流式法检测细胞凋亡时怎样体调补偿
你需要做两件事，一是时间曲线，而是剂量曲线。时间曲线就是从同时处理一批细胞样本，每个时间点取一个样本来分析，看何时开始出现。一般的诱导，几小时就可以出现了。所以不能等时间很长，可以每隔一，两小时取一次样，六小时候可以延长取样间隔。找到最佳时间点后，同时用不同剂量处理细胞，然后在同一个时间点测量。看剂量的影响
1、必须活细胞检测,不能用能破坏细胞膜完整性的固定剂和穿透剂固定或穿膜.
2、特殊细胞的染色方法：在消化或吹打时,有些细胞（如神经元细胞）很容易受到损伤,导致晚期凋亡或坏死比例非常高,不能反映真实结果.实验的解决方法：先低速离心,吸取细胞培养板中的液体,留少许液体,加入适量PI和Annexin-V染色10min后,将漂浮细胞吸至离心管中,离心洗涤两次,用PBS漂洗贴壁细胞两次,加胰酶消化后将细胞悬液移至另一离心管中,离心洗涤,再与漂浮细胞合并后上流式细胞仪检测.应用该法可降低晚期凋亡和坏死比例,增加早期凋亡细胞比例.
3、由于Annexin-V为钙离子依赖的磷脂结合蛋白,只有在钙离子存在的情况下与PS的亲和力才大,因而在消化细胞时,建议一般不采用含EDTA的消化液.
4、必须设置阴性对照和补偿对照（分别单染）.
只有使用PI+Anexin V 这种双色实验才需要。不过这个实验特异性很差，不建议使用，因为健康细胞结果刮取或者胰酶消化后很容易出现假阳性。
调节补偿，和其他多色流式的方法一样，需要一管无染色，一管肯定有PI阳性的，一管肯定有Anexin V阳性的，分别做相应的染色。再上机调节。特别要注意的是很多人用健康细胞来做这个调节，但是健康细胞是不会被染色的，所以一定要使用确定死亡和正在发生凋亡的细胞来做调节补偿的单色阳性对照
流式细胞仪检测细胞凋亡中Pl 染液是什么
PI 是 propidium iodide的缩写，该染料能和核酸链结合后，被激发发出荧光。其实并不是检测凋亡，而是检测的细胞膜的完整性。完整的细胞膜对PI没有通透性，PI不能进入细胞内和核酸结合，所以细胞不能被染色。只有细胞发生了凋亡，或者坏死，或者人为因素，比如胰酶消化，吹打，刮取等等操作，损伤了细胞膜。
如何用流式检测细胞凋亡
图2：细胞坏死的发生过程[1]一、流式检测细胞凋亡的原理 Annexin V和PI双染法是流式检测细胞凋亡的经典方法 ，它是基于凋亡的早期细胞膜上的磷脂酰丝氨酸（phosphotidylserine, PS）从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面这一原理来实现的（如下图3）。图3：凋亡早期 PS从细胞膜的内侧外翻 该方法简便、...
细胞凋亡检测方法汇总
细胞凋亡，又称细胞程序性死亡，是细胞主动且有序地结束生命的过程，广泛存在于生物体的发育、老化和损伤细胞清除等过程中。检测细胞凋亡的方法多样，包括形态学观察、DNA梯状带电泳和流式细胞术等。流式细胞术因其能够实现定量与定性检测，成为细胞凋亡检测的重要工具。细胞凋亡过程可以分为多个阶段，从...
流式细胞术测细胞凋亡处理后的细胞没有检测可以冻存起来吗
流式细胞仪检测细胞凋亡有很多种方法。只有没有更换培养液的方法，比如加入caspase 荧光底物这个方法才可以。其他方法都更换了培养液。细胞损伤很大，冻存了也活不了多少。
检测细胞凋亡的方法有哪些
1、HE染色、光镜观察：凋亡细胞呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有出芽现象。2、丫啶橙染色，荧光显微镜观察：活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。3、台盼蓝染色：如果细胞膜不完整、破裂，台盼蓝...
"TUNEL"缩写代表什么?
在具体应用中，TUNEL技术常用于多种实验方法，如检测细胞凋亡时DNA含量的变化，通过透射电子显微镜观察细胞形态和DNA断裂，以及结合流式细胞术进行定量分析。例如，TGF-β1诱导的肝癌细胞凋亡，就通过TUNEL技术进行定量评估。此外，它还用于细胞活力检测和细胞损伤或凋亡的染色观察，如四唑盐法、AO\/EB染色及...
流式Annexin-FITC \/PI 双染法测凋亡,各个象限代表什么状态的细胞?
