碱裂解法制备质粒dna时，溶液1，2，3中各组分都起什么作用
碱裂解法制备质粒DNA时，溶液Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ中各组分的作用：
1、溶液Ⅰ：
葡萄糖是使悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部；EDTA是Ca2+和Mg2+等二价金属离子的螯合剂，其主要目的是为了螯合二价金属离子从而达到抑制DNase的活性；可添加RNase A消化RNA。
2、溶液Ⅱ
此步为碱处理。其中NaOH主要是为了溶解细胞，释放DNA，因为在强碱性的情况下，细胞膜发生了从双层膜结构向微囊结构的变化。SDS与NaOH联用，其目的是为了增强NaOH的强碱性，同时SDS作为阴离子表面活性剂破坏脂双层膜。这一步要记住两点：
第一，时间不能过长，因为在这样的碱性条件下基因组DNA片断也会慢慢断裂；
第二，必须温柔混合，不然基因组DNA会断裂。
3、溶液Ⅲ
溶液III的作用是沉淀蛋白和中和反应。其中醋酸钾是为了使钾离子置换SDS中的钠离子而形成了PDS。
因为十二烷基硫酸钠（sodium dodecylsulfate）遇到钾离子后变成了十二烷基硫酸钾 （potassium dodecylsulfate, PDS），而PDS是不溶水的，同时一个SDS分子平均结合两个氨基酸，钾钠离子置换所产生的大量沉淀自然就将绝大部分蛋白质沉淀了。
2 M的醋酸是为了中和NaOH。基因组DNA一旦发生断裂，只要是50－100 kb大小的片断，就没有办法再被 PDS共沉淀了，所以碱处理的时间要短，而且不得激烈振荡，不然最后得到的质粒上总会有大量的基因组DNA混入，琼脂糖电泳可以观察到一条浓浓的总DNA条带。
75%酒精主要是为了清洗盐份和抑制Dnase；同时溶液III的强酸性也是为了使DNA更好地结合在硅酸纤维膜上。
扩展资料
质粒抽提的窍门
（1）加溶液II（裂解液）后，操作一定要温和，剧烈混合会导致基因组DNA污染。
（2）洗脱时60℃温育（Ellution Buffer）洗脱缓冲液或去离子水效果更好。
（3）若质粒提取含量低，可增加菌液样或换用ArtMedia Plasmid Culture，其比LB培养基质粒得量高。
（4）菌体应彻底悬浮 ， 如果没有彻底悬浮菌体，则残留的菌体团块在溶液 II 加入后，变成难以完全裂解的团块。这个团块在溶液 III 加入后，会有一部分蛋白质继续存在于溶液中，成为蛋白质残留的最大根源。
（5）加入溶液 II 后，混匀，体系最好能立即变得清澈。体系如果变得清澈了，马上加入溶液 III 中和。
（6）中和的操作 ，在 1.5ml 离心管中加入溶液 III 后，先颠倒两次，使管底朝上，用指头弹击管底数次，再颠倒混匀。效果非常好。
参考资料来源
百度百科-质粒抽提
SDS碱裂解法制备质粒DNA-大量制备
SDS碱裂解法作为一种传统的质粒DNA制备技术，随着PCR等新技术的发展，其应用范围已逐渐减少，被现代更快速的柱纯化方法取代（参见本章开头的“商业试剂盒纯化DNA”部分）。尽管如此，碱裂解法对于高拷贝和低拷贝质粒DNA的提取仍有一定的价值。通过裂解细菌并利用CsCl梯度离心，可以得到每毫升3至5毫克的DNA...
碱裂解法制备质粒dna时,溶液1,2,3中各组分都起什么作用
碱裂解法制备质粒DNA时，溶液Ⅰ中的葡萄糖成分的主要作用是防止大肠杆菌沉淀，保持其悬浮状态。EDTA的作用是螯合钙离子和镁离子等二价金属离子，从而抑制DNase的活性。此外，可以添加RNase A来消化RNA。溶液Ⅱ是碱处理步骤的关键，其中NaOH的作用是溶解细胞，释放DNA。在强碱性条件下，细胞膜由双层结构转变...
碱性裂解法提取质粒DNA原理是什么?
抽提质粒DNA常用碱裂解法，它是一种应用最为广泛的制备质粒DNA的方法，其基本原理为：在碱性条件（pH12.5）下，线性染色体DNA的双螺旋结构解开而变性，质粒DNA的氢键虽然断裂，但两条互补链彼此缠绕，紧密结合在一起。当加入乙酸钾恢复至中性时，染色体DNA分子难以复性，而质粒DNA分子很快复性，离心时，...
