提取桃果实RNA的方法

有没有提过苹果、桃子、枇杷、猕猴桃任一一种水果RNA的啊？跪求方法，一定要是亲自做出来的。拜谢。~

我自己设想的,先上网站上找某一个水果的DNA片断在找DNA合成仪合成在在培养皿中培养加点原料和酶,适宜的条件就OK了,听说美国最近这么玩的挺多,不过是自己合成转基因的东西

你这个是多糖样品，华越洋生物的多糖植物RNA提取试剂盒，可以很好的提出来。

试剂: 异硫氰酸胍提取剂: 4 mol/L 异硫氰酸
胍、25 mmol/L 柠檬酸三钠、1.5%十二烷基硫酸钠、
1 mol/L β- 巯基乙醇、V( 氯仿) ∶V( 异戊醇) =49∶1、
2 mol/L 醋酸钠( pH 5.2) 、5 mol/L 醋酸钾。以上所
有试剂均为分析纯。PCR 试剂以及用于RNA 逆转
录的试剂盒为Promega 公司产品。
1.2 方法
1.2.1 RNA 的提取取新鲜猕猴桃果实3 g 置于
预冷的研钵中, 加入液氮, 迅速研磨成均匀的粉
末, 研磨得越细越好; 将粉末全部移入3 个冰上预
冷的7 mL 离心管中, 每管加入2.4 mL 异硫氰酸
胍提取剂( 临用时加入1/10 体积的巯基乙醇) , 再
加入1/10 体积的醋酸钾、1/4 体积的100%冰乙醇
及1/10 体积的醋酸钠, 上下颠倒几次使离心管内
溶液混合均匀, 再加入1.2 mL 的水饱和酚及1.2
mL 氯仿- 异戊醇, 上下颠倒几次, 混匀, 在冰上放
置5 min, 于12 000 r/min 离心10 min; 取上清液,
加入等量的水饱和酚及氯仿- 异戊醇, 于12 000 r/
min 离心10 min; 取上清液, 加入等量的异戊醇,
于- 20 ℃沉淀1 h, 随后以18 000 r/min 离心18
min; 吸净上清液, 用适量的75%乙醇洗涤沉淀, 以
12 000 r/min 离心5 min; 吸净上清液, 在通风处吹
干, 然后将沉淀溶于适量的DEPC 处理过的灭菌
蒸馏水中, 经电泳检测后分装。按照同样的方法提
取番茄果实的RNA。
1.2.2 cDNA 单链的合成首先在PCR 管中加入
经上述检测合格的猕猴桃果实总RNA 2 μL ( 约
1 μg) , 于70 ℃温育10 min 以破坏RNA 的二级结
构, 立即冰浴2 min, 离心, 将管内液体收集至管
底; 建立20 μL 反转录体系, 在冰上依次加入下
列试剂: 5×RT 缓冲液4 μL、20 u/μL RNA 酶抑制
剂0.5 μL、10 mmol/L dNTPs 2 μL、15 u/μL AMV
反转录酶1 μL, 最后用DEPC 处理的无菌水调至
20 μL; 离心, 将管内液体收集至管底, 于42 ℃保
温1 h, 然后在95 ℃加热5 min 以灭活反转录酶,
立即冰浴5 min, 贮于- 20 ℃备用。
1.2.3 PCR 扩增猕猴桃果胶甲基酯酶抑制剂基因
根据GeneBank 中已发表的猕猴桃果胶甲基酯
酶抑制剂基因序列, 设计合成了1 对特异引物: 上
游: 5′- ATGGCCTTTTCCTATTG- 3′; 下游: 5′-
TAGCCACAACTGGACAT- 3′。以上述合成的cDNA
单链为模板, 进行PCR 扩增反应。在PCR 管
中依次加入下列试剂: 10×PCR 缓冲液2.5 μL、
dNTPs 0.5 μL、cDNA 模板0.5 μL、上游引物及下
游引物各1 μL、Taq DNA 聚合酶0.5 μL, 最后加
入灭菌的无核酶蒸馏水至25 μL。经离心混匀后,
放入PCR 仪中进行扩增。扩增条件: 95 ℃预热
5 min; 94 ℃变性5 min; 45.2 ℃复性30 s; 72 ℃结
合30 s, 共35 个循环。之后, 在72 ℃延伸10 min,
最后于4 ℃保温1 h。用1%琼脂糖凝胶电泳检查
PCR 扩增产物。
2 结果与分析
2.1 猕猴桃和番茄总RNA 质量分析
将所提取的猕猴桃和番茄的总RNA 经琼脂
糖凝胶电泳分析, 可在胶上清晰地看到两条分离
的带, 即28 S rRNA 和18 S rRNA, 如图1 所示。
在提取过程中RNA 没有降解, 完整性较好, 可作
为反转录的模板。这种方法不但可以成功地提取
猕猴桃的RNA, 还可以提取番茄的RNA, 因此适
用于富含多糖的植物果实的总RNA 的提取。
2.2 PCR 扩增猕猴桃果胶甲基酯酶抑制剂基因
kwPMEI 全序列
用提取的总RNA 合成cDNA 后, 以该cDNA
为模板, 以猕猴桃果胶甲基酯酶抑制剂基因序列
设计合成1 对特异引物, 进行PCR 扩增反应。通
过琼脂糖凝胶电泳分析, 在500 bp 偏上有1 条
带, 如图2 所示。猕猴桃果胶甲基酯酶抑制剂基因
序列含有589 bp, 这与该条带的位置基本吻合, 说
明所获得的cDNA 可成功地用作PCR 扩增反应
的模板。

