高中测定微生物数量的方法

微生物计数方法有哪些~

测定微生物计数的方法有很多,主要有以下几种：
1.血细胞计数法
将稀释的菌液样品滴在血细胞计数板上,在显微镜下计算4~5个中格的细菌数,并求出每个小格所含细菌的平均数,再以此为依据,估算总菌数.
①此法的缺点是不能区分死菌和活菌.
②对压在小方格界线上的细菌,应当取平均值计数.
③此法可用于测定培养液中酵母菌种群数量的变化
2.稀释涂布平板法
原理：每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条件下可以通过生长形成菌落.培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌.
①这一方法常用来统计样品中活菌的数目
②统计的菌落数往往比活菌的实际数目低,原因是当两个活多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落.因此统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示.
③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含细菌、酵母、芽孢与孢子等的数量均可用此法测定.但不适于测定样品中丝状体微生物,例如放线菌或丝状真菌或丝状蓝细菌等的营养体等.
④此法若不培养成菌落,可通过将一定量的菌液均匀地涂布在玻片上的一定面积上,经固定染色后在显微镜下计数,这样又称涂片计数法.染色可用台盼蓝,台盼蓝能使死细胞染成蓝色,可分别计数死细胞和活细胞.
3.滤膜法
滤膜法是当样品中菌数很低时,可将一定体积的湖水、海水或饮用水灯样品通过膜过滤器.然后将滤膜干燥、染色,并经处理使膜透明,再在显微镜下计算膜上（或一定面积上）的细菌数.
此法也可以通过培养观察形成的菌落数来推算样品中的菌数.例如测定饮用水中大肠杆菌的数目：将已知体积的水过滤后,将滤膜放在伊红美蓝培养基上培养.在该培养基上大肠杆菌的菌落呈现黑色,可根据培养基上黑色菌落的数目,计算出水样中大肠杆菌的数目.
此法也是统计样品中活菌的数目.
4.比浊法
原理是在一定范围内,菌是悬液中细胞浓度与混浊度成正比,即与光密度成正比,菌越多,光密度越大.因此可借助与分光光度计,在一定波长下,测定菌悬液的光密度,以光密度表示菌量.实验测量时一定要控制在菌浓度与光密度成正比的线性范围内,否则不准确.
5.显微镜直接计数法
在课本生物选修1生物技术实践P22中“除了上述活菌计数法外,显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法.”这里说的显微镜直接计数,我认为应该是在稀释涂布的基础上不培养成菌落而通过染色的方法在显微镜下直接计数.再如滤膜法也一样,可以有两种情况.
另外,微生物计数法发展迅速,多种多样的快速、简易、自动化的仪器和装置等方法可以用来统计微生物的数目.

1、计数器测定法：
　　即用血细胞计数器进行计数。取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室内，用显微镜观察计数。由于计数室的容积是一定的(O.1mm3)，因而根据计数器刻度内的细菌数，可计算样品中的含菌数。本法简便易行，可立即得出结果。
　　本法不仅适于细菌计数，也适用于酵母菌及霉菌孢子计数。
　　2、电子计数器计数法:
　　电子计数器的工作原理是测定小孔中液体的电阻变化，小孔仅能通过一个细胞，当一个细胞通过这个小孔时，电阻明显增加，形成一个脉冲，自动记录在电子记录装置上。
　　该法测定结果较准确，但它只识别颗粒大小，而不能区分是否为细菌。因此，要求菌悬液中不含任何碎片。
　　3、活细胞计数法
　　常用的有平板菌落计数法，是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的。取一定容量的菌悬液，作一系列的倍比稀释，然后将定量的稀释液进行平板培养，根据培养出的菌落数，可算出培养物中的活菌数。此法灵敏度高，是一种检测污染活菌数的方法，也是目前国际上许多国家所采用的方法。使用该法应注意：①一般选取菌落数在30～300之间的平板进行计数，过多或过少均不准确；②为了防止菌落蔓延，影响计数，可在培养基中加入O．001％2，3，5一氯化三苯基四氮唑(TTC)；③本法限用于形成菌落的微生物。
　　广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验，是最常用的活菌计数法。　
　　4、比浊法
　　比浊法是根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量。细菌悬浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比，与光密度成正比，所以，可用光电比色计测定菌液，用光密度(OD值)表示样品菌液浓度。
　　此法简便快捷，但只能检测含有大量细菌的悬浮液，得出相对的细菌数目，对颜色太深的样品，不能用此法测定。
　　5、测定细胞重量法
　　此法分为湿重法和干重法。湿重法系单位体积培养物经离心后将湿菌体进行称重；干重法系单位体积培养物经离心后，以清水洗净放人干燥器加热烘干，使之失去水分然后称重。
　　此法适于菌体浓度较高的样品，是测定丝状真菌生长量的一种常用方法。
　　6、测定细胞总氮量或总碳量
　　氮、碳是细胞的主要成分，含量较稳定，测定氮、碳的含量可以推知细胞的质量。此法适于细胞浓度较高的样品。
7、颜色改变单位法（colour change unit,简称CCU）
这种方法通常用于很小，用一般的比浊法无法计数的微生物，比如支原体等，因为支原体的液体培养物是完全透明的，呈现为清亮透明红色，因此无法用比浊法来计数，由于支原体固体培养很困难，用cfu法也不容易计数，因此需要用特殊的计数方法，即CCU法。它是以微生物在培养基中的代谢活力为指标，来计数微生物的相对含量的，下面以解脲脲原体为例，简单介绍其操作：
（1）.取12只无菌试管，每一管装1.8ml解脲脲原体培养基。
（2）.在第一管加入0.2ml待测解脲脲原体菌液，充分混匀，从中吸取0.2ml加入第二管，依次类推，10倍梯度稀释，一直到最末一管
（3）.于37度培养，以培养基颜色改变的最末一管作为待测菌液的CCU，也就是支原体的最大代谢活力，比如第六管出现颜色改变，他的相对浓度就是10的6次方CCU/ml.
一般来说，比浊法和菌落计数法就可以满足绝大多数细菌的计数，但是对支原体这样比较特殊的微生物，用CCU法比较合适。
　　测定微生物生长的方法很多，各种方法均有其优缺点，也不是在任何情况下都适用。在微生物学工作中一般常用的是平皿菌落计数法、计数器法和比浊法。至于哪种方法比较适合你，得根据你的具体条件而定。

