qpcr模板浓度
pcr50ul体系怎么配
这个得看，具体的pcr实验。一般如果是基因组DNA当模板，一般50ul pcr体系用500ng基因组DNA。对于荧光定量pcr(qpcr)，一般使用20ul体系，将1ug的rna，逆转成20ul体系的cDNA，进行pcr实验时，将逆转录的20ul体系样品稀释5倍，然后每个qpcr体系中加入4ul稀释后的cDNA(每孔的cDNA终浓度为40ng)。
PCR中DNA模板浓度过高会有什么影响
有可能直接导致出不来条带，我前段时间就是因为浓度太高没出来条带
pcr实验注意的关键问题有哪些
3、模板的质量和浓度：模板是PCR实验的基础，因此模板的质量和浓度都会对实验结果产生影响。如果模板质量不好，可能会导致扩增失败或扩增出的DNA片段不完整。此外，模板的浓度也会影响扩增效率，过高的模板浓度可能会导致抑制效应，而过低的模板浓度则可能导致扩增效率低下。4、反应条件：PCR实验的反应条件...
PCR如何自我摸索条件?求解,请高人指教
PCR单一性影响最大的因素是模板和引物，好的引物设计和模板制备占了80%的功劳，而自己摸条件，这里值得摸的条件主要有：PCR程序，退火温度，退火时间，引物浓度，模板浓度，酶浓度，Mg2+浓度。PCR程序：如果你模板充足但是条带很弥散，那可以考虑TouchDown，先严格后宽松，相当于让你的目的条带有了数量上...
为什么说PCR扩增产物具有特异性?
PCR反应的延伸温度一般选择在70～75℃之间,常用温度为72℃,过高的延伸温度不利于引物和模板的结合。PCR延伸反应的时间,可根据待扩增片段的长度而定,一般1Kb以内的DNA片段,延伸时间1min是足够 的。3～4kb的靶序列需3～4min;扩增10Kb需延伸至15min。延伸进间过长会导致非特异性扩增带的出现。对低浓度模板的扩增,...
模板浓度低用什么pcr
过量DMSO显著降低模板浓度低pcr。DMSO通常经验性地用于提高PCR扩增的效率，但是过量的DMSO可以显著降低特异序列的扩增效率，尤其是导致非特异性扩增的现象却被忽视。模板浓度过低，退火温度过高，可以做个梯度PCR试一下。
PCR时人模板DNA的量加到5μg会不会有点多? 用的是TaKaRa Taq,50ul的...
5μg的确有点多，看来你的DNA原液的浓度很高，一般PCR需要的模板量是有一定范围的，也是根据你要做的分子实验所需的PCR情况而不同的，模板量太高也许会有拖带或变性不完全现象，50ul你可以试着DNA终模板量为1μg或做几个不同模板量的梯度PCR，看看哪种效果最好，得以优化DNA模板量！
20微升pcr反应体系各种反应物分别应该加多少
10×扩增缓冲液2ul，4种dNTP混合物，各200umol\/L 2ul，引物各10～100pmol 0.5ul，模板DNA 0.2ug，Taq DNA聚合酶0.2ul，Mg2+1.5mmol\/L 1.5ul，加双或三蒸水至20ul。PCR所用的酶主要有两种来源：Taq和Pfu，分别来自两种不同的噬热菌。其中Taq扩增效率高但易发生错配。Pfu扩增效率弱但有...
pcr引物浓度一般选多少?
四、注意事项 除了引物浓度，PCR反应的其他参数如模板DNA的浓度、能量参数、缓冲液的选择等也会影响PCR结果。因此，在进行PCR实验时，需要根据实际情况优化反应条件，以获得最佳结果。总之，选择合适的PCR引物浓度是确保PCR反应成功的重要步骤之一。一般选在0.2-0.5μmol\/L之间，同时需要注意其他反应条件的...
DNA能PCR出来条带的浓度应该在什么范围内
实时荧光定量PCR( realtime fluorescence quantitative PCR，RTFQ PCR) 是1996 年由美国Applied Biosystems 公司推出的一种新定量试验技术，它是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。检测指标是...
