用碱裂解法提取质粒DNA的,加入溶液1,容液2,容液3后各有哪些现象,原因是什么？
溶液2中的主要成分是NaOH和SDS，是用来裂解细胞的。因为NaOH遇到二氧化碳容易反应生成碳酸氢钙，影响使用效果，因此要现配现用。SDS的话，低温容易产生沉淀。不过在37°C 水浴一下就好。主要还是NaOH的问题。
溶液1主要是让菌体细胞充分悬浊于溶液，没有什么实际意义，可以不要。
溶液2是碱液，目的在彻底破坏细胞膜，释放核酸。
溶液3是酸性钾盐溶液，目的是中和碱性并且沉淀SDS同时被沉淀的还有蛋白和大片段线性DNA。
扩展资料：
人们使用碱与SDS裂解法从E. coli（大肠杆菌）中分离制备质粒DNA已有30多年的历史。将细菌悬浮液暴露于高pH值的强阴离子洗涤剂中，会使细胞壁破裂，染色体DNA和蛋白质变性，将质粒DNA释放到上清中。
尽管碱性溶剂使碱基配对完全破坏，闭环的质粒DNA双链仍不会彼此分离，这因为它们在拓扑学上是相互缠绕的。只要OH-处理的强度和时间不要太过，当pH值恢复到中性时，DNA双链就会再次形成。
参考资料来源：百度百科-质粒抽提
sds碱法分离提取质粒dna中分离的质粒dna有几种形式
环状的质粒dna，因为只有环状的才是环状双螺旋结构，在碱裂的时候线状的基因组dna氢键破坏，双螺旋解开。而环状的质粒虽然有部分氢键被打开，但是环状结构仍保持，从而碱裂解后能跑电泳分离出来。
用碱裂解法提取质粒DNA的,加入溶液1,容液2,容液3后各有哪些现象,原因是...
在使用碱裂解法提取质粒DNA的过程中，涉及的溶液有特定的作用和现象:首先，溶液2主要由NaOH和SDS组成，其核心功能是裂解细胞。NaOH的作用在于与二氧化碳反应生成碳酸氢钙，这可能影响提取效果，因此在使用时需现配现用。SDS在低温下容易沉淀，但通过37°C的水浴可以避免。这里的主要挑战在于NaOH的处理。溶液...
碱裂解法提取质粒后 电泳拖尾严重,是什么原因
类似于溶液方面的问题一般比较容易排除，而且比较容易改正。电泳结果拖尾大部分原因与实验操作有关，在加入碱性溶液裂解细胞后操作需要轻柔，静置时间不宜过长，剧烈震荡以及静置时间过长均可导致质粒DNA断裂，电泳结果中出现拖尾现象。有什么问题可以继续追问，欢迎交流。
分子实验查漏补缺系列:SDS碱裂解法制备质粒DNA
I. 碱裂解法提取质粒DNA长期以来一直是实验室的标准技术，尽管现在有许多质粒提取试剂盒可供选择，这些试剂盒更为便捷，但它们存在一定的局限性。试剂盒中的成分是不透明的，研究者虽然知道如何使用，却不太了解每个成分的具体作用。这可能导致研究人员在遇到问题时缺乏解决问题的方向和兴趣。本文详细阐述了...
SDS碱裂解法提取质粒DNA中溶液1的成分及作用是什么?
而不是SDS，所以才叫碱法抽提。溶液Ⅲ 3M 醋酸钾 \/ 2M 醋酸 这一步的K置换了SDS（十二烷基磺酸钠）中的Na，得到PDS（十二烷基磺酸钾）沉淀；SDS易与蛋白质结合，平均两个氨基酸上结合一个SDS分子，钾钠离子置换所产生的大量沉淀自然就将绝大部分蛋白质也沉淀了，同时基因组DNA也被PDS共沉淀 ...
分子实验查漏补缺系列:SDS碱裂解法制备质粒DNA
很多年以来，碱裂解法提取质粒DNA一直是标准的方法。但现在因为有大量的质粒提取试剂盒，更方便快捷，研究人员也更喜欢用试剂盒来提取，但是试剂盒的最大问题在于试剂盒本身是一个黑盒子，只知道怎么用而不知道具体每个组分的作用。这样的研究人员缺乏对实验原理学习的兴趣，在出现问题之后也缺乏找到正确解决...
