如何测定土壤中特定细菌的数量？

如何测定土壤中特定细菌的数量？~

直接计数法和稀释平板计数法是测定微生物数量的常用方法.
测量土壤中微生物，一般采用平板计数法，因为直接计数法只能依靠肉眼在显微镜下观察，误差较大。
1、采集特定地区的土壤作为待测样品。
2、要将待测样品配制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开。
3、再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内； 或是将一定量的稀释液，与溶化后冷却至45℃左右的琼脂培养基混合，倾入无菌培养皿中，摇匀、静置待凝。（选用细菌培养基：牛肉膏、蛋白胨、琼脂、氯化钠）
4、经过培养后，就由单个微生物生长繁殖形成菌落，这样的一个形态的菌落就代表着一个微生物个体。统计培养基中出现的菌落数，即可推算出检测样品中的活菌数。

显微镜直接计数法和稀释平板计数法是测定微生物数量的常用方
法。
直接计数法中常用的是显微镜直接计数法，这种方法是先将待
测样品制成悬液，然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数(图1-
3-1)。根据在显微镜下观察到的微生物数目来计算出单位体积内的微
生物总数。直接计数法所需设备简单，可迅速得到结果，而且在计数
的同时能观察到所研究微生物的形态特征，其缺点是难以计数微小的
细菌。这种方法一般适用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数。
间接计数法最常用的是稀释平板计
数法，它是根据微生物的培养特征而设计
的计数方法。这种方法在样品中含菌数较
少的情形下，也可以完成计数。
应用稀释平板计数法计数时，需要
将待测样品配制成均匀的系列稀释液，尽
量使样品中的微生物细胞分散开。再取一
定稀释度、一定量的稀释液接种到平板
中，使其均匀分布于平板中的培养基内；
或是将一定量的稀释液，与溶化后冷却至
45℃左右的琼脂培养基混合，倾入无菌培
养皿中，摇匀、静置待凝。经过培养后，
就由单个微生物生长繁殖形成菌落，这样
的一个菌落就代表着一个微生物个体。统
计培养基中出现的菌落数，即可推算出检
测样品中的活菌数。

FOR EXAMPLE:]
土壤中好气性细菌的计数
土壤中生活的微生物种类和数量是极其丰富的，这些数量众多的
微生物对提高土壤肥力有重要作用。因此，测定土壤中的含菌量可以
作为判定土壤肥力的一个重要指标。
材料器具
土壤样品；牛肉膏蛋白胨琼脂培养基(附录二)、无菌水；培养皿、
移液管、天平、锥形瓶、试管、酒精灯、恒温培养箱、摇床等。
活动程序
1.制备土壤稀释液
取土壤表层5～10 cm 处的土样。准确称取1 g 土样，放入盛有
99 mL 无菌水的锥形瓶(250 mL，放有小玻璃珠)中，用手或摇床振荡
20 min，即制成102 倍的稀释液。
用1 mL无菌移液管，吸取10 2倍稀释液0.5 mL，移入装有4.5 mL
无菌水的试管中，配制成103 倍稀释液。
用同样的方法可制成稀释倍数为104、105、106 的系列稀释菌液
(图1-3-2)。
图

移液时，要将移液管插入液面，吹吸3 次，每次吸上的液面要高
于前一次，让菌液混合均匀并减少稀释中的误差。每配一个稀释度要
换用一支移液管。
2.取样及倒平板
将无菌培养皿编号，依次为104、105、106，每一号码设置三个
重复。
用无菌移液管三支，分别吸取稀释倍数为104、105、106的土壤稀释
液各0.2 mL，注入到相应编号的培养皿中(每个稀释倍数各三个培养皿)。
将已灭菌牛肉膏蛋白胨琼脂培养基溶化，待冷却至45～50 ℃左
右，倾入到无菌培养皿中，每皿约15 mL，轻轻转动培养皿，使土壤
稀释液与培养基混合均匀。
3.培养
将上述接种好的平板培养基冷却后，倒置放入28～30 ℃的恒温
培养箱中培养24～36 h，直至长出菌落为止。
4. 观察记录
将实验中得到的菌落数填入表1-3-1。
结果分析
1.选取具有合适菌落数的稀释倍数并计数。
在计算结果时，从接种的3 个稀释度中选择一个合适稀释倍数，
统计出菌落数(图1-3-3)。选择的原则是：
过

