细胞rna提取
RNA提取过程中的关键步骤及注意事项有哪些?
下面是两种提取方法,第一种适用于嫩组织或动物组织的总RNA的提取,第二种适用于老组织的提取.试剂：提取缓冲液,KAc(5M),异丙醇,无水乙醇,DEPC水 仪器：离心机,恒温水浴锅,研钵 方法一 动物、植物（嫩叶）的总RNA分离 大约2克植物组织或动物组织用液氮研磨 ↓ 加5mlTrizol裂解液 ↓ 12000rpm ,4度,...
酵母细胞基因组rna的提取
酵母细胞基因组RNA的提取一般可以按照以下步骤进行：1.提取细胞总RNA：将酵母细胞收集后用三倍体积的Trizol或RNeasy提取试剂按照说明书操作，可将总RNA提取出来。2.消化DNA：将总RNA加入DNase消化缓冲液，用DNaseI酶消化，将DNA降解掉。3.纯化RNA：将消化完DNA的RNA取出后，加入等体积的Phenol\/Chloroform...
RNA的提取方法步骤及原理.
RNA抽取一般使用Trizol法抽提:Trizol是一种总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速裂解细胞，抑制细胞释放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法进行提取组织或细胞中的RNA。Trizol作用原理:在匀质化或溶解样品中，Trizol试剂可保持RNA的完整性，同时能破坏细胞及溶解细胞成分。加入氯仿离心后，裂解液分层...
RNA的提取方法
1、酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎细胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯萃取，高速离心后取上清，所得DNA大小为100-150kb 2、甲酰胺解聚法：破碎细胞同上，然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合，再透析获得DNA可得DNA200kb左右。3、玻璃棒缠绕法：用盐酸胍裂解细胞，将裂解物铺于乙醇上，然后用带...
如何从冻存的细胞提取RNA十万火
5). 加入1\/5体积的氯仿（约200ul）,上下颠倒2~3min；6). 4℃ 16000′g离心15min，轻轻吸出上清至新的Eppendorf管（约700ul ），不要扰动中间层或用手指使Eppendorf管变温；注释：一般情况下提取的RNA已经足够，而且在逆转录过程中RNA的质量要远较RNA的数量更重要，一般仅取上清的上1\/2左右足矣...
细胞提取RNA求助
一般都用biog提取法 1. 请自行准备：无水乙醇、PBS及无RNA酶的1.5mL离心管。2. 取出析出液和洗涤液，按以下操作：a) 析出液：4.5mL加入25.5mL无水乙醇；9mL加入51mL无水乙醇。b) 洗涤液：9mL加入21mL无水乙醇；18mL加入42mL无水乙醇。c) 配制好的析出液如出现沉淀，可在37℃溶解，...
用试剂盒提细胞RNA时需做什么准备
Eppendorf管和“枪头”：RNase-free的管子和“枪头”（可以直接买到）；或者普通的ep管和“枪头”，但是需要DEPC水浸泡后，高温灭菌（121度，20-40分钟）。如果需要使用研钵和药品匙，研钵和药品匙也是需要180度，8小时以上的烘烤。还需要没开封的手套，提取RNA时，尽量勤换手套，少说话，尽量不要对着...
细胞提取RNA求助
将吸附柱放入新管中，向膜中央滴加50-100ul RNase free ddH2O，室温放置5min，12000rpm室温离心2min即得到RNA。注意事项：所有相关器皿耗材都应为RNase-free产品，操作过程要小心，带口罩、手套避免环境中RNA酶污染样品。RNA在水溶液中OD值可能在1.5-1.9之间，但这并不表示RNA不纯，需电泳检测。
如何提取单个细胞的RNA
如何提取单个细胞的RNA 首先严格说不是DNA的降解，是DNA被打断后形成的片段，因为一般DNA都很长，在操作过程中容易受外力的作用而断裂，形成片段，这是正常现象，提取中无法避免，只能尽量减少；如果是降解的话，会形成弥散形的条带，条带区分不明显；操作中注意用力要柔和，不要用力的摇晃和吹打等，所...
RNA提取分离纯化时应注意什么?
这种结构为真核mRNA的提取，提供了极为方便的选择性标志，寡聚（dT）纤维素或寡聚（U）琼脂糖亲合层析分离纯化mRNA的理论基础就在于此。 mRNA的分离方法较多，其中以寡聚（dT）-纤维素柱层析法最为有效，已成为常规方法。此法利用mRNA 3’末端含有Poly（A+）的特点，在RNA流经寡聚（dT）纤维素柱...
解放区金复回答：[答案] 分子克隆技术(华农) 实验一 质粒的制备 质粒是携带外源基因进入细菌中扩增或表达的主要载体,它在基因操作中具有重要作用.质粒的分离与提取是最常用、最基本的实验技术. 质粒的提取方法很多,大多包括3个主要步骤:细菌的培养、细菌...
