生物化学实验中制备质粒DNA方法中，酚氯仿裂解法的实验原理
离心的作用是让它分层，或者说按密度分离。
上层水相，有你要的质粒；中间是变性的蛋白；下面是有机相，这样酚氯仿就除去了。
异丙醇可以沉淀DNA和RNA（即核酸）
静置是为了增加沉淀效果
1.了解质粒的特性及其在分子生物学研究中的作用；
2.掌握质粒DNA分离和纯化的原理；
3.学习碱裂解法和煮沸法分离质粒DNA的方法。
【实验原理】
质粒是细菌内的共生型遗传因子，它能在细菌中垂直遗传并且赋予宿主细胞特定的表型。质粒载体是在天然质粒的基础上为适应实验室操作而进行人工构建的。与天然质粒相比,质粒载体通常带有一个或一个以上的选择性标记基因(如抗生素抗性基因)和一个人工合成的含有多个限制性内切酶识别位点的多克隆位点序列，并去掉了大部分非必需序列，使分子量尽可能减少，以便于基因工程操作。大多质粒载体带有一些多用途的辅助序列，这些用途包括通过组织化学方法肉眼鉴定重组克隆、产生用于序列测定的单链DNA、体外转录外源DNA 序列、鉴定片段的插入方向、外源基因的大量表达等。一个理想的克隆载体大致应有下列一些特性：（1）分子量小、多拷贝、松驰控制型；（2）具有多种常用的限制性内切酶的单个酶切位点；（3）能插入较大的外源DNA 片段；（4）具有容易操作的检测表型。常用的质粒载体大小一般在1kb 至10kb 之间，如pBR322、pUC 系列、pGEM 系列和pBluescript（简称pBS）等。经过改造的基因工程质粒是携带外源基因进入细菌中扩增或表达的重要媒介，这种基因的运载工具在基因工程中具有极广泛的用途，而质粒的分离与提取则是基因工程最常用、最基本的实验技术。
一般分离质粒DNA的方法都包括3个步骤：①培养细菌，使质粒DNA大量扩增；②收集和裂解细菌；③分离和纯化质粒DNA。分离制备质粒DNA的方法很多，其中常用的方法有碱裂解法、煮沸法、SDS法和羟基磷灰石层析法等。在实际操作中可以根据宿主菌株的类型、质粒分子大小、碱基组成和结构等特点以及质粒DNA的用途选择不同的方法。本实验介绍最常用的碱裂解法和煮沸法提取质粒DNA。
1. 碱变性法
碱变性法提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性和复性的差异而达到分离的目的。在pH值高达12.6的碱性环境中，染色体的线性DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而被变性；共价闭环质粒DNA的大部分氢键也断裂，但两条互补链不会完全分离，仍会紧密地结合在一起。用pH4.8的KAc或NaAc高盐缓冲液调节其pH值到中性时，因为共价闭合环状的质粒DNA的两条互补链仍保持在一起，因此可以迅速复性；而线性的染色体DNA的两条互补链彼此已完全分开，不能复性，它们相互缠绕形成不溶性网状物，而复性的质粒DNA恢复原来构型，保持可溶性状态。通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去，用酚-氯仿抽提纯化上清液中的质粒DNA，然后用乙醇或异丙醇将溶于上清液中的质粒DNA沉淀。
2.煮沸法
细胞用含有TritonX－100的缓冲液处理，溶解细胞膜。用溶菌酶酶解细菌细胞，然后在高温条件下，使细胞裂解，破坏细菌细胞壁，有助于解开DNA链的碱基对，并使蛋白质和染色体DNA变性。而闭环质粒DNA配对虽被破坏，但双链彼此不分开，当温度下降时恢复成超螺旋。变性蛋白带着染色体DNA一起沉淀下来，质粒DNA仍留在上清液中。离心后的上清液再用异丙醇或乙醇处理，沉淀出质粒DNA。
以上两种制备方法的实验过程中，由于细菌裂解后受到剪切力或核酸降解酶的作用，染色体DNA容易被切断成为各种大小不同的碎片而与质粒DNA共同存在，因此，采用乙醇沉淀法得到的DNA除含有质粒DNA外，还可能有少部分染色体DNA和RNA，必要时可进一步纯化。
提取的质粒DNA中会含有RNA，但RNA一般并不干扰进一步实验，如限制性内切酶消化，亚克隆及连接反应等，因此不必除去。
pbs指()。
PBS的应用场景 PBS在生物学和医学实验室中有广泛的应用。在细胞培养中，PBS用于洗涤细胞，去除培养基中的杂质或残留物。在组织学和病理学研究中，PBS用于制备组织切片或染色过程中的漂洗步骤。此外，PBS还被用于生物化学实验中，作为酶反应或蛋白质分析的缓冲液。PBS的重要性 由于其良好的生物相容性和稳定...
