蛋白的细胞克隆。
产品详情：
- 规格：1g原装
- 货号：1758-1811
- 价格：￥510.00
- 分类：抗生素
- 制造商：INALCO
产品名称：G418 Sulfate
特性：
- CAS号：108321-42-2
- 分子式：C20H40N4O10.2H2SO4
- 分子量：692.7
- 外观：白色或乳白色粉末
- 纯度：>700ug/mg
- pH范围：5.0-7.0（0.1% in H2O）
- 溶解性：清澈溶液（100mg/ml in H2O）
- 储存条件：4℃保存，有效期2年
G418 Sulfate是一种氨基糖苷类抗生素，与庆大霉素相似，主要作用于细菌、酵母、原生动物、高等植物和哺乳动物的原核或真核细胞，通过抑制蛋白合成达到筛选目的。它在转化了含有抗新霉素基因质粒的真核细胞筛选中具有广泛应用。
扩展资料
G418是一种氨基糖苷类抗生素 ,在分子遗传试验中,是稳定转染最常用的抗性筛选试剂。它通过抑制转座子Tn601，Tn5 的基因,干扰核糖体功能而阻断蛋白质合成,对原核和真核等细胞产生毒素 ,包括细菌、酵母、植物和哺乳动物细胞 ,也包括原生动物和蠕虫。当neo基因被整合进真核细胞DNA后 ,则能启动neo基因编码的序列转录为mRNA ,从而获得抗性产物氨基糖苷磷酸转移酶的高效表达 ,使细胞获得抗性而能在含有G418的选择性培养基中生长。G418的这一选择特性 ,已在基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面得以广泛应用。
计算机辅助药物设计的基本原理是什么?
计算机辅助药物设计是应用量子力学、分子动力学、构效关系等基础理论数据研究药物对酶、受体等的作用的药效模型,从而达到药物设计之目的。 计算机辅助药物设计的方法始于1980年代早期。当今,随着人类基因组计划的完成、蛋白组学的迅猛发展,以及大量与人类疾病相关基因的发现,药物作用的靶标分子急剧增加;同时,在计算机技术...
3.纤维素难以溶解和熔融的原因是什么?
比如说,传统的玻璃切割和玻璃弯曲技术很难造出微小镜片,因此,手机摄像头的镜片为了对焦准确而堆叠起来后,让手机难以继续轻薄化。另外,显微镜等高级光学工具也受到了这种困扰。工程师们发现了一种用金属取代玻璃,制造光学仪器的神奇方法。这种技术需要用到极薄的金属板,厚度小于1微米,在它的表面,工程师用纳米级别的工艺...
现在买什么股票好
按现价613元计算,2014年动态市盈率1916-2189倍(公司预测2014年每股收益028-032元,同比增长15-35%),2014年动态市净率147-148倍(2014年每股净资产414-418元),除大股东外实际流通345亿股,市值2115亿,堪称小市值绩优白马股。拆迁货币补偿和火灾保险理赔(原提的损失款项大,实际损失只有582万元)及出口退税力度加大,同时...
国家生态工业示范园区的规划编制
3. 建设目标确定:针对示范区建设的指标体系(见后文)中各类指标,提出循环经济建设的总体目标和具体目标,目标应尽可能量化和易于考核。4. 方案设计:包括总体框架设计、产业发展规划(包括生态工业、生态农业、循环型服务业、循环再生产业等)、城市基础设施建设规划、生态景观建设规划、重点实施项目筛选、项目详细规划、法律...
吉尼斯世界记录 世界之最 说的越多越好
美国佛罗里达州"杰克森维尔"职业男子篮球明星马丁,在1975年2月28日的一次投篮表演中站在罚球线后连续投进1740个球;1977年6月25日他又站在罚球线后,连续投进了2036个球,创造了世界上连续投球最准的记录。投篮命中率最高的球员 美国加利福尼亚州神投手纽曼,在1975年5月31日到6月1日的24小时内,进行罚球表演....
【100分】在线等!!! 急求一篇关于【传感器的论文】3000字
其中I为通过导线的电流,B为导线通电流后产生的磁场,VH为霍尔器件在磁场B中产生的霍尔电压、当选用适当比例系数时,可以表示为等式。霍尔传感器就是根据这种工作原理制成的。 二 霍尔传感器的应用 1 霍尔接近传感器和接近开关 在霍尔器件背后偏置一块永久磁体,并将它们和相应的处理电路装在一个壳体内,做成一个探头,...
2011届江苏省美术生考省内本科文化要多少?
参考江苏近两年美术高考形势，你的美术高考分190分，据我分析，不出意外过今年公办本科线应该不成问题，但如果你要想上到公办本科，你的文化不但要过线，而且还要考的相对高些，方能上到公办本科类学校，因为美术生在高考后填报学校是按综合分填报，即综合分=美术省统考分+文化高考分。至于你想上省内...
我是2011界江苏省美术,我美术201,文化估计这次能考270分,请问我还能...
参考近两年江苏省教育考试院公布的公办本科、民办及独立院校本科招生录取最低控制分数线，你的美术201分、文化预估270分成绩，据我分析不出意外过今年本科最低控制分数线应该不成问题，你的综合分471分（美术201分+文化预估270分）是否能上到公办本科，还要看今年文化的高考形势如何？不过你的成绩参照往年...
江苏2011美术考生,专业联考189,文化大概240,能走省内的最好的学校是什 ...
中国矿业大学徐海学院 418 徐州师范大学科文学院 419 淮阴师范学院文通学院 417 淮阴工学院江淮学院 417 扬州大学广陵学院 424 南京理工大学泰州科技学院 413 上海建桥学院 448 江西蓝天学院 442 南昌理工学院 446 北京城市学院 428 吉林动画学院 406 华中师范大学汉口分校 390 海口经济学院 414 浙江师范...