(1) 细菌、放线菌、酵母菌以每个培养皿内有30～300 个菌落为
宜。霉菌以每个培养皿内有10～100 个菌落为宜。
(2) 同一稀释倍数各个重复的菌落数相差不太悬殊。
2.将统计出的菌落数按下列公式计算，得出每克样品菌数。
每克土壤样品菌数= 某稀释倍数的菌落平均数×稀释倍数

显微镜直接计数法和稀释平板计数法是测定微生物数量的常用方法。直接计数法中常用的是显微镜直接计数法，这种方法是先将待测样品制成悬液，然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数(图1-3-1)。根据在显微镜下观察到的微生物数目来计算出单位体积内的微生物总数。直接计数法所需设备简单，可迅速得到结果，而且在计数的同时能观察到所研究微生物的形态特征，其缺点是难以计数微小的细菌。这种方法一般适用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数。间接计数法最常用的是稀释平板计数法，它是根据微生物的培养特征而设计的计数方法。这种方法在样品中含菌数较少的情形下，也可以完成计数。应用稀释平板计数法计数时，需要将待测样品配制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开。再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内；或是将一定量的稀释液，与溶化后冷却至45℃左右的琼脂培养基混合，倾入无菌培养皿中，摇匀、静置待凝。经过培养后，就由单个微生物生长繁殖形成菌落，这样的一个菌落就代表着一个微生物个体。统计培养基中出现的菌落数，即可推算出检测样品中的活菌数。FOR EXAMPLE:] 土壤中好气性细菌的计数土壤中生活的微生物种类和数量是极其丰富的，这些数量众多的微生物对提高土壤肥力有重要作用。因此，测定土壤中的含菌量可以作为判定土壤肥力的一个重要指标。材料器具土壤样品；牛肉膏蛋白胨琼脂培养基(附录二)、无菌水；培养皿、移液管、天平、锥形瓶、试管、酒精灯、恒温培养箱、摇床等。活动程序1.制备土壤稀释液取土壤表层5～10 cm 处的土样。准确称取1 g 土样，放入盛有99 mL 无菌水的锥形瓶(250 mL，放有小玻璃珠)中，用手或摇床振荡20 min，即制成102 倍的稀释液。用1 mL无菌移液管，吸取10 2倍稀释液0.5 mL，移入装有4.5 mL无菌水的试管中，配制成103 倍稀释液。用同样的方法可制成稀释倍数为104、105、106 的系列稀释菌液(图1-3-2)。图移液时，要将移液管插入液面，吹吸3 次，每次吸上的液面要高于前一次，让菌液混合均匀并减少稀释中的误差。每配一个稀释度要换用一支移液管。2.取样及倒平板将无菌培养皿编号，依次为104、105、106，每一号码设置三个重复。用无菌移液管三支，分别吸取稀释倍数为104、105、106的土壤稀释液各0.2 mL，注入到相应编号的培养皿中(每个稀释倍数各三个培养皿)。将已灭菌牛肉膏蛋白胨琼脂培养基溶化，待冷却至45～50 ℃左右，倾入到无菌培养皿中，每皿约15 mL，轻轻转动培养皿，使土壤稀释液与培养基混合均匀。3.培养将上述接种好的平板培养基冷却后，倒置放入28～30 ℃的恒温培养箱中培养24～36 h，直至长出菌落为止。4. 观察记录将实验中得到的菌落数填入表1-3-1。结果分析1.选取具有合适菌落数的稀释倍数并计数。在计算结果时，从接种的3 个稀释度中选择一个合适稀释倍数，统计出菌落数(图1-3-3)。选择的原则是：过(1) 细菌、放线菌、酵母菌以每个培养皿内有30～300 个菌落为宜。霉菌以每个培养皿内有10～100 个菌落为宜。(2) 同一稀释倍数各个重复的菌落数相差不太悬殊。2.将统计出的菌落数按下列公式计算，得出每克样品菌数。每克土壤样品菌数= 某稀释倍数的菌落平均数×稀释倍数

测细菌数量首先得是新鲜的土壤
你把样品调成泥浆取上清液，再稀释在无菌培养基上点样培养
一周后取出培养基观察菌落数，再乘以稀释倍数

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井冈山市19118997952： 如何测定土壤中特定细菌的数量? - ？
尉迟贾复方： 直接计数法和稀释平板计数法是测定微生物数量的常用方法.测量土壤中微生物,一般采用平板计数法,因为直接计数法只能依靠肉眼在显微镜下观察,误差较大.1、采集特定地区的土壤作为待测样品.2、要将待测样品配制成均匀的系列稀...

