PCR检验转化子出现假阳性的原因
因为你选择的引物不太合适，最好用一个载体上的通用引物加一条目的基因的特异引物做菌落PCR，这样会大大降低假阳性；如果你用目的基因本身引物做菌落PCR，挑菌时一定要小心不要沾到培养基（里面有大量的未连接的片段），然后PCR扩增的循环数要少（<25）,做好阴性对照（在平板上没有斑的地方挑一下），跑出亮亮的目的片段才是真的阳性克隆
如果转化成功的话，菌落里的菌就含有你克隆的质粒载体了，用枪头直接碰一下，然后作为PCR模板，就可以进行PCR扩增了。但是菌落PCR鉴定的假阳性率其实也不低，所以建议你挑取菌落扩培之后抽提质粒，进行酶切鉴定，这样比较准确，酶切鉴定确认好之后再去测序以确定没有碱基突变或缺失。
你说的T7通用引物是指载体上的T7 promtor引物吗？那只是一条引物啊，如果加上GBH下游引物的话，扩增出来的就是你连接进去的目的基因的长度了。
2.菌落pcr假阳性的产生有很多原因：
a引物设计特异性不好
b挑取菌落的时候非单克隆
c可能沾到未分解的外源片段
（菌液pcr要比菌落pcr靠谱一些）
你挑的白斑，检测阳性，你凭什么说它是假阳性。
提醒你注意一下，白斑是有插入片段的，蓝斑是空载体。
DR和CR有什么区别
一、成像原理 - DR（直接转换式数字X线成像）采用X线直接转换技术，利用平板探测器（如CCD、非晶硅、非晶硒等）接收X光，并将X线光子直接转换为数字化电流。- CR（间接转换式数字X线成像）使用图像板作为X光检测器，图像板在受到X线照射后发出荧光，将X线能量损失近一半的信号以潜像形式储存。扫描仪读取...
CR网站转化率(conversion rate)
网站转化率（conversion rate），实质上是衡量用户在访问过程中完成特定目标行为的比例。这个比率涵盖了多种用户行为，如登录、注册、订阅、下载和购买等，因此，它是一个广泛的概念。它描绘了访问者在访问网站时，转变为成为网站活跃用户的可能性，即访客到用户的转化过程。以登录为例，如果每次访问中有10...
CR的成像原理是什么?
临床医学影响技术CR系统成像过程：Ｘ线机产生射线穿过人体→产生信息→在片盒里的IP板上记录→到明室。在ID station录入患者信息→到扫描器（模数转换器 ADC）扫描信息（IP板本身的信息被读取后，进入消去装置中，原信息被消除，最后又回到片盒中，以备下次再用）→由计算机自动完成信息处理→最后在主机...
简述T细胞功能测定的常用方法
1.体液免疫测定主要利用抗原与相应抗体在体外发生特异性结合,并在一些辅助因子参与下出现反应,从而用...如结核菌素)或非特异性有丝分裂原(如植物血凝素,PHA)等一起孵育,T细胞即被激活而向淋巴母细胞转化...抗体制备常用的检测方法是51Cr(铬)释放法,将51Cr-Na2CrO4盐水溶液与靶细胞(不同的细胞需不同的靶...
Cr(Ⅲ)在什么样的情况下会转化成Cr(Ⅵ)?
六价铬[Cr(Ⅵ)]可以被有机物还原成三价铬[Cr(Ⅲ)]，但请放心，人体内的三价铬一般不会被氧化成六价铬的，因为三价铬氧化成六价铬需要强氧化剂
医学影像学中的CR、DR是什么意思?
它使用数字化影像，方便接入PACS系统，可结合计算机技术处理图像，提高影像质量。CR价格相对低廉，一套CR即可实现全院X线设备的数字化。DR指在计算机控制下直接进行数字化X线摄影的一种新技术，即采非晶硅平板探测器把穿透人体的X线信息转化为数字信号，并由计算机重建图像及进行一系列的图像后处理。
怎样实现cr3+到cr(oh)42-到cro42-到cr2o72-到cro5到cr3+的转化
第一步加强碱，第二步加过氧化氢并加热，第三步加适量高锰酸钾，第四步加过量高锰酸钾
CR的成像原理是什么
CR的构成主要包括两大部分：成像板与信息读出装置。成像板是X线影像的接受体，准确的说它是一个影像信息的采集与信息形成的转换部件。其外观和结构形式如同X线摄影用的增感屏，是由保护层、成像层、支持层和背衬层复合而成的一块薄板。成像层中含有微量二价陏离子的氟卤化钡晶体，是记录影像的核心物资...