提取质粒时这样去除基因组总DNA
用碱裂解法提质粒，基因组DNA会与细胞残骸聚集，而小的质粒DNA溶在水相中，通过离心就能除去；如果还担心有少量基因组DNA污染，可以电泳后从胶中回收质粒片段；用核酸外切酶也能消化掉线性的DNA，而环形和超螺旋的质粒DNA则得以保留。
碱裂解法提取质粒DNA的电泳图谱,为何我的只有两条带?分别都是什么?_百 ...
1）选择分子量 跟你的质粒接近的marker，最理想的是包含质粒分子量在内，但据我所知没有这样的marker。2）你这个电泳图上样量太大了，一方面条带不整齐难以判断，另一方面你干嘛要纠结于几条带呢？一般说是3条带也是理论上的，但实际上，在菌体内复制的质粒就是一个连续的状态，什么样都有，电泳...
碱法分离质粒DNA的原理是什么?
去除蛋白质：如上所言，提取质粒过程中，一部分蛋白质会在碱裂解法中形成沉淀，得以去除；还有更多不能形成沉淀的蛋白质在用酚\/氯仿\/异戊醇进行抽提的过程中被去除。若有疑问，欢迎继续讨论，祝愉快！参考资料：http:\/\/wenku.baidu.com\/view\/67d818966bec0975f465e29b.html ...
碱裂解法提取质粒后 电泳拖尾严重,是什么原因?
1浓度过高无法正常电压。2提取过程因为某些因素使DNA降解
澹亮诺碧： 1.收菌.将菌液从试管中倒入1.5mlEP管,10000rpm/min,30s离心.离心转速不必过大时间不必过长,以免难以悬浮.必要时收两次.离心后弃上清,将残留菌液尽量扣干. 2.悬浮菌液.用200/250ul碱提Ⅰ液(确定已加入RNAse)悬浮沉淀,可在振荡器...
萝岗区19377611797： dna提取试验中用KAc的作用 - ？
澹亮诺碧： 碱裂解法提取质粒DNA的时候,溶液三中用的是KAc,一方面利用HAc/Ac-缓冲体系平衡溶液二中NaOH的强碱性,使DNA复性;另一方面,K+与溶液二中的SDS(结合到蛋白质上)结合生成微溶性物质,促使体系中的蛋白质以及蛋白质所连接的基因组DNA的沉降.另外,如楼上所说,pH4.8的NaAc溶液常用于配合异丙醇沉淀DNA.
萝岗区19377611797： 大肠杆菌质粒DNA如何提取?？
澹亮诺碧：碱裂解法:此方法适用于小量质粒DNA的提取,提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析.方法如下: 1、接1%含质粒的大肠杆菌细胞于2ml LB培养基. 2、37℃振荡培养过夜. 3、取1.5ml菌体于Ep管,以4000rpm离心3...
萝岗区19377611797： 提取质粒时这样去除基因组总DNA - ？
澹亮诺碧： 用碱裂解法提质粒,基因组DNA会与细胞残骸聚集,而小的质粒DNA溶在水相中,通过离心就能除去;如果还担心有少量基因组DNA污染,可以电泳后从胶中回收质粒片段;用核酸外切酶也能消化掉线性的DNA,而环形和超螺旋的质粒DNA则得以保留.
萝岗区19377611797： 在碱裂解法提取质粒DNA实验中,RNA酶可以不加入Ⅰ液,而在最后加入质粒溶液吗?如何获得更多的超螺旋质粒? - ？
澹亮诺碧：[答案] 若无特殊考虑,Rnase加入到Buffer 1,并低温保存是最好的.在最终收获的质粒中加入,会带来RNAase的污染,并会有寡核苷酸的带入,并可能降低你质粒的得率,你需要考虑是否对你后续实验有影响(是否还要去RNAase?).另一种情...
萝岗区19377611797： 质粒用碱裂解法提取过程中,加入溶液Ⅲ冰浴10分钟的目的是什么? - ？
澹亮诺碧：[答案] 使蛋白凝固、好提取上清
萝岗区19377611797： SDS碱裂解法质粒DNA小量提取最近在做质粒DNA的提取,做到最后,加入TE还有不容的沉淀,请高手指导一二, - ？
澹亮诺碧：[答案] 不知道你是手提还是试剂盒提质粒,试剂盒我没碰到过这样的状况,如果是手提,一般考虑蛋白没有除干净,如果电泳质粒没有问题,不用去管,如果后续实验对质粒要求较高,可以考虑再次除蛋白,但是质粒也会损失,或者重提质粒时,将除蛋白...