我是江苏的艺术生 美术统考考了231 文化大概在250到280左右 请问最好...
山东工艺不错的，江苏的美术高考是按公办本科、民办及独立院校本科、专科（高职）进行招生录取的，没有本一、本二之分。1、如果你想用省统考成绩上美术类本科，你的美术、文化分都必须达到当年江苏省教育考试院公布的本科招生录取最低控制分数线，即你所问的双达线，方能填报本科类院校。2010年江苏省...
局屠洁阴： G418是一种氨基糖苷类抗生素 ,这种氨基糖类抗生素的结构和新霉素、庆大霉素、卡那霉素相似,在分子遗传试验中,是稳定转染最常用的抗性筛选试剂.它通过抑制转座子Tn601,Tn5的基因,干扰核糖体功能而阻断蛋白质合成,对原核和真核等细胞产生毒素 ,包括细菌、酵母、植物和哺乳动物细胞 ,也包括原生动物和蠕虫.当neo基因被整合进真核细胞DNA后 ,则能启动neo基因编码的序列转录为mRNA ,从而获得抗性产物氨基糖苷磷酸转移酶的高效表达 ,使细胞获得抗性而能在含有G418的选择性培养基中生长.G418的这一选择特性 ,已在基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面得以广泛应用.
新浦区17121057492： G418原代细胞如何筛选 - ？
局屠洁阴： 博凌科为解答:分析转化的功能和表达需要DNA稳定转染至宿主细胞染色体.外源基因进入细胞后,部分能够通过细胞质进入细胞核内,根据细胞类型,至多80%的进入 核内的外源DNA得到瞬时表达.极少数情况下,进入细胞的外源DNA通过...
新浦区17121057492： 质粒转入细胞后使用抗生素G418怎样检测到阳性克隆 - ？
局屠洁阴： G418通过干扰核糖体的功能而阻断细胞的蛋白合成,阳性克隆中因含有抗性基因可以存活.由于基因转染到细胞内之后要一段时间才能表达出蛋白质,所以筛选不能太早 一般要在转染24小时之后才开始加G418筛选.随着细胞的代谢G418的浓度和活性都会下降,所以每3~5天都要更换一次含有G418的筛选液,这时药物浓度可以降至200ug/ml 加药后,在高倍镜下,阳性克隆和阴性克隆很容易辨认,在阳性克隆下用记号笔做个标记.然后刮除阴性克隆,消化阳性克隆后继续筛选培养,最后再用有限稀释法把阳性克隆在96孔板中筛选 一般经过4周左右的筛选,得到的阳性克隆才都比较稳定
新浦区17121057492： 什么是G418?有什么用途? - ？
局屠洁阴： G418是一种氨基糖苷类抗生素 ,在分子遗传试验中,是稳定转染最常用的抗性筛选试剂.展开全部 G418通过干扰核糖体的功能而阻断细胞的蛋白合成
新浦区17121057492： kan抗性的载体能不能用G418做稳定筛选 - ？
局屠洁阴： G418的选择细胞原理:由于每种细胞对G418的敏感性不同,而且不同的厂家生产的相同浓度的G418的活性不尽相同,所以在筛选之前,一定要确定G418的最佳筛选浓度.具体如下:将细胞稀释到1000个细胞/mL,在100ug/mL~1mg/mL的G...
新浦区17121057492： 请问质粒中loxp - kanmx4 - loxp是做神马用的 - ？
局屠洁阴： 这个是用于稳定转基因筛选用的一个结构,其中KanMX4是标记基因,具有抵抗筛选条件的功能(一般是G418抗生素).当获得稳定的转基因胞胞后,再瞬转一个Cre基因进行,使loxP-loxP重组,切掉KanMX4这个基因,避免产生多余的序列.
新浦区17121057492： NIH3T3细胞转染后筛选 - ？
局屠洁阴： 一定要做浓度筛选实验.由于生产厂家的不同,生产批次的不同,G418的含量会有较大的差别.虽然NIH3T3这个细胞做转染比较容易的,但是做筛选浓度试验还是非常必要的,我们实验室在做瞬转时RFect-siRNA,在24孔板内设置siRNA梯度实验,每组梯度设置至少2个复孔,转染试剂2-3ul就够了
新浦区17121057492： 【及时求助】请教肝癌SMMC - 7721细胞的稳定转染,采用G418筛选的浓度 - ？
局屠洁阴：博凌科为解答:由于每种细胞对G418的敏感性不同,而且不同的厂家生产的相同浓度的G418的活性不尽相同,所以在筛选之前,一定要确定G418的最佳筛选浓度.尽管文献上说特性明确的细胞系G418的最佳用量还是稳定的,但是由于实验室...
新浦区17121057492： 各种质粒转染各种细胞筛选稳定细胞系都用G418吗 - ？
局屠洁阴： G418是常用的一种,还有很多药物可以用来筛选稳定株,比如puro等,就看你的细胞或质粒带什么抗性了.
新浦区17121057492： 染色体遗传稳定性怎么检测? - ？
局屠洁阴： 染色体遗传稳定性怎么界定? 如果是单纯的是研究某一条染色体的稳定性 我感觉是看端粒,如果端粒过短说明染色体已经很不稳定了,有很大的发生突变的potential 如果是在整个细胞的环境下可以看各种修复机制的相关基因的完整程度还有表达水平等等当然 如果可以经过多代培养 得到各代的mRNA做个microarray应该是现在比较流行的方法吧 或者直接全基因组测序(NGS)然后比对 也很方便就能看出遗传稳定性了如果是只对特定基因感兴趣就更简单了 繁殖几代 pcr测序 然后比对就行了