CR和DR有什么不同?(转)
DR，即直接数字化X射线摄影系统，由电子暗盒、扫描控制器、系统控制器、影像监示器等组成，它将X线光子通过电子暗盒转换为数字化图像，是广义上的直接数字化X线摄影。狭义上的直接数字化摄影即DDR，通常指采用平板探测器的影像直接转换技术的数字放射摄影，是真正意义上的直接数字化X射线摄影系统。CR与DR的...
dr和cr是什么意思drcr是什么意思
随着数字化技术的进步，医学影像领域也迎来了革新，出现了诸如DR（数字化放射摄影）和CR（计算机放射摄影）等新型影像设备。这两种设备都是基于传统X射线机通过数字化技术进行改良而来。首先，DR采用的是一种X线直接转换技术，它由数字影像采集板、专用滤线器BUCKY、数字图像获取控制系统、X线摄影系统和数字...
丁楠点舌：[答案] 因为你选择的引物不太合适,最好用一个载体上的通用引物加一条目的基因的特异引物做菌落PCR,这样会大大降低假阳性;如果你用目的基因本身引物做菌落PCR,挑菌时一定要小心不要沾到培养基(里面有大量的未连接的片段),然后PCR扩...
木垒哈萨克自治县18474232694： 菌液PCR的假阳性是什么原因造成的?菌液PCR的假阳性是什么原因 ？
丁楠点舌： 二是空气中的小片段核酸污染,这些小片段比靶序列短,但有一定的同源性
木垒哈萨克自治县18474232694： PCR技术中出现的假阳性和假阴性是啥了?？
丁楠点舌： 假阳性是指不含目的片段的模板,经过PCR,批出了与目的模板bp数类似的片段,给人一种含有目的片段的假象.说明是污染造成扩增的. 假阴性是说,你的样品中有目的片段,但由于实验条件不合适,没有P出目的条带,这种情况让人误以为是阴性,所以叫假阴性.说明反应体系中存在抑制物.
木垒哈萨克自治县18474232694： 做重组质粒时,转化提质粒后PCR验证为阳性,但是酶切却切不出来! - ？
丁楠点舌： pcr验证时常呈假阳性,以酶切验证为准.或者你可以送去测序.
木垒哈萨克自治县18474232694： PCR出现假阴性假阳性和PCR仪的温度控制精度有多大关系. - ？
丁楠点舌： 如果引物设计的特异性好,模板没有什么特殊结构,基本上温度上有0.5C~1C左右的变化,在结果上基本没有反应.只有引物有非特异结合,或者是模板结构难于变性扩增,或者是模板质量不好,温度的变化才有可能造成变化.假阳性更多是来...
木垒哈萨克自治县18474232694： PCR没P出条带 很迷茫 - ？
丁楠点舌： 情况比较复杂,你得确认1.你的RNA没问题,没有被降解,cDNA合成没问题.可以用该材料的actin引物做PCR检测试试.2你P的基因如果是已知序列,那么设计引物应该很简单,如果是未知的,那么兼并引物没P出东西来是有可能的.若是根据已知序列设计的引物而没有P出产物那就是你PCR体系或者Tm有问题了,试试TOUCHDOWN程序.若是兼并引物,采用touchdown程序,没有P出来的话,要么是引物不行,要么是你的材料取材时间不对,你要扩增的基因没有表达出来.问题比较多,一个一个排除,确保你实验的科学性.祝实验成功.
木垒哈萨克自治县18474232694： PCR假阴性的原因是什么? - ？
丁楠点舌： 造成PCR假阴性的原因是复杂的,也是多样的.主要有: 1.PCR仪本身的质量问题.PCR仪设计原理上的差异和经常出现的质量问题(如:温控不准等)给临床带来了诸如非特异性扩增(假阳性)、扩增效率下降(假阴性)等问题. 2.离心机问...
木垒哈萨克自治县18474232694： 【求助】菌落PCR有目的条带与菌液PCR却什么都没有? - ？
丁楠点舌：[答案] 高手们好.最近做酶切连接转化,最后做鉴定时,以菌落为模板进行PCR时可以见到有目的条带;当把菌落接种到LB液扩菌后,以菌液为模板进行PCR时却什么东东都没有?请问会是什么原因啊?多多指教啊!建议重新以菌落为模板进行PCR检测,...
木垒哈萨克自治县18474232694： 菌落pcr假阳性 - ？
丁楠点舌： 78道应该是理想的结果,如果你放在mark两边的话,应该没有偏离.而12道,如果优化一下,比如不用菌落DNA而是提纯DNA的话,也许会有好的结果.条带两端上扬是因为你的上样浓度大了.可以稀释几倍试一下.