实验室纯度怎么区分?
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如何制备粗食盐???
计算产率:纯食盐产率= (提纯后的食盐质量\/粗食盐质量)×100%2. 产品纯度的检查称取粗食盐和提纯后食盐各1g，分别溶于5mL蒸馏水中，然后将两种溶液分别分成三等份于6支试管中，组成三组对照检查。如何写化学实验报告：首先，写实验报告绝对不是没有效率的事情。实验报告是他人了解你的实验方法和结论的...
化学试剂有哪几种级别的划分?
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化学试剂在药品检验中常用哪种等级?
2.分析纯（AR，红标签）（二级品）： 主成分含量很高、纯度较高，干扰杂质很低，适用于工业分析及化学实验。3.化学纯（CP，蓝标签）（三级品）： 主成分含量高、纯度较高，存在干扰杂质，适用于化学实验和合成制备。4.实验纯（LR，黄标签）： 主成分含量高，纯度较差，杂质含量不做选择，只适用于...
化学试剂纯、实验纯和化学纯有啥区别?
一、性质不同：1、化学纯是一般化学试验用的，有较少的杂质，不妨碍实验要求。2、分析纯是做分析测定用的试剂，杂质更少，不妨碍分析测定。二、用途不同：1、优级纯用于精密分析试验。2、分析纯用于一般分析试验。三、标签颜色不同：优级纯标签为深绿色，分析纯的标签为金光红。
溶液的质量是什么意思
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写出实验室制备乙酸乙酯的化学方程式
事先可在试管中加入几片碎瓷片，以防止液体暴沸。3 1 乙酸乙酯，硬脂酸，甘油，分别在稀硫酸，氢氧化钠中反应化学方程式 2 乙酸乙酯实验室的制备化学方程式 1硬脂酸和甘油应该是硬脂酸甘油酯。 稀硫酸中： CH3CH2OOCCH3+H2O=可逆=CH3CH2OH+CH3COOH CH2-O-CC-C17H35 CH2-OH I I CH-O-...
类推的思维方法在化学学习与研究中常会产生错误的结论
二 、周期性规律类推 周期律是化学中非常重要的普遍性规律 ,特别是同主族元素在物理 、 化学性质上都具有相似性 . 在研究一类物质的性质时 , 一方面要考虑他们相似性 , 但更要注意他们之间的递变规律和某些元素的特性.三 、物质制备类推 物质制备是化学实验中的重要部分 , 正确的制备原理是确保实...
实验中打浆是什么意思?
而在制备蛋白质样品时，通常需要将其添加进冰冻的溶液中，并用九段鞭打浆，使样品均匀分散，从而避免蛋白质表面持续氧化或者凝集。其实，打浆不仅存在于化学实验中，也广泛应用于日常生活中。例如制作蛋糕需要打浆奶油，烹制饭菜需要将蛋液打浆，将其与食材混合。此外，打浆还有促使血液流动、搅拌水泥等功能。
藏水同仁： 质粒DNA的制备 【实验目的】 1.了解质粒的特性及其在分子生物学研究中的作用; 2.掌握质粒DNA分离和纯化的原理; 3.学习碱裂解法和煮沸法分离质粒DNA的方法. 【实验原理】 质粒是细菌内的共生型遗传因子,它能在细菌中垂直遗传并...
