检测食品化验菌落总数的实验步骤更原理
菌落总数测定的意义
1、判定食品被细菌污染的程度及卫生质量。
2、预测食品存用的期限长短。
3、了解细菌在食品中的繁殖动态。
4、是对样品进行卫生学总评价的综合依据。
检验注意事项
1、向平皿倾注液体时,平皿仅微微开启即可;
2、吸管进出瓶子或试管时,吸管口不得触及瓶口、管口的外围部分;
3、吸管插入试样液内的深度不得小于2.5cm,调整时要使管尖与容器内壁紧贴;
4、进行稀释时,吸管口不得与稀释液接触;
5、检样从开始稀释到倾注最后一个平皿所用时间不宜超过20min.
6、培养液和检液在培养皿内要摇匀;
7、培养液倾注培养皿时温度要在45摄氏度,以免烫死菌落。
食品中细菌总数和菌落总数的测定方法如下:
平板培养计数法
实验方法原理
菌落总数是指食品经过处理,在一定条件下培养后,所得1 g或1 ml检样中所含细菌菌落总数。菌落总数主要作为判别食品被污染程度的标志,也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态,以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。菌落总数并不表示样品中实际存在的所有细菌总数,菌落总数并不能区分其中细菌的种类,所以有时被称为杂菌数,需氧菌数等。 实验材料
琼脂培养基 食品检样
试剂、试剂盒
乙醇生理盐水氢氧化钠溶液
仪器、耗材
电热恒温培养箱、冰箱、恒温水浴锅、托盘、天平、电炉、吸管、广口瓶、三角瓶、玻璃珠、平皿、试管、试管架、酒精灯、均质器、乳钵、灭菌刀、剪刀、灭菌镊子、酒精、棉球、玻璃、蜡笔、登记薄
实验步骤
一、检验程序
菌落总数检验程序见图5—1
二、检样稀释及培养
1. 以无菌操作,将检样25 g(或25 mL)剪碎以后,放于含有225 mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内预先置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。固体检样在加入稀释液后,最好置灭菌均质器中以8 000 r/min—1 0000 r/mln的速度处理1 min做成1:10的均匀稀释液。
2. 用1 mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1 mL,沿管劈徐徐注入台有9 mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液,下同),振摇试管混合均匀,做成1:100的稀释液。
3. 另取1 mL的灭菌吸管,按上项操作顺序作10倍递增稀释液,如此每递增稀释一次,即换用1支1 mL灭菌吸管。
4. 根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计,选择2—3个适宜稀释度,分别在作10倍递增稀释的同时,即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内,每个稀释度作两个平皿。
5. 稀释液移入平皿后,应及时将凉至46℃营养琼脂培养基[可放置在(45土1) ℃水浴锅内保温注入平皿15 mI一20 mL,并转动平皿位混合均匀,同时将营养琼脂培养基倾入加有1 mL稀释液(不含样品)的灭菌平皿内作空白对照。
6. 待琼脂凝固后,翻转平板,置(36土1) ℃恒温箱内培养(48土2) h取出板内菌落数目,乘以稀释倍数,即得I g(1 mL)样品所含菌落总数。
三、菌落计算方法
1. 平板菌落数的选择
选取菌落数在30一300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板,选取两个平扳平均数.其中一个平板有较大片状菌落生长时.则不宜采用,而应以无片菌落生长的平板计数作为该稀释度的菌落数。若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布2 fB均匀,可计算半个平板后乘2 U代表整个平皿菌落数。
2. 稀释度的选择
(1)应选择平均菌落数在30一300之间的稀释度,乘以稀释倍效,报告之(见表5-2例1)。
(2)若有两个稀释度,其生长的菌落数均在30一300之间,则视二者之比如何来决定。若其比值小应报告其平均数:若比值大于2,则报告其中较小的数字(见表5-2例2、例3)。
(3)若所有稀释度的平均菌落数均大于300,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表5-2例4)。
(4)若所有稀释度的平均菌落数均小于30,则应按稀释度最低的平均菌范数乘以稀释倍数报告之(见表5-2例5)。
(5)若所有稀释度均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数报告之〔见表5-2例6〕。
(6)若所有稀释度的平均菌落数均不在30一300之间,其中一部分大于300或小于30时,近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表5-2例7)。
3. 菌落数的报告
菌落数在100以刚t1按其实有数报告;大于100时,用二位有效数字,在二位有效数字后面的数字,以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面的0的个数,可用10的指数来表示,见表5-2“报告方式”一栏。
注意事项
1. 平板培养计数法只能检出生长的活菌,不能检出样品中全部的细菌数,总是比实际生存在食品中的细菌数要少,这是因为食品中存在多种细菌,它们的生活特性各异,不可能在统一培养条件下全部生长出来。但是,仍能借此评定整个食品被细菌污染的程度,所以目前一般食品的卫生检验中都普遍采用这种方法。
2. 平板菌落计数测定食品中的菌落总数,一般均采用中温培养,特别是已属于直接供食用的制成食品,因为这些食品卫生的要求,是严格防止消化道传染病病原菌和食物中毒病原菌污染,这些病原菌都属于嗜温性菌,因而测定细菌数时,采用中温培养是比较合理的。
1 样品的稀释
固体和半固体样品:称取 25 g 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000 r/min~10000 r/min 均质 1 min~2 min,或放入盛有 225 mL 稀释液的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打 1 min~2 min,制成 1:10 的样品匀液。
液体样品:以无菌吸管吸取 25 mL 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成 1:10 的样品匀液。
3 用 1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取 1:10 样品匀液1 mL,沿管壁缓慢注于盛有 9 mL 稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用 1 支无菌吸管反复吹打使其混合均匀,制成 1:100 的样品匀液。
