如何检测菌落总数

~ 菌落总数的测定，一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，计算出每克（或每ml）原始样品中所含细菌菌落总数。
　　基本操作一般包括：样品的稀释－－倾注平皿－－培养48小时－－计数报告。
　　国内外菌落总数测定方法基本一致，从检样处理、稀释、倾注平皿到计数报告无何明显不同，只是在某些具体要求方面稍有差别，如有的国家在样品稀释和倾注培养进，对吸管内液体的流速，稀释液的振荡幅度、时间和次数以及放置时间等均作了比较具体的规定。
　　检验方法参见：
　　GB4789.2-94 《中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物学检验 菌落总数测定》
　　SN0168-92 《中华人民共和国进出口商品检验行业标准 出口食品菌落计数》
三、说明
（一）样品的处理和稀释：
　　1．操作方法：以无菌操作取检样25g（或25ml)，放于225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振要或研磨制成1：10的均匀稀释液。
　　固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000~10000r/min的速度处理1min，制成1：10的均匀稀释液。
　　用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液
的试管内，振摇试管混合均匀，制成1：100的稀释液。
　　另取1ml灭菌吸管，按上项操作顺序，制10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次即换用1支1ml灭菌吸管。
　　2．无菌操作：操作中必须有“无菌操作”的概念，所用玻璃器皿必须是完全灭菌的，不得残留有细菌或抑菌物质。所用剪刀、镊子等器具也必须进行消毒处理。样品如果有包装，应用75%乙醇在包装开口处擦拭后取样。
　　操作应当在超净工作台或经过消毒处理的无菌室进行。琼脂平板在工作台暴露15分钟，每个平板不得超过15个菌落。
　　3．采样的代表性：如系固体样品，取样时不应集中一点，宜多采几个部位。固体样品必须经过均质或研磨，液体样品须经过振摇，以获得均匀稀释液。
　　4．样品稀释误差：为减少样品稀释误差，在连续递次稀释时，每一稀释液应充分振摇，使其均匀，同时每一稀释度应更换一支吸管。
　　在进行连续稀释时，应将吸管内液体沿管壁流入，勿使吸管尖端伸入稀释液内，以免吸管外部粘附的检液溶于其内。
　　为减少稀释误差，SN标准采用取10mL稀释液，注入90mL缓冲液中。
　　5．稀释液：样品稀释液主要是灭菌生理盐水，有的采用磷酸盐缓冲液（或0.1％蛋白胨水），后者对食品已受损伤的细菌细胞有一定的保护作用。如对含盐量较高的食品（如酱油）进行稀释，可以采用灭菌蒸馏水。

菌落总数检测一般步骤为：

采样 — 样品制备与稀释 — 倒平板 — 涂布平板 — 倒置培养 — 菌落计数 — 计算菌落总数

样品制备，需要对样品进行均质，根据客户需要检测的样品不同。WIGGENS提供不同的均质设备，如均质机，拍打式均质器等；

样品的稀释，国标中采用1:10的十倍稀释方法，SOCOREX提供各种手动精密移液器，瓶口分液器，移液管控制器为液体操作提供了保证。

倒平板，使用的培养基为含有琼脂的固体培养基。培养基在配备的过程中需要经过煮沸和保温的步骤。WIGGENS红外加热磁力搅拌器，直接使用红外辐射方式进行加热，1L培养基只需要10分钟即可煮沸，极大节约了客户培养基制备时间。在倒平板之前，需要恒温培养基46±1 ℃， WIGGENS恒温水浴锅，可以为用户提供的温度控制和恒温条件；

涂布平板，培养基在培养皿中冷却成固态之后，将稀释后的样品用移液器取1mL,滴到培养基表面，用涂布棒涂匀。WIGGENS有专用的培养皿转盘，可以有效的将样品液均匀的涂布在培养基表面。

倒置培养，将涂布完毕的平板，放入恒温培养箱中进行培养，一般培养时间约为48h。WIGGENS恒温培养箱内容积50-140L各种规格的台式及落地式培养箱，先进的设计及数据接口，可以直接通过电脑编程控制及信息处理，非常适合规范化培养要求。