晋源区13392134335： 质粒DNA的提取方法总共有哪些,回答的全给高分??? - ？
藏水同仁： 碱裂解法: 此方法适用于小量质粒DNA的提取,提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析.方法如下: 1、接1%含质粒的大肠杆菌细胞于2ml LB培养基. 2、37℃振荡培养过夜. 3、取1.5ml菌体于Ep管,以4000rpm离心3...
晋源区13392134335： RNA的提取方法步骤及原理. - ？
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晋源区13392134335： 质粒DNA制备实验中溶液二加入五分钟后溶液变透明,黏稠而没有沉淀出现 - ？
藏水同仁：[答案] 这一步一般不出现沉淀,请加入溶液三,摇晃、冰浴并离心 因为将PH调至中性并有高盐浓度存在的条件下,染色体DNA之间才能交联形成不溶性网状结构,大部分DNA和蛋白质在去污剂SDS的作用下形成沉淀.而溶液三可以完成中和.
晋源区13392134335： 在质粒DNA的制备实验中溶液二为何要新鲜配制? - ？
藏水同仁：[答案] 溶液二为NaOH-SDS 溶液吧? 溶液II 这是用新鲜的0.4 N的NaOH和2%的SDS等体积混合后使用的.要新从浓NaOH稀释制备0.4N的NaOH,无非是为了保证NaOH没有吸收空气中的CO2而减弱了碱性.
晋源区13392134335： 质粒dna提取实验中的实验方法有哪些 - ？
藏水同仁： 质粒小,复性容易, 而染色体DNA大 ,不易复性;这导致两种DNA提取采用完全不同的策略.质粒dna提取,为了区分于DNA,都采用首先从混合物中分离出来,然后逐步纯化;而染色体DNA提取的策略则为逐步去除其他杂质,最后剩下的就是DNA了.质粒DNA提取方法有几种,最常见的碱裂解法利用碱变形(加溶液II)后用醋酸溶液快速复性(溶液III),这样使得质粒DNA可以复性而溶解,而GenomeDNA不能复性而沉淀,从而将他们分开.而后面的纯化如除蛋白(酚 、氯仿),除盐(75%酒精),沉淀(酒精、异丙醇等)两者类似.当然两者都有很粗略的简易提法,那就完全大相径庭啦.
晋源区13392134335： SDS碱裂解法制备质粒DNA的具体操作步骤是怎么样的 - ？
藏水同仁： 1.收菌.将菌液从试管中倒入1.5mlEP管,10000rpm/min,30s离心.离心转速不必过大时间不必过长,以免难以悬浮.必要时收两次.离心后弃上清,将残留菌液尽量扣干. 2.悬浮菌液.用200/250ul碱提Ⅰ液(确定已加入RNAse)悬浮沉淀,可在振荡器...
晋源区13392134335： 碱裂解法制备质粒dna时,溶液1,2,3中各组分都起什么作用 - ？
藏水同仁：[答案] 你的这个问题描述的不清楚,请把你的问题说清楚~否则别人没法帮助你的!在百度提问页面的顶端可以看到“我要提问”这个选项,在提问输入框中输入您的问题,或直接点击“我要提问”进入提问页,在这里您需要描述清楚...
晋源区13392134335： 质粒提取的步骤 - ？
藏水同仁： 实验一 ApaLI (178) P(BLA) ALPHA 质粒DNA的提取、 质粒DNA的提取、酶切 DNA的提取 及琼脂糖凝胶电泳 ApaLI (2367) EcoRI (397) AvaI (413)XmaI (413) SmaI (415) APr pUC19 BamHI (418) PstI (440)HindIII (448) P(LAC) ORI 2686 bp ApaLI ...
晋源区13392134335： 在质粒DNA的提取过程中,应注意哪些操作,为什么? - ？
藏水同仁： 非本人原创,转载自网络.认真看.质粒提取需要注意的提到了. 溶液I,50 mM葡萄糖 / 25 mM Tris-Cl / 10 mM EDTA,pH 8.0; 溶液II,0.2 N NaOH / 1% SDS; 溶液III,3 M 醋酸钾 / 2 M 醋酸. 让我们先来看看溶液I的作用.任何生物化学反应,首先...
