碱性裂解法提取质粒DNA原理是什么？
碱性裂解法提取质粒原理如下：
在pH12.0~12.6碱性环境中，细菌的线性大分子量染色体DNA变性分开，而共价闭环的质粒DNA虽变性但仍处于拓扑缠绕状态。
将pH调至中性并有高盐存在及低温的条件下，大部分染色体DNA、大分子量的RNA和蛋白质在去污剂SDS的作用下形成沉淀，而质粒DNA仍然为可溶状态。
通过离心，可除去大部分细胞碎片、染色体DNA、RNA及蛋白质，质粒DNA尚在上清中,然后用酚、氯仿抽提进一步纯化质粒DNA。
抽提质粒DNA常用碱裂解法，它是一种应用最为广泛的制备质粒DNA的方法，其基本原理为：在碱性条件（pH12.5）下，线性染色体DNA的双螺旋结构解开而变性，质粒DNA的氢键虽然断裂，但两条互补链彼此缠绕，紧密结合在一起。
当加入乙酸钾恢复至中性时，染色体DNA分子难以复性，而质粒DNA分子很快复性，离心时，染色体DNA与细胞碎片一起被沉淀出来，而质粒DNA则留在上清液中，用异丙醇或乙醇沉淀后洗涤、可得到较纯的质粒DNA。
碱裂解法通常有大量提取法和小量提取法，其提取原理是一样的，只需体积按一定比例扩大。纯化质粒DNA时通常还利用了质粒DNA相对较小及共价闭环两个性质。开始进行克隆时，对于小量制备的质粒DNA，经过苯酚、氯仿抽提。
RNA酶消化和乙醇沉淀等简单步骤去除残余蛋白质和RNA，所得纯化的质粒DNA已可满足细菌转化、DNA片段的分离和酶切、常规亚克隆及探针标记等要求，故在分子生物学实验室中常用。要使用特殊纯化的质粒时，可采用氯化铯方法抽提，但该方法比较复杂，对技术要求高，花费时间长，也比较昂贵。
SDS碱裂解法提取质粒DNA中加酚氯仿的作用是什么?
我也想知道,找了一下:酚是强烈的蛋白质变性剂，能有效使蛋白质变性而除去，氯仿有强烈的脂溶性，去除脂类杂质，本身酚：氯仿：异戊醇=25：24：1的主要作用是抽提蛋白质 参考资料：http:\/\/zhidao.baidu.com\/question\/27602711.html?si=1
分子实验查漏补缺系列:SDS碱裂解法制备质粒DNA
很多年以来，碱裂解法提取质粒DNA一直是标准的方法。但现在因为有大量的质粒提取试剂盒，更方便快捷，研究人员也更喜欢用试剂盒来提取，但是试剂盒的最大问题在于试剂盒本身是一个黑盒子，只知道怎么用而不知道具体每个组分的作用。这样的研究人员缺乏对实验原理学习的兴趣，在出现问题之后也缺乏找到正确解决...
质粒DNA提取和细胞基因组DNA提取的异同
质粒dna提取一般用沸水浴法和碱裂解法，现在一般都采用碱裂解法，并有试剂盒可用，它主要是将细胞内的环状质粒提取出来，一般需要用sds裂解，rna酶降解，然后过柱，再进行洗脱。过程比较简单。而基因组dna提取则较为复杂，也需要用sds裂解和rnd酶降解，但降解时间较长，同时对有些革兰氏阳性细菌还要进行...
碱裂解法提取质粒后 电泳拖尾严重,是什么原因?
1浓度过高无法正常电压。2提取过程因为某些因素使DNA降解
提质粒步骤
1、菌体扩繁。2、菌体裂解释放质粒DNA。3、质粒DNA的分离与纯化。质粒提取办法中，最常用的是碱裂解法，它具有得率高，适用面广，快速，纯度高等特色。其原理是：强碱（pH12.0-12.6）环境下，SDS损坏细胞壁并裂解细胞，一同使宿主细胞的蛋白质、染色体及DNA发生变性，而质粒DNA因为其分子量小而缠...
分子实验查漏补缺系列:SDS碱裂解法制备质粒DNA
I. 碱裂解法提取质粒DNA长期以来一直是实验室的标准技术，尽管现在有许多质粒提取试剂盒可供选择，这些试剂盒更为便捷，但它们存在一定的局限性。试剂盒中的成分是不透明的，研究者虽然知道如何使用，却不太了解每个成分的具体作用。这可能导致研究人员在遇到问题时缺乏解决问题的方向和兴趣。本文详细阐述了...
提取质粒的主要步骤
详细内容请参考《分子克隆实验指南》。 另外，复旦大学生化与分子生物学实验室一篇文章，提供了质粒提取机理的详细解说。碱裂解法 人们使用碱与SDS裂解法从E. coli(大肠杆菌)中分离制备质粒DNA已有30多年的历史。将细菌悬浮液暴露于高pH值的强阴离子洗涤剂中，会使细胞壁破裂，染色体DNA和蛋白质变性，将...
干货分享 | 关于质粒提取的那些事儿
质粒提取并非简单操作，关键在于区分并提取chromosomal DNA和plasmid DNA。细菌的拟核结构和DNA特性是关键。提取过程一般包括菌体扩繁、裂解和分离纯化三个步骤，其中碱裂解法是常用方法，通过选择性地让chromosomal DNA变性，而plasmid DNA保持双链结构。在提取过程中，溶液Ⅰ的Lysozyme、EDTA、Glucose等成分各司...