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碱裂解法制备质粒DNA时，溶液Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ中各组分的作用：1、溶液Ⅰ：葡萄糖是使悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部；EDTA是Ca2+和Mg2+等二价金属离子的螯合剂，其主要目的是为了螯合二价金属离子从而达到抑制DNase的活性；可添加RNase A消化RNA。2、溶液Ⅱ 此步为碱处理。其中NaOH主要是为了溶...
质粒DNA如何提取的?
通过离心，可除去大部分细胞碎片、染色体DNA、RNA及蛋白质，质粒DNA尚在上清中,然后用酚、氯仿抽提进一步纯化质粒DNA。抽提质粒DNA常用碱裂解法，它是一种应用最为广泛的制备质粒DNA的方法，其基本原理为：在碱性条件（pH12.5）下，线性染色体DNA的双螺旋结构解开而变性，质粒DNA的氢键虽然断裂，但两条...
用碱裂解法提取质粒DNA的,加入溶液1,容液2,容液3后各有哪些现象,原因是...
溶液2中的主要成分是NaOH和SDS，是用来裂解细胞的。因为NaOH遇到二氧化碳容易反应生成碳酸氢钙，影响使用效果，因此要现配现用。SDS的话，低温容易产生沉淀。不过在37°C 水浴一下就好。主要还是NaOH的问题。溶液1主要是让菌体细胞充分悬浊于溶液，没有什么实际意义，可以不要。溶液2是碱液，目的在彻底破坏...
碱裂解法提取质粒dna的原理是什么?
其基本原理为：当菌体在NaOH 和SDS 溶液中裂解时，蛋白质与DNA 发生变性，当加入中和液后， 质粒 DNA 分子能够迅速复性，呈溶解状态，离心时留在上清中；蛋白质与染色体DNA 不变性而呈絮状，离心时可沉淀下来。相关介绍：细菌质粒是一类双链、闭环的DNA，大小范围从1kb 至200kb 以上不等。各种质粒都...
SDS碱裂解法制备质粒DNA的具体操作步骤是怎么样的
1.收菌.将菌液从试管中倒入1.5mlEP管,10000rpm\/min,30s离心.离心转速不必过大时间不必过长,以免难以悬浮.必要时收两次.离心后弃上清,将残留菌液尽量扣干.2.悬浮菌液.用200\/250ul碱提Ⅰ液（确定已加入RNAse）悬浮沉淀,可在振荡器上振荡悬浮.目的是制成均一菌液.3.蛋白质变性.加入同Ⅰ液等体积...
分子实验查漏补缺系列:SDS碱裂解法制备质粒DNA
I. 碱裂解法提取质粒DNA长期以来一直是实验室的标准技术，尽管现在有许多质粒提取试剂盒可供选择，这些试剂盒更为便捷，但它们存在一定的局限性。试剂盒中的成分是不透明的，研究者虽然知道如何使用，却不太了解每个成分的具体作用。这可能导致研究人员在遇到问题时缺乏解决问题的方向和兴趣。本文详细阐述了...
生物化学实验中制备质粒DNA方法中,酚氯仿裂解法的实验原理
一般分离质粒DNA的方法都包括3个步骤：①培养细菌，使质粒DNA大量扩增；②收集和裂解细菌；③分离和纯化质粒DNA。分离制备质粒DNA的方法很多，其中常用的方法有碱裂解法、煮沸法、SDS法和羟基磷灰石层析法等。在实际操作中可以根据宿主菌株的类型、质粒分子大小、碱基组成和结构等特点以及质粒DNA的用途选择不...
闽霍卫美：[答案] 你的这个问题描述的不清楚,请把你的问题说清楚~否则别人没法帮助你的!在百度提问页面的顶端可以看到“我要提问”这个选项,在提问输入框中输入您的问题,或直接点击“我要提问”进入提问页,在这里您需要描述清楚...
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长宁区13523339052： dna提取试验中用KAc的作用 - ？
闽霍卫美： 碱裂解法提取质粒DNA的时候,溶液三中用的是KAc,一方面利用HAc/Ac-缓冲体系平衡溶液二中NaOH的强碱性,使DNA复性;另一方面,K+与溶液二中的SDS(结合到蛋白质上)结合生成微溶性物质,促使体系中的蛋白质以及蛋白质所连接的基因组DNA的沉降.另外,如楼上所说,pH4.8的NaAc溶液常用于配合异丙醇沉淀DNA.
长宁区13523339052： 质粒提取的步骤 - ？
闽霍卫美： 实验一 ApaLI (178) P(BLA) ALPHA 质粒DNA的提取、 质粒DNA的提取、酶切 DNA的提取 及琼脂糖凝胶电泳 ApaLI (2367) EcoRI (397) AvaI (413)XmaI (413) SmaI (415) APr pUC19 BamHI (418) PstI (440)HindIII (448) P(LAC) ORI 2686 bp ApaLI ...
