蓝白斑筛选出现蓝斑的原因
α互补筛选后,很多白斑,为什么说不好?
根据蓝白斑筛选的定义，蓝斑表示无目的基因的空载体质粒成功转化大肠杆菌，其数量体现的是质粒穿透细胞膜的能力，白斑除了表示带有目的基因的重组载体的成功转化以外，还表示质粒根本就没进入大肠杆菌细胞。如果白斑很多，蓝斑相当少说明很多质粒都没进入到大肠杆菌细胞，白斑里面很多为假阳性。
抗生素的蓝白斑插入失活筛选的原理。
可使菌落或噬菌斑呈兰色 你的空载提转进去的话，IPTG诱导lacZ' 表达α肽，互补体内缺陷的酶，然后可降解底物X-gal，产生蓝斑；如果你则载体的多克隆位点插入了片段，导致编码的α肽错误，或者不能编码α肽，也就不能产生正常功能的酶，无法分解X-gal，所以长白斑。
怎么通过标记基因挑选含有目的基因的质粒质粒中本来
如果是做基因克隆的话，可以直接用蓝（兰）白斑筛选。一般的克隆载体上有lac z基因，在iptg和x-gal作用下能产生蓝斑，而此基因中间有多克隆位点，当你的片段基因插入时，把这个基因给破坏了，不能产生兰斑，而只是产生白斑。这样就区别开来，象puc18\/19，pbr322等最常用的质粒都有lac z基因。
关于蓝白斑筛选的遇到的问题
首先X-gal要避光保存，以免失效；其次培养时间确定够吗？我们前两天做的，也全是白斑，又培养了四个小时，总共20h,就有蓝斑出现了（我用的是大肠杆菌）
大肠杆菌BL21可用于蓝白斑筛选吗
在进行蓝白斑筛选的时候，出现了两个奇怪现象：一、我的空白载体转的大肠杆菌不但出现了蓝斑而且还有白斑。二、连有目的基因的载体转的大肠杆菌出现了好多蓝色小点点，看起来不像是细菌。不知道是什么原因，我的大肠杆菌是做过氨苄对照测试的，应该没有杂菌的。
质粒dna的转化实验结果培养基上出现大量蓝斑和白斑分别是什么?为什么...
你用的是蓝白斑筛选，白斑为插入目的基因片段的转化子，蓝斑则没有，挑取白色单菌落摇菌进行pcr检测验证。百度蓝白斑筛选。
如何提高杆状病毒的重组效率蓝白斑筛选
当培养液中加入IPTG，IPTG可以和乳糖操纵子下游的的阻遏蛋白结合，使阻遏蛋白从DNA上脱离，激活半乳糖苷酶的表达。因而重组质粒可以利用x-gal而感受态不能。这个是蓝白斑筛选的主要原理。结果中白斑表示重组质粒表达的菌体，蓝斑表示未表达。至于氨苄筛选，通常不会利用氨苄抗性进行筛选，因为感受态中是否有...
为什么dna重组只筛选出白菌落
你是用蓝白斑筛选体系吗？一般白斑表示有目的基因插入lacZ，破坏其功能，而不能正常合成酶降解底物，从而不出现蓝斑。因此重组的载体一般LacZ的活性已被破坏，产生白斑，但是有时你插入的目的基因短，使得LacZ基因没有完全破坏的话，可能会出现淡蓝的斑。
请教感受态细胞的基因型解释
Trans 1-T1 Phage Resistant 感受态细胞是目前生长速度最快的感受态细胞，在氨苄青霉素平板上，8-9 h 可见克隆；用于蓝、白斑筛选，12 h 可见蓝斑；将过夜培养的单克隆在2 ml 的LB 培养基中培养4-5 h 即可进行小量质粒提取；适用于高效的DNA 克隆和质粒扩增，减少克隆DNA 同源重组的发生，提高质粒...
PCR检验转化子出现假阳性的原因
1.蓝白斑筛选中，白斑是插入外源片段的 2.菌落pcr假阳性的产生有很多原因：a引物设计特异性不好 b挑取菌落的时候非单克隆 c可能沾到未分解的外源片段 （菌液pcr要比菌落pcr靠谱一些）
开封县紫龙回答：[答案] 你用的是蓝白斑筛选,白斑为插入目的基因片段的转化子,蓝斑则没有,挑取白色单菌落摇菌进行pcr检测验证.百度蓝白斑筛选.
鲍心15358959043问： 蓝白斑筛选中的蓝斑是什么? 是载体自连产物吗? - ？
开封县紫龙回答： 载体上的是β-半乳糖苷酶基因(lacZ),他能使细菌表达β-半乳糖苷酶,该酶可以将X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-d-半乳糖)降解,产生显色底物,然后我们就能看到蓝色斑.
鲍心15358959043问： 空载T19转进感受态中,蓝白斑筛选为什么显示蓝色菌落?？
开封县紫龙回答： 空载的话不就是lacZ里面没有插入东西么... 仅仅是切开的载体,进入细胞后是可以自连的,那么lacZ不就又完整了
鲍心15358959043问： 关于蓝白斑筛选的遇到的问题 - ？
开封县紫龙回答： 首先X-gal要避光保存,以免失效;其次培养时间确定够吗?我们前两天做的,也全是白斑,又培养了四个小时,总共20h,就有蓝斑出现了(我用的是大肠杆菌)
鲍心15358959043问： 蓝白斑筛选 没有白斑 - ？
开封县紫龙回答： 可能自连比较严重,建议从新做连接转化
鲍心15358959043问： 蓝白斑筛选问题 - ？
开封县紫龙回答： 那么,那些带一点蓝色的白斑你有没有做菌液PCR呢?或者测序呢?我以前有见过带点蓝色的白斑,其实也是蓝斑.没有白斑的原因,要么是没连上,要么是没转化成功.从连接产物,到菌种都排查一下吧!
鲍心15358959043问： 蓝白斑筛选假阴性 - ？
开封县紫龙回答： 此类载体携带lacZ'基因,它编码β-半乳糖苷酶的N-末端(α-肽),并且处于可被安慰诱导物IPTG(异丙基硫代半乳糖苷,与乳糖结构类似但不能被β-半乳糖苷酶降解)诱导的启动子调控之下.质粒转化的宿主菌为LacZ△M15 基因型(含有编码...
鲍心15358959043问： 为什么dna重组只筛选出白菌落 - ？
开封县紫龙回答： 你是用蓝白斑筛选体系吗?一般白斑表示有目的基因插入lacZ,破坏其功能,而不能正常合成酶降解底物,从而不出现蓝斑.因此重组的载体一般LacZ的活性已被破坏,产生白斑,但是有时你插入的目的基因短,使得LacZ基因没有完全破坏的话,可能会出现淡蓝的斑.
鲍心15358959043问： 蓝白斑筛选的分子机制是什么 - ？
开封县紫龙回答： 在进行蓝白斑筛选的时候,出现了两个奇怪现象:一、我的空白载体转的大肠杆菌不但出现了蓝斑而且还有白斑.二、连有目的基因的载体转的大肠杆菌出现了好多蓝色小点点,看起来不像是细菌.不知道是什么原因,我的大肠杆菌是做过氨苄对照测试的,应该没有杂菌的.
鲍心15358959043问： 求助:蓝白斑筛选的白色菌再次转化成蓝色??????？
开封县紫龙回答： 同感,我也遇到同样的问题.将重组质粒转入JM109,鉴定阳性的质粒再转入BL21,结果全是蓝斑.