一般来说以Annexin-FITC 信号为横坐标，PI 信号为纵坐标，左下是正常细胞，右下是早期凋亡细胞，右上是中晚期凋亡，左上是坏死细胞。对于右上象限有争议，有人视其为晚期凋亡，有人视其为坏死细胞~
流式图四个象限怎么看凋亡
流式图四个象限看凋亡：在二维散点图上，PI 和 annexin V 分别是X和Y轴。一般认为PI单染的细胞是已经死亡的细胞，annexin V 单染的细胞是凋亡早期的细胞，而双染是凋亡中期的。需要在散点图上先画出4个象限，位置根据无染色的阴性细胞先定出左下象限。Annexin V是一种检测细胞凋亡的试剂，在正常...
hochest33258法检测细胞凋亡该怎么分析
实验方法 Hoechst-PI染色法检测细胞凋亡 亚“G1 ”峰方法简便，但只是代表G0 \/G1 期发生凋亡的细胞，S期和G2 期细胞凋亡发生于G1 峰后，无法观察。此外，由于全部细胞均经固定，因此不能区别死细胞和活细胞。Hoechst-PI染色则可弥补上述不足。Hoechst 33258 可被活细胞摄取，与DNA结合在紫外光下呈...
bd的流式细胞仪器测凋亡怎么操作
流式检测细胞凋亡
虿肥铝镁： 流式细胞检测凋亡的原理和染色方法有好多种呢,有的只要单色,不需要设置补偿.只有使用PI+Anexin V 这种双色实验才需要.不过这个实验特异性很差,不建议使用,因为健康细胞结果刮取或者胰酶消化后很容易出现假阳性.调节补偿,和其他多色流式的方法一样,需要一管无染色,一管肯定有PI阳性的,一管肯定有Anexin V阳性的,分别做相应的染色.再上机调节.特别要注意的是很多人用健康细胞来做这个调节,但是健康细胞是不会被染色的,所以一定要使用确定死亡和正在发生凋亡的细胞来做调节补偿的单色阳性对照
吉县15791093643： 做流式细胞凋亡实验总是抓不住早期凋亡怎么办 - ？
虿肥铝镁： 你需要做两件事,一是时间曲线,而是剂量曲线.时间曲线就是从同时处理一批细胞样本,每个时间点取一个样本来分析,看何时开始出现.一般的诱导,几小时就可以出现了.所以不能等时间很长,可以每隔一,两小时取一次样,六小时候可以延长取样间隔.找到最佳时间点后,同时用不同剂量处理细胞,然后在同一个时间点测量.看剂量的影响
吉县15791093643： 流式细胞仪检测细胞凋亡的几种方法的比较 - ？
虿肥铝镁： 目的:探索运用流式细胞仪来检测细胞凋亡的方法.方法:采用流式细胞仪对DNA含量、磷脂酰丝氨酸、线粒体膜电位、钙离子浓度的检测,分析细胞凋亡情况.结果:DNA含量测定存在一定误差;磷脂酰丝氨酸测定能准确反映细胞早晚期凋亡情况;线粒体膜电位、钙离子浓度测定能准确反映凋亡细胞的生理指标,如果结合形态学分析将更为客观.结论:通过比较实验方法,为将来采用流式细胞仪检测细胞凋亡提供更准确的实验方法.
吉县15791093643： 【求助】流式细胞仪检测细胞凋亡结果该怎样分析 - ？
虿肥铝镁： 已经做完流式,看到结果却不知该怎样分析了.我用的是AnnexinV-FITC 凋亡试剂盒 ,AnnexinV/PI双染检测细胞凋亡.请教各位,凋亡散点图中第1,2,4象限到底分别代表什么细胞?手里的资料说法都不相同.试剂盒说明书:1代表细胞收集过...
吉县15791093643： Annexin V - PI 流式检测细胞凋亡时,需要双阴性和单阳性对照码? - ？
虿肥铝镁： 第一次试验建议做阴性和单阳对照,以调整荧光补偿,如果细胞和荧光染料不变,以后可以不做
吉县15791093643： 外周血细胞均含有gfp,另外还有两种其他荧光,流式细胞术应怎样调补偿 - ？
虿肥铝镁： 另外两种是哪两种呢?调节的是后你需要4个样本,一是不带有任何荧光的,一个是只带有GFP的,一个是只带有另外一个荧光中的一个的,另外一个是剩下的那种荧光的.也就是一个无荧光,其他单色荧光.
吉县15791093643： 流式细胞仪 - 调节荧光补偿是不是把其他颜色荧光都调到零是最好的? - ？
虿肥铝镁： 荧光补偿是因为每个荧光的光谱都比较宽.用你的例子来说,就是PI的荧光,不仅被PI这个通道的探测器所感应到,而且也同时被FITC的探测器感应到,所以一个PI染色会出现在双染的区域.另外FITC的荧光,也会同时被两个探测器所检测到....
吉县15791093643： 请问流式细胞仪检测细胞凋亡的原理是什么? - ？
虿肥铝镁： 一、原理 在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧.Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高...
吉县15791093643： 影响流式细胞术实验结果的主要因数有哪些 - ？
虿肥铝镁： 1、样品处理,去除杂细胞、碎片等对正常细胞的计数;2、对照:设立负对照、同型对照、弱阳性对照,帮助你正确判断阴阳的界定;3、正确的补偿;4、正确的染色方法,抗体的比例...
吉县15791093643： 求流式细胞术做凋亡的操作步骤和注意事项 - ？
虿肥铝镁： 博凌科为解答:仅供参考一下:流式样品的准备:DNA含量的测定:用本法可以测定细胞周期、细胞倍体和凋亡,在样品的制备中存在的问题主要是细胞的聚集和碎片,建议在固定细胞...