菌落数计算，经过48小时的培养之后，在培养基表面会长出菌斑，每个菌斑代表一个微生物。一般在培养皿中菌落数为30-300个之间，为有效菌落数。低于30个，会因为样本量不足，随机性大；超过300个，会因为菌落数太多，过于密集产生菌斑重叠等现象，不利于准确计数。WIGGENS菌落计数器，是带有非闪烁式环形光源，放大镜，压力传感器，计数笔等，可以让使用者轻松计数。

计算菌落总数，培养皿中的菌落数需要通过公式换算。 WIGGENS菌落计数器，配套软件可以直接通过压力传感器进行培养皿中菌落计数，通过软件内嵌程序直接计算出被检测样品中菌落总数。

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长宁区13217165971： 菌落总数如何检验啊? - ？
沙卿骨刺： 菌落总数的测定,一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液,然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合,在一定温度下,培养一定时间后(一般为48小时),记录每个平皿中形成的菌落数量,依据稀释倍数...

长宁区13217165971： 我是新手,想问一下微生物检验菌落总数测定具体操作步骤 - ？
沙卿骨刺：[答案] 我的那本微生物的书上有,但是太多了.我就偷懒一下,那个你先看看,若不行,我再翻书~ 7 操作步骤 7.1 检样稀释及培养 ... 必要时用放大镜检查,以防遗漏.在记下各平板的菌落数后,求出同稀释度的各平板平均菌落总数. 7.3 菌落计数的报告 7.3.1 ...

长宁区13217165971： 食品卫生微生物检验菌落总数测定 - ？
沙卿骨刺：[答案] 上食品伙伴网查吧,一般不同产品检测有一定的差异但大体方法都是一样的!.1 食品检样 3.2 培养基 平板计数培养基,无菌生理盐水 3.3 其它 无菌培养皿,无菌移液管,无菌不锈钢勺.4 流程 5 步骤 5.1 取样、稀释和培养 5.1....

长宁区13217165971： 细菌总数是怎么检验的? - ？
沙卿骨刺： 细菌总数是水质参数之一,指单位体积水中的细菌总量.其检验方法是:在玻璃平皿内,接种一毫升水样或稀释水样于加热液化的营养琼脂培养基中,冷却凝固后在37°C培养24小时,培养基上的菌落数或乘以水样的稀释倍数即为细菌总数.有...

长宁区13217165971： 如何测定容器中的菌落总数 - ？
沙卿骨刺： 得看你无菌的要求是什么样的. 如果要求完全不能有任何细菌(这种严格的要求一般只在医疗器械上),那么得使用无菌试验,而不能用菌落总数的操作方法了. 如果是日常生活用品(用来放吃的),那么可以参照国家公共场所卫生标准检验方法中公共场所茶具微生物检验方法细菌总数测定来操作.具体你可以搜索查看GB/T18204.2-2000 另外还可以根据GB15982物体表面细菌菌落总数测定方法来测定. 简单地说,就是: 平板上菌落的平均数(cfu)*稀释倍数/采样面积(cm^2)

长宁区13217165971： 细菌总数怎么检测? - ？
沙卿骨刺： 一般有两种方法,一种是比较泛泛而谈的,就是测一下菌液的OD600,大致获得细菌的生长数量,比如OD600=1.0时,标准菌株的细菌数是10^9个/mL.第二种就是比较精确的,也就是平板计数,这是最基本的,把菌液稀释以后,涂布于平板培养基上,培养18-24小时以后,菌落计数,再乘以你的稀释倍数,就能得到原菌液的细菌数

长宁区13217165971： 检验菌落总数、霉菌酵母菌、大肠菌群有哪些快速检测方法?最好是当今食品质检中常用的方法. - ？
沙卿骨刺：[答案] 酵母菌可以用血细胞计数板,细胞比较大. 其他的一般是梯度稀释培养,不太快

长宁区13217165971： 仪器设备表面菌落数检查. - ？
沙卿骨刺：[答案] 使用无菌的棉球,对设备的表面进行涂抹取样,然后进实验室进行菌落总数的检验.实验室一般对这方面的检验称为设备卫生涂抹实验.你可以到微生物检测实验室去咨询一下,实验室人员都有这方面的知识.

长宁区13217165971： 平板菌落计数法的检验方法 - ？
沙卿骨刺： 菌落总数的测定,一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液,然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合,在一定温度下,培养一定时间后(一般为48小时),记录每个平皿中形成的菌落数量,依据稀释倍数...