提取RNA 过程中需要注意的问题
在所有操作步骤中应防止RNA 酶产生的污
染。具体的预防措施是: 将用过的移液器头等塑料
制品于121 ℃高压灭菌1 h; 玻璃仪器、研钵及研
棒、金属制品放在200 ℃烘箱中干燥2 h; 所有的
溶液用0.1% DEPC 水配制; 在提取过程中戴上手
套、口罩, 以防止人体RNA 酶的污染; 划分专门的
区域, 用过的化学试剂和用品不要再作其它用途;
所提取的RNA 经电泳检测合格后, 在条件允许的
情况下, 应立即进行反转录, 因为RNA 的反复冻
融会影响其质量; RNA 于- 80 ℃条件下贮存。

提取猕猴桃果实总RNA 的新方法 中国食品学报 梅晓宏高红岩罗云波
( 中国农业大学食品科学与营养工程学院北京100083)

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安吉县15218699035： 植物RNA 的提取 - ？
秦兔三辰： 不会一点RNA都没有,但是这样的做法不好,放冰箱的降温速率有限,RNA会有变化.RNA最好新鲜提取,即便不能新鲜提取,也要用液氮深度冷冻一下再放-80冰箱保存.

安吉县15218699035： RNA提取用什么方法,具体的步骤?？
秦兔三辰：1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理.样品体积不应超过TRIzol体积10℅. b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用...

安吉县15218699035： RNA提取的关键步骤是??? - ？
秦兔三辰： 我只知道DNA的 析出含DNA的黏稠物:蒸馏水300mL,逆时针方向搅拌,缓慢搅拌..朝一个方向..避免DNA折断

安吉县15218699035： 植物RNA提取方法有哪些 - ？
秦兔三辰： 植物提取物的提取方法 目前提取植物提取物常用的方法有溶剂提取法、超声波提取法、微波提取法和酶提取法,而超临界流体萃取法、微波辅助提取法等则作为新的提取技术被广泛使用. 溶剂提取法 溶剂提取法是用溶剂从固体原料中提取有效...

安吉县15218699035： 怎么提取RNA? - ？
秦兔三辰： 我们实验室用的是TRIZOL试剂盒,原理就是先组织匀浆,然后将RNA与蛋白质等分离,这个用的是戊二醇,然后再用柱子加各种溶剂,各种12000r/min离心,多次离心之后,经过洗涤干燥,再溶于DEPC水就可以冷藏了. 整个实验中要注意尽量避免实验材料与空气接触,以免被RNA酶降解其中的RNA,要知道RNA酶可是无处不在啊,还有DEPC是有毒的(一般分子实验所用的都多多少少有毒...),所以要小心~

安吉县15218699035： 求助QIAGEN试剂盒提取总RNA的步骤 - ？
秦兔三辰： 总RNA提取试剂盒步骤: 1. 样品处理:a. 植物组织:取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨,把粉末加入到1ml裂解液中混匀. b. 动物组织:取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液,用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理. c. 贴壁细胞:...

安吉县15218699035： RNA的提取步骤是什么 - ？
秦兔三辰： 去买生物公司的RNA提取试剂盒,这样比自己配试剂提取出来的要纯净的多,量也多,还方便.买了不同量的提取试剂盒后,上面会有操作步骤

安吉县15218699035： rna提取过程中的关键步骤及注意事项有哪些 - ？
秦兔三辰： 注意枪头管子里的RNA酶,注意你唾沫星子皮肤上存在的RNA酶,注意各种试剂中存在的RNA酶. 重要的事情说三遍. 剩下就是最后一步吸干点,吹干点,但别吹太过了.

安吉县15218699035： RNA病毒的提取方法 - ？
秦兔三辰： 1、 TROzlo试剂、氯仿、75%乙醇(0.1% DEPC配制). 2、 塑料器皿需用0.1% DEPC水浸泡. 3、 0.1%DEPC水:100ml dd水中加入DEPC0.1ml,充分振荡,37℃孵育12h以上,121℃高压灭菌20min,于4℃保存. 1、 样品处理 (1) 组织...

安吉县15218699035： RNA的提取方法步骤及原理. - ？
秦兔三辰：[答案] 分子克隆技术(华农) 实验一 质粒的制备 质粒是携带外源基因进入细菌中扩增或表达的主要载体,它在基因操作中具有重要作用.质粒的分离与提取是最常用、最基本的实验技术. 质粒的提取方法很多,大多包括3个主要步骤:细菌的培养、细菌...