碱裂解法提取质粒后 电泳拖尾严重,是什么原因
类似于溶液方面的问题一般比较容易排除，而且比较容易改正。电泳结果拖尾大部分原因与实验操作有关，在加入碱性溶液裂解细胞后操作需要轻柔，静置时间不宜过长，剧烈震荡以及静置时间过长均可导致质粒DNA断裂，电泳结果中出现拖尾现象。有什么问题可以继续追问，欢迎交流。
碱裂解法提取质粒DNA中哪些因素影响核酸的沉淀?
碱裂解法提取质粒DNA中温度和湿度会影响核酸的沉淀。碱裂解法提取质粒dna中高PH的溶液会使细胞壁粕类从而使得DNA和蛋白质变性。细菌悬浮液暴露于高pH值的强阴离子洗涤剂中，会使细胞壁破裂，染色体DNA和蛋白质变性，将质粒DNA释放到上清中。碱裂解法的原理：当菌体在NaOH 和SDS 溶液中裂解时，蛋白质...
季振酪酸：[答案] 现在质粒提取无论手提还是试剂盒,其根本原理大多还是碱裂解法:当菌体在NaOH和 SDS溶液中裂解时,蛋白质与DNA发生变性,当加入中和液后,质粒DNA分子能够迅速复性,呈溶解状态,离心时留在上清中;蛋白质与染色体DNA不变...
蒙阴县19454668931： 碱法提取质粒中,基因组dna和蛋白质怎样被去除,其原理何在 - ？
季振酪酸： 现质粒提取论手提试剂盒其根本原理碱裂解:菌体NaOH SDS溶液裂解蛋白质与DNA发变性加入液质粒DNA能够迅速复性呈溶解状态离留清;蛋白质与染色体DNA变性 呈絮状离沉淀 进步质粒DNA获取手提经苯酚、氯仿抽提RNA酶消化乙醇沉淀 等简单步骤除残余蛋白质RNA及盐试剂盒则基础使用DNA吸附柱吸附质粒DNA洗脱质粒 评价:一通琼脂糖电泳检查所获质粒(准确需酶切)细菌基组DNARNA污染及质粒断裂少同根据marke量品进行致浓度定量; 二通紫外光光度计测定品OD二吧0OD二陆0计算其比值衡量品纯度经验值:纯DNA:OD二陆0/OD二吧0≈一.吧(>一.9,表明RNA污染;
蒙阴县19454668931： 碱裂解法大量提取质粒是什么原理?？
季振酪酸：1、取培养至对数生长后期(一般培养12~16小时)的含待提质粒的细菌培养液于离心杯中,配平,4℃下4000rpm离心15min,弃上清,然后将离心管倒置于干净的约纸上使上清液全部流尽. 2、向盛有细菌沉淀物的离心管中加入20mL冰冷的溶...
蒙阴县19454668931： 质粒DNA的提取过程中染色体的去处和原理是什么 - ？
季振酪酸： 首先加入溶液1,:改变细胞膜的通透性. 加入溶液2:使细胞裂解,释放出质粒DNA和染色体DNA,在碱性条件下,破坏碱基配对,使这两种DNA都变性. 加入溶液3:使DNA分子复性.此时,线状染色体DNA的两条链已经全部分开,不会再复合.而质粒DNA,由于处于拓扑缠绕状态而彼此不分开,你可以想象一下,两个环分开之后也是环环相套的情况.所以质粒DNA能够很快的找到自己相对应的那条链,因此在最适条件下,便可复性. 此时,已经完全分开的线状染色体DNA交联形成不溶于水的线团结构,缠绕附着在细胞壁碎片上,通过离心可去除. 而质粒DNA则留在上清中,通过异丙醇沉淀以及70%乙醇洗涤后便可得到.
蒙阴县19454668931： RNA的提取方法步骤及原理. - ？
季振酪酸：[答案] 分子克隆技术(华农) 实验一 质粒的制备 质粒是携带外源基因进入细菌中扩增或表达的主要载体,它在基因操作中具有重要作用.质粒的分离与提取是最常用、最基本的实验技术. 质粒的提取方法很多,大多包括3个主要步骤:细菌的培养、细菌...
蒙阴县19454668931： 质粒抽提的抽提方法 - ？
季振酪酸： 质粒抽提最常用的方法是碱裂解法,它具有得率高,适用面广,快速,纯度高等特点.关于碱裂解法的原理,复旦大学生化与分子生物学实验室的网站有一篇专论,大家可以去看一下.这是一篇美文,非常有趣.文中提到了一个与几乎所有能查...
蒙阴县19454668931： SDS碱裂解法制备质粒DNA的具体操作步骤是怎么样的?那位大侠给力点,帮下忙 - ？
季振酪酸： 细菌质粒是一类双链、闭环的DNA,大小范围从1kb至200kb以上不等.各种质粒都是存在于细胞质中、独立于细胞染色体之外的自主复制的遗传成份,通常情况下可持续稳定地处于染色体外的游离状态,但在一定条件下也会可逆地整合到寄主...
蒙阴县19454668931： 提取质粒时这样去除基因组总DNA - ？
季振酪酸： 用碱裂解法提质粒,基因组DNA会与细胞残骸聚集,而小的质粒DNA溶在水相中,通过离心就能除去;如果还担心有少量基因组DNA污染,可以电泳后从胶中回收质粒片段;用核酸外切酶也能消化掉线性的DNA,而环形和超螺旋的质粒DNA则得以保留.
蒙阴县19454668931： 质粒的提取原理 - ？
季振酪酸： 质粒提取是指去除 RNA,将质粒与细菌基因组 DNA分开,去除蛋白质及其它杂质,以得到相对纯净的质粒. 目录 一、质粒提取原理 质粒是细胞内的一种环状的小分子DNA,是进行DNA重组的常用载体.作为一个具有自身复制起点的复制单位...