井冈山市19118997952： 如何测定土壤中特定细菌的数量?举例说明其技术路线 - ？
尉迟贾复方：[答案] 显微镜直接计数法和稀释平板计数法是测定微生物数量的常用方法.直接计数法中常用的是显微镜直接计数法,这种方法是先将待测样品制成悬液,然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数(图1-3-1).根据在显微镜下观察到的微...

井冈山市19118997952： 如何计算土壤微生物的菌数 - ？
尉迟贾复方： 计算土壤微生物数量,常见的有两种方法,一种是传统的培养法,即平板法,将一定质量的土壤制成悬浮液,稀释后涂到培养基上,培养18-24h,在显微镜下找菌落数目,乘以稀释倍数,粗略估算细菌数量.但这种方法只能得到可培养的微生物数目,仅占土壤总细菌的1%,另外99%的微生物是不可培养的,用这种方法得到的值只是参考数值; 第二种方法是高通量测序的方法,提取土壤总DNA,通过测定土壤中所有DNA的碱基序列,与细菌的碱基序列数据库比对,得到细菌的名称(操作分类单位,OTU),根据序列的条数大概估算这类微生物所占的比例.但这种方法无法区分死亡的细菌和活着的细菌,也有一定的局限性.

井冈山市19118997952： 土壤微生物数量的测定方法 - ？
尉迟贾复方： 取一定重量的土壤,称取1g,置于100ml无菌水中,充分振荡,然后离心,取上清液,就得到土壤浸出液(可以看做土壤中的微生物全部转移至水中).然后做梯度稀释,取一定稀释度的溶液,涂平板,培养后数菌落数,然后乘上稀释倍数,就可得到1g土壤中该微生物的数量. 例如,你在稀释10的7次方的平板上数出了15个菌落,则1g土壤中微生物数量为1.5*10的8次方个.

井冈山市19118997952： 新手求助土壤中某种微生物数量如何测定 - ？
尉迟贾复方： 这太简单啦.你加的细菌.你一定知道细菌的种类了,取土,做菌悬液,用选择培养基做个活菌计数就可以了.你需要注意是,你同事需要测对照(没有加菌的土壤)中的菌数.得到一个基准值

井冈山市19118997952： 土壤微生物分离计数的方法 - ？
尉迟贾复方： 别费劲了 专家分离 也要做枯燥的试验 我告诉你吧 做不同的培养基,先分离 需氧型和厌氧型,再反复的培养分离不同的菌落. 楼上的方法,土壤都能让你 做成金子 你也分离不完.

井冈山市19118997952： 如何对土壤中细菌、放线菌及霉菌数量进行测定,要求设计实验方案!求指点,谢谢啦! - ？
尉迟贾复方： 【实验内容及步骤】 一、分离 1. 制备土壤悬液及系列稀释液 称取土壤1g,放入99mL无菌水的三角瓶中,振荡10min,即为稀释10-2的土壤悬液.另取装有无菌试管5支,用记号笔编上10-3、10-4、10-5、10-6 、10-7 .在每只试管中用无菌吸管...

井冈山市19118997952： 请高手帮忙介绍下这个实验.检测土壤中细菌总数 的实验 具体点哦 - ？
尉迟贾复方：[答案] 采样(装在消毒的器皿中,封好,尽量不与外界接触)取土样稀释100倍(取1g土,加99毫升无菌水)然后稀释(10-1000000等倍数,就是稀释平板计数法)涂平板(每个平板加入稀释的0.1毫升土壤稀释液)过几天计数(选取一个合...

井冈山市19118997952： 有没有测定土壤中微生物数量的标准方法啊?最好是国家标准方法,行业标准方法也可以 - ？
尉迟贾复方：[答案] 《土壤微生物研究原理与方法》 主编林先贵 高等教育出版社 2010 这本书应该是最新的了,我做实验用的就是这本

井冈山市19118997952： 用来测定细菌生长量的直接计数法和间接计数法一般采用什么具体的方法 - ？
尉迟贾复方： 显微镜直接计数法和稀释平板计数法是测定微生物数量的常用方 法. 直接计数法中常用的是显微镜直接计数法,这种方法是先将待 测样品制成悬液,然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数(图1- 3-1).根据在显微镜下观察到的微生物数...