4 制备 10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次,换用 1 次1 mL 无菌吸管或吸头。
5 根据对样品污染状况的估计,选择 2 个~3 个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),在进行 10 倍递增稀释时,吸取 1 mL 样品匀液于无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿。同时,分别吸取 1 mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。
6 及时将 15 mL~20 mL 冷却至 46 ℃的平板计数琼脂培养基(可放置于 46 ±1 ℃℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀。
7培养 :待琼脂凝固后,将平板翻转,36 ±1 ℃℃培养48 h±2 h。水产品 30 ±1 ℃℃培养 72 h±3 h。 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时,可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基(约 4 mL),凝固后翻转平板, 条件进行培养。
8 菌落计数
可用肉眼观察,必要时用放大镜或菌落计数器,记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以落
形成单位(colony-forming units,CFU)表示。
9 选取菌落数在 30 CFU~300 CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于 30 CFU的平板记录具体菌落数,大于 300 CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。
10 其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数;若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘以代表一个平板菌落数。
11 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时,则将每条单链作为一个菌落计数。
你这个问题就问的很不专业~~所以没有办法给你准确答复
食品中细菌总数和菌落总数是怎么样测定的
琼脂培养基 食品检样 试剂、试剂盒 乙醇生理盐水氢氧化钠溶液 仪器、耗材 电热恒温培养箱、冰箱、恒温水浴锅、托盘、天平、电炉、吸管、广口瓶、三角瓶、玻璃珠、平皿、试管、试管架、酒精灯、均质器、乳钵、灭菌刀、剪刀、灭菌镊子、酒精、棉球、玻璃、蜡笔、登记薄 实验步骤 一、检验程序 菌落总数...
如何检测菌落总数
检验方法参见:GB4789.2-94 《中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物学检验 菌落总数测定》SN0168-92 《中华人民共和国进出口商品检验行业标准 出口食品菌落计数》三、说明 (一)样品的处理和稀释:1.操作方法:以无菌操作取检样25g(或25ml),放于225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶...
食品检验为什么要测定细菌菌落总数
1 目的 1 学习并掌握细菌的分离和活菌计数的基本方法和原理 2 了解菌落总数测定在对被样品进行卫生学评价中的意义 2 原理 菌落总数是指食品经过处理,在一定条件下培养后,所得1g或1ml检样中所含细菌菌落总数。菌落总数主要作为判别食品被污染程度的标志,也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态...
关于菌落总数测定
稀释因子d是指第一次进行菌落总数测定时的样品稀释倍数。在菌落总数测定中,为了得到可以计数的合适菌落数量,一般会将样品进行稀释。稀释因子d表示的就是第一次进行稀释时的稀释倍数。通过在不同稀释度的平板上进行菌落计数,并结合稀释因子d,最终可以计算出样品中的菌落数。美正生物菌落总数片比较不错,...
菌落总数的食品卫生学意义
评估食品的微生物质量 菌落总数可以作为评估食品微生物质量的一个重要指标。通常来说,食品中的微生物数量越多,其安全性就越低。因此,通过测定菌落总数可以了解食品中微生物的数量及其卫生状况,进而评估食品的安全性。检验食品加工条件 菌落总数还可以用来检验食品加工条件的卫生状况。加工过程中,如果卫生...
食品细菌污染的指标及其卫生学意义是什么
食品细菌污染的评价指标及卫生学意义——菌落总数 1. 菌落总数是指在一定条件下(如普通营养琼脂平板、35-37℃、pH7.4-7.6、24±2小时)培养后,每毫升(克)食品样本中所含的菌落数量。2. 该指标仅反映需氧性、中温生长的细菌数量,不包括嗜冷菌、嗜热菌、特殊营养需求的细菌,以及死亡的细菌。
菌落总数菌落总数(colonies number)介绍
菌落总数在食品卫生评估中具有双重作用:一是检测食品污染程度,二是观察细菌在食品中的繁殖动态。菌落总数过高,意味着食品的卫生状况堪忧,可能影响食品营养,加速腐败,甚至导致消费者健康风险,如引发肠胃疾病和消化不适。然而,菌落总数并非仅指致病菌,它还包括有益菌如乳酸菌。尽管有益菌对健康有益,但...
菌落总数的计算方法举例说明
菌落总数是一种衡量食品、水源、土壤等中微生物数量的指标。其中最常用的方法是平板计数法。下面以菌落总数的计算方法为例进行说明:1. 准备工作:将需要检测的样品取适量加入生理盐水中,进行搅拌均匀。2. 筛选平板:选择适合的培养基,熔化后待温度适宜后,将样品倒入平板里面,摇晃平板使培养基均匀分布...
菌落总数的测定
基本操作一般包括:样品的稀释、倾注平皿、培养48小时、计数报告。国内外菌落总数测定方法基本一致,从检样处理、稀释、倾注平皿到计数报告无何明显不同,只是在某些具体要求方面稍有差别,如有的国家在样品稀释和倾注培养进,对吸管内液体的流速,稀释液的振荡幅度、时间和次数以及放置时间等均作了比较具体...
食品中菌落总数的测定步骤主要为
菌落总数检测一般步骤为:采样 — 样品制备与稀释 — 倒平板 — 涂布平板 — 倒置培养 — 菌落计数 — 计算菌落总数 样品制备,需要对样品进行均质,根据客户需要检测的样品不同。WIGGENS提供不同的均质设备,如均质机,拍打式均质器等;样品的稀释,国标中采用1:10的十倍稀释方法,SOCOREX提供各种手动...
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