用TRIZOL提取RNA，最后进行琼脂糖凝胶电泳，却只看见一条带？？？是不是提的不是RNA啊？
你好，一般RNA电泳没有条带主要可能是由于RNA降解、RNA样本量太低等造成。但没具体描述步骤所以不太好判断。
根据你的说法同一批提的鱼的组织有条带，基本可以排除人为操作引起的RNA降解，所以有可能是RNA的浓度太低引起的。
不知道你在电泳前有没有测过RNA的浓度？如果有条件的话可以测一下RNA的浓度，这样比较直观。
也许是植物组织量比较少？又或者是因为植物组织没有动物组织那么松软，所以研磨没有那么充分，导致RNA释放比较少。
肯定不可能是5S，5S能看见的话，28S肯定能看见。很大可能是污染的基因组DNA。 RNA电泳中，一般28S与18S都能看见的，且28S的亮度是18S的二倍，5S不一定能看到。
这个还要看具体条带的位置，如果上样量很少，可能只能看见28s条带，大概在4.5kb左右，所以只有一条带，如果很亮的单条，并且分子量大，应该是基因组DNA，如果只是在100bp左右，只能恭喜你，提的不是总RNA，多半是gRNA和一些降解产物。总体来说，你提取的都不太好。rna跟dna不一样，主要现象就是降解
1.提取过程中rna出现降解
2.洗脱的时候洗掉了
3.18s有部分降解
4.弥散带说明降解严重，杂质过多
5.28s部分降解
rna完美提出来的话应该是三条带：28，18,
5.8
28和18比较亮
而且28是18的2倍量
5.8基本很模糊
可有可无
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如何选购trizol?
一般用×g表示。r为离心机转子半径(单位:米)。两者转换关系如下：rcf=0.0011×r×rpm^2rpm=(909×rcf÷r)^0.5以eppendorf centrifuge 5810r,F45-30-11转子为例. max rpm=1400r\/min, r=9.5cm.trizol说明书要求抽提RNA时rcf=12000×g.则所需rpm=(12000×909÷0.095)^0.5=10715r\/min.
求一篇有关绿色荧光蛋白研究的毕业论文
Trizol试剂提取HepG2GFP总RNA,紫外灯下观察,-80℃冻存备用. 同样方法提取HepG2总RNA. 取肝癌患者造血干细胞分离液,贴壁法分离单核细胞,贴壁细胞在细胞因子rhGMCSF,rhIL4作用下,诱导DCs. 倒置显微镜、电子显微镜观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞表型. 1.2.1转染树突状细胞收集培养4 d的DCs,转入6孔板,转染HepG2...
花娟壮源：[答案] 厚百提供:1、在提取组织RNA时,每50~100mg组织用1ml Trizol试剂对组织进行裂解;提取细胞RNA时,先离心沉淀细胞,每5-10 ╳106个细胞加1ml Trizol后,反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞.2、将组织或细胞的Trizol裂解液...
清河门区18592387317： trizol法提取RNA时在哪一步加入DNase来去除gDNA? - ？
花娟壮源：[答案] 如果操作得当,一般RNA产物很少有DNA污染的.如果OD比值显示有污染,可以尝试在重悬RNA团块时用含DNase I的buffer切一会儿试试,最后重新用酚氯仿异戊醇抽提一次,最后用无水乙醇沉淀再离心重悬,但是不建议重新抽提,最好从优化正常...
清河门区18592387317： trizol提取RNA时,最后的RNA为什么不能完全干燥,其干燥后不易溶解的原理是什么? - ？
花娟壮源：[答案] 最后的到RNA的上一步是酒精洗涤,提取的RNA当然不是完全干燥,提取后可以用小号枪头洗出较多的液体,剩下就在空气中自然干燥;但是太干就不容易溶解,因为太干的话RNA之间就结合的非常紧密.
清河门区18592387317： trizol方法提取RNA过程中哪一步加DNase处理 - ？
花娟壮源： 我的方法里没用DNase,效果也不错,你可以参考一下:取约5*106个细胞,经PBS洗涤后,加入800μL TRIzol,混合后室温放置5分钟,再加入196μL氯仿,振动15至30秒,室温放置2至3分钟,以4℃,12 000*g离心15分钟,小心将上层液体转移至新管中,加入500μL的异丙醇,轻弹使其混匀,室温放置20分钟,以4℃,12 000*g离心15分钟,此时RNA沉淀于管底形成胶状小球,弃掉上清,用75%的乙醇清洗RNA沉淀,以4℃,8 000*g离心5分钟,弃掉上清,快速干燥RNA,加入30至50μL无RNA酶的水溶解RNA,用紫外分光光度计测量RNA浓度及OD260与OD280的比值.
清河门区18592387317： trizol方法提取RNA过程中哪一步加DNase处理 - ？
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清河门区18592387317： 想请教用过Trizol法提取RNA,且结果比较理想的详细步骤及注意事项,是否可以共享一下,谢谢 - ？
花娟壮源： 我这边刚好在做,给你说下: 贴壁细胞的话去培养液,PBS洗一遍,加Trizol吹打下来.组织的话,在液氮里面捣碎,然后粉末放进Trizol,用超声粉碎器粉碎(超声每3秒,停10秒冷却,直到看不见组织碎末). (此步骤可以-80oC冻存,下面...
清河门区18592387317： 怎样用TRIzol 法提取动物血清总RNA - ？
花娟壮源： 1、将组织在液氮中磨成粉末后,再以50-100mg组织加入1ml的Trizol液研磨;每2E6个细胞加入1mLTrizol.注意样品总体积不能超过所用Trizol体积的10%.2、研磨液室温放置5min,然后以每1ml Trizol液加入0.2ml的比例加入氯仿,盖紧离心管...
清河门区18592387317： trizol法提完rna后怎么纯化mrna - ？
花娟壮源： 有专门的试剂盒,这个一般都是买的,用oligo(dT)亲和mRNA(polyA结构).
清河门区18592387317： trizol法提取血中的RNA,怎样做量会更多 - ？
花娟壮源： 或再适当延长一点时间.迅速离心,少加些血.混匀之后放置10分钟左右,混匀再去离心. 可以不用先离心去沉淀之后再加三氯甲烷1 血要新鲜,之后加75%乙醇.只洗一遍. 3 每个步骤操作要快,用的时间药短些,防止降解 4 异丙醇沉淀的时候,放-20°C的冰箱半个小时.一般我都加的30.如果需要浓度高点可以少加水. 6 提取RNA之后迅速反转录成cDNA再保存,洗2遍易损失部分RNA.如果是冻存的,在解冻时要完全,之后再加Trizol. 2 可以稍多加一些Trizol,直接加三氯甲烷.干燥一会就迅速加DEPC水少量. 5 不要过分干燥,管内稍有点残余的乙醇也没关系
清河门区18592387317： trizol提取烟草组织100mg叶片总RNA,最终浓度大概多少?30ul溶解RNA.每次提的OD260/OD280较低, - ？
花娟壮源：[答案] 我做过Trizol法提取RNA实验,在这方面之前也有困惑,不过查了很多资料后才知道:Trizol提取的RNA用DEPC处理的水溶解的话,A280/A260比值为1.4、1.5左右比较正常,若用TE溶解的话,其比值≥1.8.不知道你的OD260/OD280较低,是不是因...