焉耆回族自治县明目回答： 我们一般不去特意检测提取的得到的模板浓度,纯度倒是要注意一下,紫外分光达到1.8即可,不过我们一般也不去检测. PCR的时候可以设置梯度,分别加0.5μl,1μl,1.5μl,2μl,2.5μl,3μl. 不要低于0.5μl,也不要高于3μl.选择几个梯度做一下看看哪个效果好就用哪个.有时候为了省钱,就直接用1μl上去P,一般问题不大,出了问题再回头做梯度也不迟. 总而言之,使得模板量在1μl左右最好.
洪宰13288215317问： 一个qpcr反应中是不是只需要一个探针引物就可以了 - ？
焉耆回族自治县明目回答： 一个qpcr反应中是不是只需要一个探针引物就可以了 一般来讲,进行real-time qPCR MasterMix都是2*的浓缩液,只需要加入模板和引物就可以.由于real-time qPCR灵敏度高,所以每个样品至少要做3个平行孔,以防在后面的数据分析中,由于...
洪宰13288215317问： 实验菜鸟求问:RT - PCR(检测mRNA的)是不是就是realtimePCR的一种啊?如果不是的话它们有什么区别呢? - ？
焉耆回族自治县明目回答： 不相同,RT-PCR是逆转录PCR,它是以RNA为模板,反转录形成DNA的PCR反应,主要是为了去除DNA中的内含子.后者是实时定量PCR,其以DNA为模板,主要是为了测定初始时模板的浓度.
洪宰13288215317问： q - pcr,关于cDNA加的多少量的问题 - ？
焉耆回族自治县明目回答： 这个没有明确的规定,一般用的最多的是1-100ng/ul(工作浓度).浓度太低和太好都会影响扩增效率,但并不是绝对的.因为有一些基因表达水平极低,有一些在特殊情况下又极高.qPCR很多时候仅仅反映的是几个样品之间的趋势,而不是绝对值.
洪宰13288215317问： PCR中DNA模板浓度过高会有什么影响 - ？
焉耆回族自治县明目回答： 有可能直接导致出不来条带,我前段时间就是因为浓度太高没出来条带
洪宰13288215317问： 如何调整实验条件优化qPCR的效率 - ？
焉耆回族自治县明目回答： 1、尽量少写 多层的for嵌套,影响效率.2、用memcache或者其他缓存技术,将常用的 数据字典数据缓存到内存中,也可以缓存到文本文件中,节省数据库连接数量及数据库的资源.3、尽可能少的去连接数据库,减少连接数量.4、数据库查询,少用select * ,建议用 select 字段1、字段2...还有很多...
洪宰13288215317问： PCR时人模板DNA的量加到5μg会不会有点多? 用的是TaKaRa Taq,50ul的反应体系 - ？
焉耆回族自治县明目回答： 5μg的确有点多,看来你的DNA原液的浓度很高,一般PCR需要的模板量是有一定范围的,也是根据你要做的分子实验所需的PCR情况而不同的,模板量太高也许会有拖带或变性不完全现象,50ul你可以试着DNA终模板量为1μg或做几个不同模板量的梯度PCR,看看哪种效果最好,得以优化DNA模板量!
洪宰13288215317问： 什么是q - RT - PCR技术 - ？
焉耆回族自治县明目回答： 【q-RT-PCR技术】就是结合了荧光定量技术的反转录PCR(反转录是以RNA为模板,通过反转录酶,合成DNA的过程,是DNA生物合成的一种特殊方式):先从RNA反转录得到cDNA(RT),然后用Real-time PCR进行定量分析(qPCR). 【...
洪宰13288215317问： 实时定量pcr的CT值在什么范围内算作合理 - ？
焉耆回族自治县明目回答： 通常情况下,我们认定为15到35CT比较合理,超过35个CT那么就算它没有扩增了,如果15之前起峰,那么就是模板浓度太高所引起的 在荧光定量PCR技术中,有一个很重要的概念 —— Ct值.C代表Cycle,t代表threshold,Ct值的含义是:每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数
洪宰13288215317问： 在进行PCR时,模板浓度会导致反应的非特异性增加,怎么理解 - ？
焉耆回族自治县明目回答： 由于模板浓度过高时,PCR体系内DNA与DNA之间,DNA与引物之间分子碰撞几率增大,所以可能会出现非特异性扩增,也会出现发卡结构
