gapdh和actin蛋白条带
作者&投稿：大季馥 （若有异议请与网页底部的电邮联系）
缪花13731636654问： 我想做PCR内参选beta - actin还是GAPDH好 - ？
宝应县瑞健回答： 常用的蛋白内参有 beta actin 和 GAPDH,它们是有区别的 GAPDH分子量为146KD,检测条带大约在36kD,beta actin分子量为42KD.一般选择内参与要检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上另外,细胞总蛋白的Western Blot的内参蛋白一般用 beta actin ,膜蛋白的Western Blot一般用GAPDH为内参
缪花13731636654问： GADPH是什么 - ？
宝应县瑞健回答： GAPDH是参与糖酵解的一种关键酶,由4个30-40kDa的亚基组成,分子量146kDa,检测条带大约在36kDa.GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达,广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参.因为GAPDH 作为管家基因在同种细胞或者...
缪花13731636654问： western blot 的marker是怎么定的 - ？
宝应县瑞健回答： 电泳后会显示一个条带,这个散开的条带可以: 1 在SDS-PAGE中监测蛋白的迁移; 2 确认转膜效率; 3 根据marker的条带估计分子量; 4 确定目的蛋白位置.
缪花13731636654问： Western Blot为什么必须要用内参 - ？
宝应县瑞健回答： 内参作为一个参考物选用一个表达量相对稳定的蛋白,如actin,GAPDH等.不同方法处理细胞时内参的表达量不变,目的蛋白有可能会有变化.western中各泳道的内参的条带一样,那说明蛋白浓度一样.总蛋白浓度一样,目的蛋白条带宽度差异才能体现出目的蛋白表达量的差别.
缪花13731636654问： 以actin为内参,同种细胞不同处理,蛋白会产生变化吗 - ？
宝应县瑞健回答： 用内参照是为了评价你的各个上样孔内蛋白的总量是否基本一致,通常使用一些看家蛋白,比如β-actin、GAPDH等等.这些蛋白在所有细胞中的表达量基本一致,所以用他们来作为你加样量的对照.这样western结果中你的目的蛋白经过处理后...
缪花13731636654问： western blot 的内参不一致,急求助 - ？
宝应县瑞健回答： 要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot.因为Western Blot操作相对简单方便,既可以定性分析表达产物,同时还可以指示目的蛋白量的相对变化.虽然,顺利的时候Western Blot做起来...
缪花13731636654问： western里的 marker 和 内参都是做什么用的 - ？
宝应县瑞健回答： marker可以估计目的蛋白的相对大小~内参是衡量上样量是否一致的~只有上样的总蛋白量保持一致~目的蛋白含量变化才有说服力~
缪花13731636654问： 反向PCR怎么做 - ？
宝应县瑞健回答： 反向pcr(inverse pcr)反向pcr是一种多聚合酶链式反应(pcr)应用的方法,可使已知序列的核心区边侧的未知rma成几何级数扩增.用适当的限制性内切裂解含核心区的rma,以产生适合于pcr扩增大小的片段,然后片段的末端再连接形成环状分子.pcr的引物同源于环上核心区的末端序列,但其方向可使链的延长经过环上的未知区而不是分开引物的核心区.这种反向pcr方法可用于扩增本来就在核心区旁边的序.
缪花13731636654问： PCR时小鼠GAPDH扩出条带而目的基因却扩不出是什么原因? - ？
宝应县瑞健回答： 既然其他样本有结果,说明引物没有问题.而该样本GAPDH也有,说明cDNA没有问题.PCR试剂也OK.一个解释,目的基因在这个样本中表达很低.如果是做定量的话建议用real time.这样肉眼看不到的也可以由荧光探测到.
