流式细胞测凋亡怎么调补偿
流式法检测细胞凋亡时怎样体调补偿
流式细胞检测凋亡的原理和染色方法有好多种呢，有的只要单色，不需要设置补偿。只有使用PI+Anexin V 这种双色实验才需要。不过这个实验特异性很差，不建议使用，因为健康细胞结果刮取或者胰酶消化后很容易出现假阳性。调节补偿，和其他多色流式的方法一样，需要一管无染色，一管肯定有PI阳性的，一管肯定...
如何用流式检测细胞凋亡
Annexin V和PI双染法是流式检测细胞凋亡的经典方法 ，它是基于凋亡的早期细胞膜上的磷脂酰丝氨酸（phosphotidylserine, PS）从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面这一原理来实现的（如下图3）。图3：凋亡早期 PS从细胞膜的内侧外翻 该方法简便、快速、准确区分活细胞、凋亡细胞和坏死细胞，具体原理如下：...
求流式细胞术做凋亡的操作步骤和注意事项
2 3000rpm离心细胞30妙，吸弃上清，用1mlPBS重悬细胞，再离心洗涤细胞一次，吸弃上清，沉淀细胞用100ul 1mg\/ml RNase A悬浮，37摄氏度30min，再加入400ul 50ug\/ml PI，置暗处10min后上机检测。3 结果分析：流式报告中可给出G0\/G1、S、G2\/M各期细胞的百分比，凋亡百分比和细胞倍体。
如何用流式细胞仪检测细胞凋亡?
在采用Annixin V方法检测凋亡细胞时，要特别强调一点：该方法适用于悬浮生长的细胞，如：淋巴细胞等细胞的检测。对于贴壁生长的细胞，由于在胰酶等消化处理过程中会造成细胞膜的损伤，会造成较高的假阳性，从而影响检测结果。尽管目前，包括国外也有一些单位采用该方法检测贴壁生长的细胞。我不推荐用该方法检...
请教ANNEXIN V-PI法检测凋亡的原理和相关试剂盒使用步骤
有关Annexin -PI凋亡细胞的检测使用的是BIODAI的较多，具体的步骤如下：1) 悬浮细胞：300g，4℃，离心5min，收集细胞。贴壁细胞：用不含EDTA的胰酶消化后，300g，4℃，离心5min，收集细胞。胰酶消化时间不宜过长(见注意事项)，以防引起假阳性。2) 用预冷的PBS洗涤细胞两次，每次均在300g，...
如何用流式检测小鼠外周血中T细胞的凋亡
4℃)固定12小时以上，用PBS洗去乙醇，加入0.5ml柠檬酸-磷酸缓冲液(pH 7.8)室温作用5分钟，离心后以PBS重悬细胞，加入 RNaseA (终浓度60μg\/ml)37℃作用30分钟，再加入碘化乙锭(PI，终浓度50μg\/ml)4℃暗染30分钟，以染细胞内总DNA，用流式细胞仪分析正常细胞和凋亡细胞，计算凋亡率。
怎样合理地进行ANNEXIN V-PI凋亡检测?
一般每组实验一次可以先做三个复孔，上机前5分钟加PI，最好在半小时内检测完毕。这时可以先分析下三个复孔的差异。等待摸索的实验条件成熟后，每组实验一次可以做6~8个复孔，然后做统计学分析。严格说来，当做出统计学差异时，这样的实验还要重复三次。但是因检测凋亡时，受细胞状态，PI染色时间，流式...
测细胞凋亡,贴壁细胞dapi染色,还需要固定吗
测细胞凋亡，贴壁细胞dapi染色，最好是固定。DAPI溶液是半通透性的，不固定的话，细胞染色时间得长，染料进入细胞会比较少，所以建议是固定。DAPI 可以透过完整的细胞膜，它可以用于活细胞和固定细胞的染色。DAPI溶液使用步骤：固定细胞或组织样品，经过固定后，适当洗涤除去固定剂。如果需要进行免疫荧光染色，...
流式细胞仪检测细胞凋亡,单染可以检测出细胞凋亡率吗?
用PI单染就可以，PI是用来测细胞周期的，在单倍体峰前如果有个亚峰则表明有凋亡，但是这个方法不是很好，坏死细胞也会包含在内。准确地说用PI单染测出的凋亡率应该是死亡细胞占细胞总数的比例。建议用AnexinV和PI双染，PI阴性和AnexinV阳性区是真正凋亡的细胞。细胞早期凋亡时，内膜外翻，位于胞浆的...
细胞凋亡检测
流式细胞仪（FCM）是主要的检测工具，如光散射法（区分细胞体积变化）、DNA含量测定（评估DNA断裂）和Y啶橙染色（评估DNA变性）。原位末端标记如TUNEL和Annexin V\/PI法结合使用，能提供早期凋亡的精确检测，但需注意不同方法的特异性与敏感性。未来，ssDNA单抗法和更特异的蛋白分析技术有望进一步提升细胞...