益功18518075212问： 几种提取RNA的方法 - ？
解放区金复回答：[答案] 摘要:以肝脏组织和NDV感染的鸡胚尿囊液为例,简单介绍了几种提取细胞或组织液中总RNA及mRNA的方法-SOD-蛋白酶K法、异硫氰酸胍法、loigo(dT)纤维素亲和层析法.SDS-蛋白酶K法提取RNA经济可靠,但纯度稍低;异硫...
益功18518075212问： 细胞提RNA方法有哪些 - ？
解放区金复回答： 将Trizol、氯仿、冷PBS、EP管、灭酶枪头、一次性手套、EP管架、吸管等物品带入细胞室. 1、 取出EP管、做好标记 2、 取出细胞、收集上清保存备用 3、 用冷PBS冲洗细胞两次 4、 加入1ml Trizol (24孔板每孔加0.5ml即可),调小刻度用移液器吹打细胞至液体澄清(生化:摇动混匀后室温孵育10min)
益功18518075212问： 培养细胞如何提取mRNA,如何逆转录?培养细胞提取mRNA的原理是什么?如何用所提取的mRNA进行逆转录? - ？
解放区金复回答：[答案] 1 细胞总RNA的提取 1)、6孔板细胞(CNE-2)汇合度为90-100%时,取出无菌室,去其上清,用PBS洗两次后,每孔加TRIZOL试剂(Gibco公司) 1 ml,摇匀,无菌罩内消化3-5分钟(观察:液体变粘稠,细胞脱壁). 2)、将各孔内消化好的细胞裂解液...
益功18518075212问： 求TRIZOL提取RNA的详细步骤 - ？
解放区金复回答：[答案] 厚百提供:1、在提取组织RNA时,每50~100mg组织用1ml Trizol试剂对组织进行裂解;提取细胞RNA时,先离心沉淀细胞,每5-10 ╳106个细胞加1ml Trizol后,反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞.2、将组织或细胞的Trizol裂解液...
益功18518075212问： 怎样提取细胞核内的RNA - ？
解放区金复回答： a. 植物组织:取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨,把粉末加入到1ml裂解液中混匀.b. 动物组织:取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液,用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理.c. 贴壁细胞:直接在培养板中加入裂解液裂解细胞,每...
益功18518075212问： 细胞总RNA怎样提取?？
解放区金复回答：操作步骤: 将Trizol、氯仿、冷PBS、EP管、灭酶枪头、一次性手套、EP管架、吸管等物品带入细胞室. 1、 取出EP管、做好标记 2、 取出细胞、收集上清保存备用 3、 用冷PBS冲洗细胞两次 4、 加入1ml Trizol (24孔板每孔加0.5ml即可),调小刻度用移液器吹打细胞至液体澄清(生化:摇动混匀后室温孵育10min) 详细的操作步骤,生物帮上面有的, http://www.bio1000.com/zt/cell/46213.html 细胞因子,干扰素的作用,白介素价格,肿瘤坏死因子功能
益功18518075212问： 如何提取单个细胞的RNA - ？
解放区金复回答： 如何提取单个细胞的RNA 1. 首先严格说不是DNA的降解,是DNA被打断后形成的片段,因为一般DNA都很长,在操作过程中容易受外力的作用而断裂,形成片段,这是正常现象,提取中无法避免,只能尽量减少; 2. 如果是降解的话,会形成弥散形的条带,条带区分不明显; 3. 操作中注意用力要柔和,不要用力的摇晃和吹打等,所使用的枪头最好提前用剪刀斜着剪一下,使枪头孔径变大,可以保证抽吸的时候减少对DNA的剪切力; 4. 注意加入RNA酶,降解RNA;
益功18518075212问： 请教如何从培养细胞提取mRNA - ？
解放区金复回答： 离心收集细胞. 可用0.5MLltrizol,振荡--- 100微升氯仿 ,剧烈振荡,分层静置,12000RPM台式离心机 4度 10分钟--------取80%上清 ,加500微升异丙醇,沉淀总RNA,12000RPM,4度,5分钟 ----弃上清,加1ML75%冰乙醇洗涤,12000RPM,4度,5分钟------倒去吸边,空气中干燥30分钟-------加20-50微升DEPC处理的消毒三蒸水,溶解,低温保存备用.如果不保留样本,可不用DEPC处理的三蒸水,用消毒三蒸水即可则进入逆转录. 另外液体的体积可按上述比例.
益功18518075212问： 怎么提取RNA? - ？
解放区金复回答： 我们实验室用的是TRIZOL试剂盒,原理就是先组织匀浆,然后将RNA与蛋白质等分离,这个用的是戊二醇,然后再用柱子加各种溶剂,各种12000r/min离心,多次离心之后,经过洗涤干燥,再溶于DEPC水就可以冷藏了. 整个实验中要注意尽量避免实验材料与空气接触,以免被RNA酶降解其中的RNA,要知道RNA酶可是无处不在啊,还有DEPC是有毒的(一般分子实验所用的都多多少少有毒...),所以要小心~
