gapdh内参+细菌

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壤东18832922765问： Western blot 内参跑不齐怎么调整 - ？
巴林左旗阿莫回答： 第一,应该确认每个样品表达GAPDH的量一样,虽然是持家基因,本人觉得不同细菌可能表达量不一样,造成信号强弱不一样.可以通过考马斯亮蓝染色来确定上样量的差异,调整上样量一样再检测GAPDH. 第二,内参跑不齐.一般是跑胶...

壤东18832922765问： Western Blot为什么必须要用内参 - ？
巴林左旗阿莫回答： 内参作为一个参考物选用一个表达量相对稳定的蛋白,如actin,GAPDH等.不同方法处理细胞时内参的表达量不变,目的蛋白有可能会有变化.western中各泳道的内参的条带一样,那说明蛋白浓度一样.总蛋白浓度一样,目的蛋白条带宽度差异才能体现出目的蛋白表达量的差别.

壤东18832922765问： 用大肠杆菌跑western用什么做内参 - ？
巴林左旗阿莫回答： 百度了一下,了解了解:大肠杆菌gapA基因转录翻译的GAPDH蛋白的高度保守性,为制备大肠杆菌专用内参蛋白抗体提供可能,

壤东18832922765问： 做RT - PCR内参的作用是什么?应该如何选择管家基因啊? - ？
巴林左旗阿莫回答： 内参的选择:普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下 它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差.PCR时,每个标本都要做对应的内参,...

壤东18832922765问： western blot 的一抗是内参抗体吗 - ？
巴林左旗阿莫回答： 内参抗体是个什么鬼? 一抗就是你要检测的目的抗体. GAPDH作为内参的话,也是要孵它的一抗

壤东18832922765问： GADPH是什么 - ？
巴林左旗阿莫回答： GAPDH是参与糖酵解的一种关键酶,由4个30-40kDa的亚基组成,分子量146kDa,检测条带大约在36kDa.GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达,广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参.因为GAPDH 作为管家基因在同种细胞或者...

壤东18832922765问： WB试验之如何选择内参抗体 - ？
巴林左旗阿莫回答： 你选择的目的蛋白位于什么地方~细胞核 胞质 线粒体~你要观察的是目的蛋白在哪一部分的含量~选择相应的内参~全细胞比如GAPDH HSP90AA1等~还有内参分子量要与目的蛋白分子量有一定差距~避免分不开~当然你可以选择不同种属的抗体来避免这个问题~

壤东18832922765问： 做RT - PCR的时候为什么要设置标准反应体系和管家基因反应体系? - ？
巴林左旗阿莫回答： 在做QRT-PCR时,一定要有内参,即在PCR时,每个标本都要做对应的内参,而且每次都是看家基因,一般用bate-actin,有时也用GAPDH.内参的选择:普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下.它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差,跑出的条带要进行灰度分析.用目的基因的积分光密度比上内参的光密度就是你这个基因实际表达的量.希望对你有所帮助.

壤东18832922765问： 看家基因GApDHmRNA引物是什么东西?有什么用?成分 - ？
巴林左旗阿莫回答： 有,GAPDH是三磷酸甘油醛脱氢酶,是糖酵解途径中的关键酶.糖酵解途径就是将葡萄糖转化为ATP的过程,负责为生物体提供能量,几乎所有的生物都有该途径.因此GAPDH常常被用来作为内参基因,另外还有β-actin、Ubqutin等由于其广泛存在,也可作为内参基因.

壤东18832922765问： 我想做PCR内参选beta - actin还是GAPDH好 - ？
巴林左旗阿莫回答： 常用的蛋白内参有 beta actin 和 GAPDH,它们是有区别的 GAPDH分子量为146KD,检测条带大约在36kD,beta actin分子量为42KD.一般选择内参与要检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上另外,细胞总蛋白的Western Blot的内参蛋白一般用 beta actin ,膜蛋白的Western Blot一般用GAPDH为内参

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