PCR时人模板DNA的量加到5μg会不会有点多？ 用的是TaKaRa Taq，50ul的反应体系
一个PCR反应的总体积。不知道你买的是哪个公司的DNA聚合酶？比如promega和Takara的试剂盒就以50μl的反应体系为例说明各反应物应加的用量的。一般做50μl的反应体系对DNA进行扩增，可以满足做分子克隆的需求。
λ DNA 全长48502bp。 HindⅢ 消化后产生8条带：23130bp、9416bp、6557bp、4361bp、2322bp、2027bp、564bp、125bp。每条带含量就根据比例来就可以了。 上样量100ng的话，比如23130bp的含量就是100*23130/48502。所以短的条带质量低，亮度都会比较弱。
5μg的确有点多，看来你的DNA原液的浓度很高，一般PCR需要的模板量是有一定范围的，也是根据你要做的分子实验所需的PCR情况而不同的，模板量太高也许会有拖带或变性不完全现象，50ul你可以试着DNA终模板量为1μg或做几个不同模板量的梯度PCR，看看哪种效果最好，得以优化DNA模板量！试试吧，理论上一条DNA链就能PCR
木霉中糖类代谢
当优先选择的碳源存在时,其他碳源的代谢会被一种复杂而严谨的过程抑制,这就是所谓的碳代谢阻遏。为了研究木霉中碳代谢阻遏,利用兼并引物从里氏木霉(T.reesei)和哈茨木霉(T.harzianum)中克隆获得了葡萄糖阻遏基因 cre1,cre1 编码包含锌指的C2H2型DNA结合蛋白,CRE1蛋白与构巢曲霉(A.nidulans)中葡萄糖阻遏基因creA...
同源染色体非姐妹染色单体之间,发生基因交叉互换,叫做基因重组么...
基因重组是由于不同DNA链的断裂和连接而产生DNA片段的交换和重新组合,形成新DNA分子的过程。 基因重组指在生物体进行有性生殖时,控制不性状的基因的重新组合。包括非同源染色体的自由组合和同源染色体非姐妹染色单体间的交叉互换。如果考虑生物工程,则DNA重组技术也算基因重组。 误人子弟 叫基因重组!!! 高中理解基因...
世界上最坚硬的金属是什么
世界上最硬的金属∶铬 铬(Chromium)，化学符号Cr，单质为钢灰色金属。元素名来自于希腊文，原意为“颜色”，因为铬的化合物都有颜色。1797年法国化学家沃克兰(L.N.Vauquelin)在西伯利亚红铅矿（铬铅矿）中发现一种新矿物，次年用碳还原得到。铬在地壳中的含量为0.01%，居第17位。自然界不存在游离...
病毒的增值方式是什么
其复制过程分二个阶段:第一阶段,病毒核时进入胞浆后,以RNA为模板,在依赖RNA的DNA多聚酶和tRNA引物的作用下,合成负链DNA(即RNA:DNA),正链RNA被降解,进而以负链DNA为模板形成双股DNA(即DNA:DNA),转入细胞核内,整合成宿主DNA中,成为前病毒。第二阶段,前病毒DNA转录出病毒mRNA,翻译出病毒蛋白质。同样从前病毒...
肝癌的化学治疗有哪些?
帮助的人:165万 我也去答题访问个人页 关注 展开全部 肝脏治疗手段较多,首先是手术治疗,其中包括局部切除、肝脏移植和肝脏肿瘤的介入治疗,比如栓塞肝动脉,TACE术和CT引导下的微波治疗和后续的分子靶向药物治疗。当没有手术介入分子靶向治疗指征时主要进行内科的综合治疗即对症支持治疗。 已赞过 已踩过< 你对...
金属铬在自然界中的存在形式?
在生理pH值范围内不与DNA反应,它的主要毒性在于Cr(VI)被还原成Cr(III)时,由于细胞内存在其它还原性物质,使这个还原过程中产生很多中间产物,如Cr(IV)及Cr ( V)等化合物,而这些中间产物可以和DNA反应而造成DNA解旋或断裂. 铬通过三种方式如皮肤接触,食物摄人及呼吸进人人体.由于Cr(VI)具有很强的氧化性,它可...
同源重组构建质粒原理是什么?
非姐妹染色单体 之间或同一染色体上含有同源序列的DNA分子之间或分子之内的重新组合。同源重组需要一系列的蛋白质催化，如原核生物细胞内的RecA、RecBCD、RecF、RecO、RecR等，以及真核生物细胞内的Rad51、Mre11-Rad50等等。同源重组反应通常根据交叉分子或Holliday结构（Holliday Juncture Structure) 的形成...
地西他宾的MDS的治疗
治疗骨髓增生异常综合征（MDS），对于大多数诊断MDS的老年患者不适用。而小剂量化疗对中高危患者则疗效低、复发率高。地西他滨在低浓度时有去甲基化和高浓度时的细胞毒的双重作用。Wijermans等用DAC(120～225)mg\/m 总量Ci 72小时治疗29例老年高危MDS患者，总有效率52%，其中8例获CR，OS为46周。
悬赏50分!大家帮帮忙!有几道肿瘤学的名词解释和简答题帮忙答一下!谢...
? 生化学监控,检测接触的生化学终点,如DNA或蛋白质加合物,它能反央对接触相同的周围浓度起反应时人的上体差异。Biomarker? 生物标志物,任何用来检测接触致癌作用或预测癌倾向的不同生物学或生化学指标。生物标志物是预后或诊断的参数,或用于临床干预度验的中间终点。Blocking agent? 阻断剂,任何在致癌剂处理过程中...
