检测食品化验菌落总数的实验步骤更原理

食品检验为什么要测定细菌菌落总数?实验操作如何使数据可靠?~

菌落总数测定的意义
1、判定食品被细菌污染的程度及卫生质量。
2、预测食品存用的期限长短。
3、了解细菌在食品中的繁殖动态。
4、是对样品进行卫生学总评价的综合依据。
检验注意事项
1、向平皿倾注液体时，平皿仅微微开启即可；
2、吸管进出瓶子或试管时，吸管口不得触及瓶口、管口的外围部分；
3、吸管插入试样液内的深度不得小于2.5cm,调整时要使管尖与容器内壁紧贴;
4、进行稀释时,吸管口不得与稀释液接触;
5、检样从开始稀释到倾注最后一个平皿所用时间不宜超过20min.
6、培养液和检液在培养皿内要摇匀；
7、培养液倾注培养皿时温度要在45摄氏度，以免烫死菌落。

食品中细菌总数和菌落总数的测定方法如下：
平板培养计数法

实验方法原理
菌落总数是指食品经过处理，在一定条件下培养后，所得1 g或1 ml检样中所含细菌菌落总数。菌落总数主要作为判别食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。菌落总数并不表示样品中实际存在的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。 实验材料
琼脂培养基 食品检样
试剂、试剂盒
乙醇生理盐水氢氧化钠溶液


仪器、耗材
电热恒温培养箱、冰箱、恒温水浴锅、托盘、天平、电炉、吸管、广口瓶、三角瓶、玻璃珠、平皿、试管、试管架、酒精灯、均质器、乳钵、灭菌刀、剪刀、灭菌镊子、酒精、棉球、玻璃、蜡笔、登记薄


实验步骤
一、检验程序
菌落总数检验程序见图5—1
二、检样稀释及培养
1. 以无菌操作，将检样25 g(或25 mL)剪碎以后，放于含有225 mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内预先置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8 000 r／min—1 0000 r／mln的速度处理1 min做成1：10的均匀稀释液。
2. 用1 mL灭菌吸管吸取1：10稀释液1 mL，沿管劈徐徐注入台有9 mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液，下同)，振摇试管混合均匀，做成1：100的稀释液。
3. 另取1 mL的灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1 mL灭菌吸管。
4. 根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择2—3个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。
5. 稀释液移入平皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基[可放置在(45土1) ℃水浴锅内保温注入平皿15 mI一20 mL，并转动平皿位混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1 mL稀释液(不含样品)的灭菌平皿内作空白对照。
6. 待琼脂凝固后，翻转平板，置(36土1) ℃恒温箱内培养(48土2) h取出板内菌落数目，乘以稀释倍数，即得I g(1 mL)样品所含菌落总数。

三、菌落计算方法
1. 平板菌落数的选择
选取菌落数在30一300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，选取两个平扳平均数．其中一个平板有较大片状菌落生长时．则不宜采用，而应以无片菌落生长的平板计数作为该稀释度的菌落数。若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布2 fB均匀，可计算半个平板后乘2 U代表整个平皿菌落数。
2. 稀释度的选择
（1）应选择平均菌落数在30一300之间的稀释度，乘以稀释倍效，报告之(见表5-2例1)。
（2）若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30一300之间，则视二者之比如何来决定。若其比值小应报告其平均数：若比值大于2，则报告其中较小的数字(见表5-2例2、例3)。
（3）若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表5-2例4)。
（4）若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌范数乘以稀释倍数报告之(见表5-2例5)。
（5）若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告之〔见表5-2例6〕。
（6）若所有稀释度的平均菌落数均不在30一300之间，其中一部分大于300或小于30时，近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表5-2例7)。
3. 菌落数的报告
菌落数在100以刚t1按其实有数报告；大于100时，用二位有效数字，在二位有效数字后面的数字，以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面的0的个数，可用10的指数来表示，见表5-2“报告方式”一栏。

注意事项
1. 平板培养计数法只能检出生长的活菌，不能检出样品中全部的细菌数，总是比实际生存在食品中的细菌数要少，这是因为食品中存在多种细菌，它们的生活特性各异，不可能在统一培养条件下全部生长出来。但是，仍能借此评定整个食品被细菌污染的程度，所以目前一般食品的卫生检验中都普遍采用这种方法。
2. 平板菌落计数测定食品中的菌落总数，一般均采用中温培养，特别是已属于直接供食用的制成食品，因为这些食品卫生的要求，是严格防止消化道传染病病原菌和食物中毒病原菌污染，这些病原菌都属于嗜温性菌，因而测定细菌数时，采用中温培养是比较合理的。

其实菌落总数和大肠菌的测定方法、步骤都差不多，只是一个是用培养皿一个是用试管

1 样品的稀释
固体和半固体样品：称取 25 g 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质 1 min～2 min，或放入盛有 225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min～2 min，制成 1:10 的样品匀液。
液体样品：以无菌吸管吸取 25 mL 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成 1:10 的样品匀液。
3 用 1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取 1:10 样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于盛有 9 mL 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用 1 支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成 1:100 的样品匀液。
4 制备 10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用 1 次1 mL 无菌吸管或吸头。
5 根据对样品污染状况的估计，选择 2 个～3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行 10 倍递增稀释时，吸取 1 mL 样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取 1 mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。
6 及时将 15 mL～20 mL 冷却至 46 ℃的平板计数琼脂培养基（可放置于 46 ±1 ℃℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。
7培养 :待琼脂凝固后，将平板翻转，36 ±1 ℃℃培养48 h±2 h。水产品 30 ±1 ℃℃培养 72 h±3 h。 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约 4 mL），凝固后翻转平板， 条件进行培养。
8 菌落计数
可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以落
形成单位（colony-forming units，CFU）表示。
9 选取菌落数在 30 CFU～300 CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于 30 CFU的平板记录具体菌落数，大于 300 CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。
10 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以代表一个平板菌落数。
11 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。

你这个问题就问的很不专业~~所以没有办法给你准确答复

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