嘉黎县脂降回答： 流式细胞检测凋亡的原理和染色方法有好多种呢,有的只要单色,不需要设置补偿.只有使用PI+Anexin V 这种双色实验才需要.不过这个实验特异性很差,不建议使用,因为健康细胞结果刮取或者胰酶消化后很容易出现假阳性.调节补偿,和其他多色流式的方法一样,需要一管无染色,一管肯定有PI阳性的,一管肯定有Anexin V阳性的,分别做相应的染色.再上机调节.特别要注意的是很多人用健康细胞来做这个调节,但是健康细胞是不会被染色的,所以一定要使用确定死亡和正在发生凋亡的细胞来做调节补偿的单色阳性对照
众宝18810714037问： 做流式细胞凋亡实验总是抓不住早期凋亡怎么办 - ？
嘉黎县脂降回答： 你需要做两件事,一是时间曲线,而是剂量曲线.时间曲线就是从同时处理一批细胞样本,每个时间点取一个样本来分析,看何时开始出现.一般的诱导,几小时就可以出现了.所以不能等时间很长,可以每隔一,两小时取一次样,六小时候可以延长取样间隔.找到最佳时间点后,同时用不同剂量处理细胞,然后在同一个时间点测量.看剂量的影响
众宝18810714037问： 流式细胞仪 - 调节荧光补偿是不是把其他颜色荧光都调到零是最好的? - ？
嘉黎县脂降回答： 荧光补偿是因为每个荧光的光谱都比较宽.用你的例子来说,就是PI的荧光,不仅被PI这个通道的探测器所感应到,而且也同时被FITC的探测器感应到,所以一个PI染色会出现在双染的区域.另外FITC的荧光,也会同时被两个探测器所检测到....
众宝18810714037问： 流式细胞仪如何设置凋亡阳性对照 - ？
嘉黎县脂降回答： 1、必须活细胞检测,不能用能破坏细胞膜完整性的固定剂和穿透剂固定或穿膜.2、特殊细胞的染色方法:在消化或吹打时,有些细胞(如神经元细胞)很容易受到损伤,导致晚期凋亡或坏死比例非常高,不能反映真实结果.实验的解决方法:先...
众宝18810714037问： 流式补偿怎么调节 - ？
嘉黎县脂降回答： 温度,压力补偿
众宝18810714037问： 外周血细胞均含有gfp,另外还有两种其他荧光,流式细胞术应怎样调补偿 - ？
嘉黎县脂降回答： 另外两种是哪两种呢?调节的是后你需要4个样本,一是不带有任何荧光的,一个是只带有GFP的,一个是只带有另外一个荧光中的一个的,另外一个是剩下的那种荧光的.也就是一个无荧光,其他单色荧光.
众宝18810714037问： Annexin V - PI 流式检测细胞凋亡时,需要双阴性和单阳性对照码? - ？
嘉黎县脂降回答： 第一次试验建议做阴性和单阳对照,以调整荧光补偿,如果细胞和荧光染料不变,以后可以不做
众宝18810714037问： 流式细胞仪检测细胞凋亡的几种方法的比较 - ？
嘉黎县脂降回答： 目的:探索运用流式细胞仪来检测细胞凋亡的方法.方法:采用流式细胞仪对DNA含量、磷脂酰丝氨酸、线粒体膜电位、钙离子浓度的检测,分析细胞凋亡情况.结果:DNA含量测定存在一定误差;磷脂酰丝氨酸测定能准确反映细胞早晚期凋亡情况;线粒体膜电位、钙离子浓度测定能准确反映凋亡细胞的生理指标,如果结合形态学分析将更为客观.结论:通过比较实验方法,为将来采用流式细胞仪检测细胞凋亡提供更准确的实验方法.
众宝18810714037问： 求流式细胞术做凋亡的操作步骤和注意事项 - ？
嘉黎县脂降回答： 博凌科为解答:仅供参考一下:流式样品的准备:DNA含量的测定:用本法可以测定细胞周期、细胞倍体和凋亡,在样品的制备中存在的问题主要是细胞的聚集和碎片,建议在固定细胞...
众宝18810714037问： Annexin V和PI法检测凋亡细胞,此细胞在检测前应该怎么处理? - ？
嘉黎县脂降回答： Annexin V和PI法检测凋亡细胞更适合于流式检测.如果没有流式,最后做成滴片用显微镜观察也可以.不用固定,直接洗两次就OK了.如果你不能确定,可以多找几家公司的说明书看一看. 一般来说,这个并不推荐石蜡切片.