1、直接计数法：常用的是显微镜直接计数法，这种方法是先将待测样品制成悬浮液，然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数。根据在显微镜下观察到的微生物数目来计算出单位体积内的微生物总数。直接计数法所需设备简单，可迅速得到结果，而且在计数的同时能观察到所研究的微生物的形态特征，其缺点是难以计数微小的细菌。这种方法一般适用于培养悬浮液中各种单细胞细菌体的计数。
2、间接计数法：最常用的是稀释平板计数法，它是根据微生物的培养特征而设计的技术方法。这种方法在样品中含菌数较少的情形下，也可以完成计数。应用稀释平板计数法计数是，需要将待测样品配制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开。再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内；或是将一定量的稀释液，与融化后冷却至45°C左右的琼脂培养基混合，倾入无菌培养皿中，摇匀、静置待凝。经过培养后，就由单个微生物生长繁殖形成一个菌落，这样的一个菌落就代表一个微生物个体，统计培养基中出现的菌落数，即可推算出检测样品中的活菌数。

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萧山区17729347321： 高中测定微生物数量的方法 - ？
掌君血脂：[答案] 1、直接计数法:常用的是显微镜直接计数法,这种方法是先将待测样品制成悬浮液,然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数.根据在显微镜下观察到的微生物数目来计算出单位体积内的微生物总数.直接计数法所需设备简单,可...

萧山区17729347321： 微生物计数方法有哪些? - ？
掌君血脂：[答案] 测定微生物细胞数目的方法有很多,介绍几种 1.血细胞计数法 将稀释的菌液样品滴在血细胞计数板上,在显微镜下计算4~5个中格的细菌数,并求出每个小格所含细菌的平均数,再以此为依据,估算总菌数. ①此法的缺点是不能区分死菌和活菌. ②对...

萧山区17729347321： 我们有什么办法测量微生物生物量 - ？
掌君血脂：[答案] 1.直接计数测定 根据微生物种类,有血球计数板和细菌计数板;或者用电子计数器计数 2.比浊法 根据菌悬液的浓度在一定范围内与光密度成正比,可以用分光光度计测OD值,用OD值表示样品菌液浓度 3.核酸计数法 荧光定量PCR技术 4.活菌计数法 ...

萧山区17729347321： 高二生物:分解菌方法,测定细菌数量方法,获取单菌落方法.越全越好 - ？
掌君血脂： 现在用的多的就是这几种,楼主挑着看吧细菌计数1.计数器测定法: 即用血细胞计数器进行计数.取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室内,用显微镜观察计数.由于计数室的容积是一定的(O.1mm3),因而根据计数器刻度...

萧山区17729347321： 测量微生物生长的方法有哪些? - ？
掌君血脂：[答案] 测生长量:直接法有粗放的测体积法(在刻度离心管中测沉降量)和精细的测干重法,间接法有比浊法(即用分光光度法对无色的微生物悬浮液进行测定)和生理指标法(测含氮量法,测含碳量和测磷) 计繁殖数:直接法指用记数板(例如雪球计数...

萧山区17729347321： 能够测定样品活菌数的方法是() - ？
掌君血脂：[选项] A. 稀释涂布平板法 B. 直接计数法 C. 重量法 D. 比浊法

萧山区17729347321： 常用的测定微生物细胞量和细胞数的方法 - ？
掌君血脂：[答案] 直接计数法 液体稀释法 平板菌落计数法 比浊法 干重法

萧山区17729347321： 如何测定微生物的数量红细胞计数法是怎么回事?还有什么平板划线法,稀释涂布法是用来计数的吗? - ？
掌君血脂：[答案] 红细胞计数法是用显微计数板来在显微镜下计算红细胞的密度. 平板划线法是分离微生物的方法,并不是计数方法. 稀释涂布法是用来计数的.

萧山区17729347321： 测定微生物生长量的方法有几种 - ？
掌君血脂： v常用测定微生物生长的方法有:1)称干重法.可用离心法或过滤法测定.优点:可适用于一切微生物,缺点:无法区别死菌和活菌.2)比浊法.原理:由于微生物在液体培养时,原生质的增加导致混浊度的增加,可用分光光度计测定.优点...