关于蓝白斑筛选的遇到的问题
是不是培养时间太短了,所以分辨不清是蓝色或者是白色?
或者是被紫外灯照到,X-Gal被分解了?
蓝白斑筛选适用方面
蓝白斑筛选是一种在基因工程中常用的筛选方法,其核心是利用β-半乳糖苷酶缺陷型的宿主菌。这种菌株由于其染色体基因组中编码β-半乳糖苷酶的基因突变,导致无法自行产生具有生物活性的酶,无法使X-gal转化为蓝色物质。筛选过程中,关键的工具是带有lacz'基因的载体,它包含启动子、编码α肽链的区段和多...
蓝白斑筛选简介
蓝白斑筛选是一种在基因工程领域广泛应用的筛选技术,其主要目的是鉴别和选择经过基因改造的大肠杆菌。这种筛选方法依赖于大肠杆菌的天然特性。在野生型大肠杆菌中,存在一种名为β-半乳糖苷酶的酶。当这种酶遇到无色的化合物X-gal,也就是5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷时,会发生化学反应。酶...
关于蓝白斑筛选的遇到的问题
首先X-gal要避光保存,以免失效;其次培养时间确定够吗?我们前两天做的,也全是白斑,又培养了四个小时,总共20h,就有蓝斑出现了(我用的是大肠杆菌)
蓝白斑筛选问题!!
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蓝白斑筛选问题!!
当添加IPTG后,它会结合阻遏蛋白,使其从DNA上解离,激活半乳糖苷酶的表达,使得含有重组质粒的菌体能够利用x-gal,而感受态细胞则不能。因此,蓝白斑的结果中,白色区域代表了成功表达的重组质粒,蓝色则表示未表达。至于氨苄筛选,通常并不依赖于氨苄抗性,因为感受态细胞中氨苄抗性基因的存在不确定性,...
蓝白斑筛选问题
那么,那些带一点蓝色的白斑你有没有做菌液PCR呢?或者测序呢?我以前有见过带点蓝色的白斑,其实也是蓝斑。没有白斑的原因,要么是没连上,要么是没转化成功。从连接产物,到菌种都排查一下吧!
蓝白斑筛选的适用方面
设计适用于蓝白斑筛选的基因工程菌为β-半乳糖苷酶缺陷型菌株。这种宿主菌的染色体基因组中编码β-半乳糖苷酶的基因突变,造成其编码的β-半乳糖苷酶失去正常N段一个146个氨基酸的短肽(即α肽链),从而不具有生物活性,即无法作用于X-gal产生蓝色物质。用于蓝白斑筛选的载体具有一段称为lacz'的基因...
蓝白斑筛选,怎样使蓝斑快速显色
1、选择正确的斑点:在开始蓝白斑筛选之前,第一步就是选择正确的斑点,这些斑点会最大化图案细节,使其更加清晰。2、调整斑点大小:在确定斑点位置后,接下来就要调整斑点的大小,以使图案更加清楚可见。3、调整斑点强度:根据需要,可以调整斑点的强度,以突出图案中的重要信息。4、选择颜色模式:最后,...
蓝白斑筛选的问题
博凌科为-为你解答:蓝斑如果是阳性的也是可能的,是由于插入的片段没有影响locZ的读码框,所以虽然显示蓝斑但却是阳性的,另一种小的肯定是正常的无目的片段插入的空载体。证明的话直接PCR就可以了,使用引物特异性引物做PCR。
蓝白斑筛选过程中,T载体:DNA=1:4,DNA为PCR纯化产物,连接条件4度过夜过...
--蓝白斑筛选过程中,T载体:DNA=1:4,DNA为PCR纯化产物,--如果是摩尔比没什么问题。其实只要目的片段摩尔数高于载体就会有很好的结果。但是如果产物量太大,则会有不良的效果。根据你的问题 1:检测纯化产物。出了问题后纯化产物一定要走电泳查看,确认回收效率。2:连接的产物量不用太大。3000bp的T...
养背通乳:[答案] 首先X-gal要避光保存,以免失效;其次培养时间确定够吗?我们前两天做的,也全是白斑,又培养了四个小时,总共20h,就有蓝斑出现了(我用的是大肠杆菌)
武清区13585172077: 关于蓝白斑筛选的遇到的问题 - ?
养背通乳: 首先X-gal要避光保存,以免失效;其次培养时间确定够吗?我们前两天做的,也全是白斑,又培养了四个小时,总共20h,就有蓝斑出现了(我用的是大肠杆菌)
武清区13585172077: 蓝白斑筛选问题 - ?
养背通乳: 那么,那些带一点蓝色的白斑你有没有做菌液PCR呢?或者测序呢?我以前有见过带点蓝色的白斑,其实也是蓝斑.没有白斑的原因,要么是没连上,要么是没转化成功.从连接产物,到菌种都排查一下吧!
武清区13585172077: 做蓝白斑筛选为什么不长菌? - ?
养背通乳: 重新做感受态吧.之前都成功过的话八成就是感受态的问题了,要不就是你的载体有问题.
武清区13585172077: 请问蓝白斑筛选后的细菌PCR后仍有条带怎么办 - ?
养背通乳: 问题有多个方面,我列一下,需要你自己排查,毕竟我没有看到图片不好说:1、蓝白斑本身就有假阳性,看看你跑的没条带都是这样的吗?如果个别的出现杂带可能就是蓝白斑假阳性2、PCR退火温度是否合适,引物是否合适,如果既有目的条带又有杂带那么可能就需要从这个方面找原因了
武清区13585172077: t克隆时蓝白斑筛选实验为什么蓝斑做菌落pcr也能扩出来 - ?
养背通乳: --蓝白斑筛选过程中,T载体:DNA=1:4,DNA为PCR纯化产物,--如果是摩尔比没什么问题.其实只要目的片段摩尔数高于载体就会有很好的结果.但是如果产物量太大,则会有不良的效果. 根据你的问题 1:检测纯化产物.出了问题后纯化产物一定...
武清区13585172077: 基因克隆中蓝白斑筛选法筛选阳性克隆的原理. - ?
养背通乳: 蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法: 是根据载体的遗传特征筛选重组子,如α-互补、抗生素基因等.现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段,其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和前146个氨基酸的编码信息.在这...
武清区13585172077: 蓝白斑筛选结果相反是为什么 - ?
养背通乳: 这个好像是分子生物学课后习题嘛!前面那是是假阴性,由于插入目的片段太短,报道称有30%的假阴性,但为什么会有60bp的小片段,多数是实验过程中的污染,也有可能是基因组被酶切的小片段.后者是假阳性,即在载体与插入片段连接前,载体末端被核酸酶酶切掉一点,被轻微降解的载体然后自连接,被轻微降解的lacZ'基因就足以产生白色菌落了.
武清区13585172077: 蓝白斑筛选实验,结果都是白斑说明所有的细胞都插入基因成功了吗? - ?
养背通乳: 我觉得你更可能是培养基出问题了或者其他的蓝白斑筛选不可能所有的都是白斑的,连接效率没有那么高建议你再检查下自己的实验