从RNA定向互作看基因组组织
Type Ⅱ RNAs包括诸如lncRNA LUNAR1 或 Kancr 之类的例子,它们都参与染色体环化和环锚定点附近基因的...例如,我们可以估计可能具有功能的lncRNAs的数量是数万,而对功能性eRNAs或sisRNAs的表征仍为时过早,还...当前技术方案和可用数据集的另一个主要限制在于与DNA及其相互作用的RNAs相对应的测序标签相对较小。实际...
全坚盐酸： 5μg的确有点多,看来你的DNA原液的浓度很高,一般PCR需要的模板量是有一定范围的,也是根据你要做的分子实验所需的PCR情况而不同的,模板量太高也许会有拖带或变性不完全现象,50ul你可以试着DNA终模板量为1μg或做几个不同模板量的梯度PCR,看看哪种效果最好,得以优化DNA模板量!
巴彦县14728265488： PCR反应中DNA模板的量比原计划多加了会怎样 - ？
全坚盐酸： 没什么影响~但是不能太多~模板正常量要尽量少~毕竟PCR是指数扩增~
巴彦县14728265488： 我想问PCR扩增时使用的DNA模板浓度一般多大?加多少? - ？
全坚盐酸： 我们一般不去特意检测提取的得到的模板浓度,纯度倒是要注意一下,紫外分光达到1.8即可,不过我们一般也不去检测. PCR的时候可以设置梯度,分别加0.5μl,1μl,1.5μl,2μl,2.5μl,3μl. 不要低于0.5μl,也不要高于3μl.选择几个梯度做一下看看哪个效果好就用哪个.有时候为了省钱,就直接用1μl上去P,一般问题不大,出了问题再回头做梯度也不迟. 总而言之,使得模板量在1μl左右最好.
巴彦县14728265488： 测序所用模板DNA的量是如何加入的呢? ？
全坚盐酸： 【注意】(1)测序所用模板DNA的量一般按下面要求加入:模板种类/长度模板量200bp(PCR产物):16ng(120fmol)3000~5000bp(超螺旋质粒DNA):4mg(2pmol)48000bp(λ,粘粒DNA):1mg(31fmol)由于超螺旋质粒产生的信号比松弛的线性双链DNA弱,因此使用超螺旋质粒作为模板时其用量要比其它模板大一些
巴彦县14728265488： 模板DNA过高是否会导致PCR产物减少 - ？
全坚盐酸： 博凌科为-为你解答:会的.1.模板浓度过高,引物就更多的与模板结合而与PCR产物结合的少,是的前几个循环的扩增数较少;2. 过高的模板会螯合Mg离子,降低Taq酶的活性3..会产生非特异性扩增
巴彦县14728265488： pcr体系问题 - ？
全坚盐酸： 引物稀释到10μM,也就是合成过来的干粉加上它NM数值x的100倍,然后50μl里上下游引物各加1μl;10*PCR反应缓冲液 5μl,Taq酶1μl(一般说明书上有他的活性浓度,也就是多少U/μl),然后是模板体积(20-200ng,根据你模板的浓度确定体积),50μl扣去上面这些就是水的体积.如果加DMSO,10%那就应该加5μl,水就少加;退火温度普遍降低5度左右.
巴彦县14728265488： 在进行PCR时,模板浓度会导致反应的非特异性增加,怎么理解 - ？
全坚盐酸： 由于模板浓度过高时,PCR体系内DNA与DNA之间,DNA与引物之间分子碰撞几率增大,所以可能会出现非特异性扩增,也会出现发卡结构
巴彦县14728265488： 做PCR时,如果DNA模板中的一条序列是 5'ACATCGCT..........GTACCTAC3',那它的两... - ？
全坚盐酸： 首先,要考虑到DNA是双链的,那么,另外一条链就是3'TGTAGCGA.........CATGGATG5'.接下来,我们要设计的引物是5'到3'的,那么针对你写的那条链,我们设计5'到3'的引物要与右侧的互补,为5'GTAGGTAC3',其实正好与互补链一样,然后,针对我写的这条互补链,他的计5'到3'的引物便要与左侧的互补了,为5'ACATCGCT3'. 其实简单说就是上游引物就是模板链的5'到3',下游引物是其互补链的5'到3',当然了具体的引物位置要根据你的需要了.下面的就是模板链的格式: 5'ACATCGCT..........GTACCTAC3' 3'TGTAGCGA.........CATGGATG5'
巴彦县14728265488： PCR的问题,在确定PCR体系的时候,看了很多文献,对于DNA模板,有人加100ng, - ？
全坚盐酸： 模板DNA浓度主要看你的PCR扩增体系所使用的酶,一般普通的酶的话DN模板量在50到100ng都可以扩增出来的,高效一点的酶的话几ng也可以扩增出来的.
巴彦县14728265488： pcr反应体系如何选择 - ？
全坚盐酸： 你好, 标准的PCR反应体系: 10*扩增缓冲液 10ul4种dNTP混合物 各200umol/L引物 各10~100pmol模板DNA 0.1~2ugTaq DNA聚合酶 2.5uMg2+ 1.5mmol/L加双或三蒸水至 100ul PCR反应五要素: 参加PCR反应的物质主要有五种即引物...
